全 文 ：第 27卷 ,第 3期 光　谱　实　验　室 Vo l . 2 7 , No . 3
2 0 1 0年 5月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory May , 2 0 1 0
紫外分光光度法测定路边青中多酚含量①
① 湖南省科技厅科技计划项目 ( 2008F J3077) ;湖南省大学生创新性实验计划项目 (湘教通 [2009 ]320号 )
② 联系人 ,电话: ( 0743) 8563911(办 ) ; E-mai l: ouyang1227@ 126. com
作者简介:欧阳玉祝 ( 1956— ) ,男 ,湖南省宁远县人 ,教授 ,硕士 ,主要从事精细化工和天然产物开发的研究工作。
收稿日期: 2009-07-29;接受日期: 2009-09-21
欧阳玉祝②　吕程丽　匡友元
(吉首大学化学化工学院　湖南省吉首市人民南路 120号　 416000)
摘　要　用紫外分光光度法测定了路边青中多酚含量 ,并对实验结果进行了方法学考查。实验测得路
边青中多酚含量为 1. 7293% ,平均加标回收率为 99. 4% ,加标回收的 RSD为 1. 7%。精密度、重复性和稳定
性分析的相对标准偏差分别为 0. 29% 、 0. 41%和 0. 35%。
关键词　路边青 ;多酚 ;紫外分光光度法
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2010) 03-1055-04
1　引言
中草药中多酚的含量分析主要有液相色谱法、红外光谱法、分光光度法等。雷昌贵等对食品中
多酚化合物的测定方法进行了综述 [1 ] ;罗世榕等用高效液相色谱分析了茶叶中多酚类物质的含
量 [2 ] ;孙耀国等用近红外光谱法测定了绿茶中咖啡酸和茶多酚的含量 [3 ]。路边青 ( Herba gei )为蔷
薇科多年生草本科植物柔毛路边青 (Geum japonicum Thunb. var . chinese F . Bolle )的干燥全株 ,性
味苦、辛寒 ,具有补虚益肾 ,活血解毒之功效 ,可用于治疗头晕目眩、四肢无力、遗精阳痿、表虚感冒、
咳嗽吐血、虚寒腹痛、月经不调、疮肿骨折等症 [4, 5 ]。目前主要作为中草药用于临床 ,对路边青的活性
成分提取与分析的研究报道很少。高玉琼等用 GC-M S对水蒸气蒸馏法提取的柔毛路边青挥发油的
化学成分进行了分析 [6 ]。刘训红等测得大青叶中 4-( 3H)-喹啉酮的含量为 27. 5μg /g [7 ]。本文以湖南
吉首市凤凰县的路边青为原料 ,用紫外分光光度法测定路边青超声提取液中的多酚含量 ,并进行方
法学考察。
2　实验部分
2. 1　仪器及试剂
UV-2450紫外分光光度计 (日本岛津公司 ) ; KQ-250E型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限
公司 ) ; S HB-III循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司 ) ; FA2104N分析天平 (上海民桥
精密科学仪器有限公司 ) ; ZD-4调速多用振荡器 (江苏环保仪器厂 )。
路边青采自吉首市凤凰县 ,样本采回后经洗净、真空干燥、粉碎到 20目左右备用 ; D-101型大
孔吸附树脂 (天津市光复精细化工研究所 ) ;无水乙醇、石油醚、浓盐酸、磷酸氢二钠、没食子酸、酒石
酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸二氢钾等均为国产分析纯试剂。 实验用水为蒸馏水。
2. 2　实验方法
2. 2. 1　路边青多酚的提取
