全 文 ： 万方数据
l期 李贵生等：三线闭壳龟18srRNA基因序列的测定 71
50℃水浴保温12h，然后用等体积酚，氯仿，异戊醇
抽提，l700g离心lO111in，根据界面蛋白量的多少，
可再抽提上清液1到2次：将上清液转入一新离心管
加l，2体积7．5m01．L-1的乙酸铵和2体积100％乙
二 ：ACACACGGCTACAGTGAAACTGCGAAT GCTCA?TAAATCAGTTATGGTTCCTTTG
6二 GTCGCTCCACGTACTTGGCTAACTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCCGACGAGC
12i GCTGACCTCCGGGGATGCGTGCATTTATCAGA CAAAACCAACCCGGGCTCGCCCGGCCG
18lCTTTGGTGACCTAGATAACCTCGGGCCGAT CACGCCCGCGTGGCGGCGAC AAAC‘rT
241 TCAAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTATGACCTGTGTCTACCATGGTGACCACGG
301G个AACGGGGAATC GGGTTCGATTCCGGAGA G AGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCA
36lAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAC2 C GACCCGGGGAGGTAGTGACGAAAAAT
42l AACAATACAGGACTCTTTCGAGGCCCTGTAAWGGAATGAG ACACTTTAAATCCTTTAA
48lCGAGGATCCATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAG
54lCGTATATTAAAGTTGCTGCAGTTAAAAAGCTC TAGTTGGATCTTGGGATCGAGCTGGCG
60lGTCCGCCGCGAGGCGAGCTAC GCCTGTCCCAGCCCCTBCCTCGGCGCTCCCTTGATG
661 CTCTTAACTGAGTGTCCT
圈1兰线闭宪龟18srRNA基因棱苷奠序列(5’一3’方向)
F酶1DNAsequemlng0f18SrRNAge耻0fCH口m们强$c如咖(5’一3’)
醇，1700g离心2Tnin；用70％乙醇洗一次，晾干，
溶解，存于．20℃备用。
1．4 PcR扩增及DNA测序
所用引物为：
18SF：5’一CAACCTGGTTGJ^TCCTGCCAOT一3
18SR：5’￡TGArCC瞰TGCAGdll℃ACCl：AC-31“。
PcR扩增总体积为50u1反应液中含loum引
物1ul，啦!u1．椰1．5pl，DNA模板100ng。
循环参数为94℃预变性2fnin，然后进行94℃变性40
s，55℃复性40s，72℃延伸90s共30个循环，最后
在72℃延伸5fnin。扩增后的产物经检测和纯化，在
中山大学测序。
2结果与讨论
据报道，18srRNA基因序列长度约1800bp，本
试验测序结果为678bp(图1)，只为18sr鼢怆基因
总长度的1，3多一些。究其原因为只应用了1对引物
和进行了一次PcR测序，尚无法将其全部序列测出。
从所测序列可知到，A为159，占23．5％；T为152，
占22．4％；G为181，占26．7％；c为186，占27．4％。
衄’碱基对为311，占45．9；GC碱i驭十为367，占54．1％。
DNA分子是由G，A，c，T4种碱基构成，为双
螺旋结构的长链状分子，生物体特定的遗传信息便包
含在特定的碱基排列顺序中，不同的物种其遗传性不
同，这种遗传上的差异便表现在这4种碱基排列顺序
的变化之中，这是生物遗传多样性的基础。比较物种
间DNA分子的差异来鉴别物种就是DNA分子遗传标
记鉴别。
在真核生物中，DNA分子的信息含量巨大，据目
前所知，各种基因所占基因组DNA的比例最多也不
会超过20％。因此，在DNA分子上．有编码与物种
存活密切相关的基因区域、编码与物种存活不十分密
切相关的基因区域和非编码基因区域。基因组DNA
的这些不同区域在生物进化过程中所受到的选择压力
不同，前者所受选择压力大，表现出高度的保守，后
者所受选择压力小，表现出较大的变异。正是由于这
种DNA分子不同区域承受的选择压力不同，使得
DNA分子的不同区域有不同程度的差异。因此，我们
能够选择适当的DNA分子遗传标记，在属、种、亚
种、居群或个体水平上对研究对象进行鉴别””。在诸
多的生物大分子中，DNA分子较蛋白质、同功酶等有
较高的化学稳定性。在陈旧标本中所保存下来的DNA
仍能够用于DNA分子遗传标记的研究，特别是自80
年代中期聚合酶链式反应(Polymerasech in
Reaction，简称PcR)技术的建立并得到发展以来，
人们甚至可以从数千年前遗留下来的的古代骨骼标本
中提得微量的DNA，经PCR扩增后对其特定的DNA
片段进行分子遗传标记的研究。由于DNA分子所载
信息量巨大．并且相对稳定，PcR技术具有高速、高
效和特异性高等特点，因此用DNA分子遗传标记来
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三线闭壳龟18S rRNA基因序列的测定
作者： 李贵生， 贾宗剑， 方堃， 唐大由
作者单位： 暨南大学生物工程学系,广州,510632
刊名： 生态科学
英文刊名： ECOLOGIC SCIENCE
年，卷(期)： 2003,22(1)
被引用次数： 2次

参考文献(11条)
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引证文献(2条)
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