称取路边青粉末 1. 0g ,加入 40mL石油醚回流提取 2h,冷却后抽滤 ,滤渣晾干后加 100mL 60%
乙醇超声提取 1h,抽滤 ,滤液用 60%乙醇定容至 250mL。取滤液 100mL,加 25g经预处理的 D101大
孔吸附树脂 ,于恒温磁力搅拌器上吸附 3h,抽滤 ,树脂置于 100mL具塞锥形瓶中 ,用 80mL 60%乙醇
震荡解吸 4h,抽滤 ,滤液用 60%乙醇定容至 100mL,得路边青多酚提取液 ,用于多酚含量分析。
2. 2. 2　路边青多酚的紫外分光光度分析
2. 2. 2. 1　没食子酸标准溶液的配制
精确吸取 10. 00mg /mL没食子酸标准母液 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0、 7. 0、 8. 0、 9. 0、 10. 0m L
分 别置于 100mL容量瓶中 ,加蒸馏水定容至刻度 ,摇匀 ,得浓度为 0. 10、 0. 20、 0. 30、 0. 40、 0. 50、
0. 60、 0. 70、 0. 80、 0. 90、 1. 00mg /mL的没食子酸标准溶液。
2. 2. 2. 2　没食子酸校准曲线的绘制
分别移取 2. 2. 2. 1中标准溶液 2mL置于 10个 25mL容量瓶中 ,加 4mL蒸馏水、 5mL酒石酸亚
铁溶液 ,混匀后用 pH值为 7. 5的磷酸盐缓冲液定容至刻度 ,以蒸馏水代替待测液作空白对照 ,用分
光光度计测波长 543nm处的吸光度 ,以吸光度为横坐标 ,浓度为纵坐标作图 ,并用计算机进行线性
回归 ,得回归方程和相关系数为:
C= 1. 7475A　　 r= 0. 9987
式中: C——没食子酸浓度 , mg /mL; A——吸光度。
结果表明 ,在 0. 10— 1. 00mg /mL范围内线性关系良好。
2. 2. 2. 3　路边青多酚的定量分析
取路边青提取液 2m L,按 2. 2. 2. 2方法测吸光度 ,结合回归方程计算多酚浓度。
3　结果与讨论
图 1　路边青提取液和没食子酸标准样的紫外光谱比较
3. 1　显色剂对路边青提取液的紫外光谱影响
由于天然产物的成分十分复杂 ,路边青提
取液的紫外光谱可能受各种成分的影响而发
生变化。为此 ,用路边青提取物和没食子酸标
准样为原料 ,用酒石酸亚铁法进行显色 ,在
200— 800nm范围内扫描 ,比较供试样品和标
准品在显色和不显色时的紫外光谱图 ,考查显
色剂对紫外光谱的影响。结果见图 1。
图 1结果表明 ,路边青提取液的紫外光谱
图与没食子酸一致 ,通过酒石酸亚铁法显色
后 ,供试样品和没食子酸标样都在543nm处出
现吸收峰 ,不显色的样品在可见光区没有吸
收 ,其他共存成分不会对分析产生干扰。因此 ,
本实验采用酒石酸亚铁法显色 ,测定 543nm处的吸光度进行定量分析。
1056 光谱实验室 第 27卷
图 2　显色时间对吸光度的影响
3. 2　显色时间对吸光度的影响
把路边青供试样品按 2. 2. 2. 2方法用酒石酸亚铁显
色后 ,放置一段时间 ,每间隔 5min取样测定吸光度 ,考查
显色时间对吸光度的影响和仪器的稳定性 ,结果见图 2。
图 2结果表明 ,在 60min时间内 ,路边青供试样溶液
的吸光度受显色时间影响较小 ,仪器的稳定性良好 ,其
吸光度约在 0. 158左右。
3. 3　路边青中多酚含量的测定
取路边青提取液 2m L,置于 25mL洁净比色管中 ,按
2. 2. 2. 2方法测吸光度 ,结合回归方程计算路边青中多酚含量。平行测定 5次 ,计算平均值 ,结果见
表 1。
表 1　路边青中多酚含量测定结果
序号 1 2 3 4 5 平均值 RSD(% )
多酚含量 (% ) 1. 7228 1. 7334 1. 7331 1. 7236 1. 7336 1. 7293 0. 32
　　表 1结果可见 ,路边青中多酚含量为 1. 7293% ,分析的 RSD为 0. 32% 。
3. 4　方法学考察
3. 4. 1　准确度分析
实验采用加标回收法测定分析的准确度。取 1. 0mL待测液 (含多酚 0. 2771mg ) ,按 2. 2. 2. 2方
法测其吸光度。用标准加入法 ,在测试样品中分别加入不同量的标液 ,考查分析方法的准确度 ,结果
见表 2。
表 2　路边青中多酚加标回收结果
序号 样液含量
( mg)
加标量
( mg)
测定值
( mg )
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
1 0. 2771 0. 2983 0. 5661 96. 9
2 0. 2771 0. 3977 0. 6709 99. 0
3 0. 2771 0. 4971 0. 7787 100. 9 99. 4 1. 7
4 0. 2771 0. 5965 0. 8687 99. 2
5 0. 2771 0. 6959 0. 9803 101. 0
　　表 2结果表明 ,加标回收率为 96. 9%— 101. 0% ,平均回收率为 99. 4% , RSD为 1. 7% (n= 5)。
3. 4. 2　精密度分析
取同一份供试品溶液 1m L置于 25mL洁净比色管中 ,按 2. 2. 2. 2方法测其吸光度。平行测定 5
次 ,考查分析方法的精密度 ,结果表明 ,多酚含量的 RSD为 0. 29% (n= 5)。
3. 4. 3　重复性实验
取同一批供试样品 5份 ,按 2. 2. 2. 2方法测定吸光度并计算多酚的含量 ,考查重复性实验的标
准偏差 ,结果表明 ,重复性实验分析结果的 RSD为 0. 41% (n= 5)。
3. 4. 4　稳定性实验
取一份样品按上述方法制成供试品溶液 ,在不同时间下取样按 2. 2. 2. 2方法测吸光度 ,考查多
酚分析的稳定性 ,结果表明 ,分析结果的稳定性良好 , RSD为 0. 35% (n= 7)。
1057第 3期 欧阳玉祝等:紫外分光光度法测定路边青中多酚含量
4　结论
以没食子酸为标准样品 ,采用酒石酸亚铁显色 ,用紫外分光光度法测得路边青中多酚的含量为
1. 7293% ,平均加样回收率为 99. 4% , RSD为 1. 7% 。实验数据的精密度高 ,重复性和稳定性好 ,相
对标准偏差分别为 0. 29% 、 0. 41%和 0. 35% 。
参考文献
[1 ]雷昌贵 ,孟宇竹 ,刘蒙佳等 .食品中多酚类化合物测定方法研究进展 [ J] .粮油食品科技 , 2007, 15( 4): 61— 63.
[2 ]罗世榕 ,薛佳 .茶叶中多酚类物质的高效液相色谱分离测试 [ J ].福建分析测试 , 2005, 14( 4): 2302— 2303.
[3 ]孙耀国 ,林敏 ,吕进等 .近红外光谱法测定绿茶中氨基酸、咖啡酸和茶多酚的含量 [ J] .光谱实验室 , 2004, 21( 5): 940— 943.
[4 ]刘塔斯 ,裔秀琴 .四种大青叶的生药研究 [ J].中药材 , 1986, 9( 4): 28— 29.
[5 ]国家中医药管理局 .中华本草 [M ] .上海:上海科学技术出版社 , 1999. 151— 153.
[6 ]高玉琼 ,王恩源 ,赵德刚等 .柔毛路边青挥发性成分研究 [ J ].生物技术 , 2005, 15( 2): 52— 54.
[7 ]刘训红 ,房克慧 ,潘金火 .四种大青叶中 4( 3H)喹啉酮的含量测定 [ J ].中草药 , 2000, 23( 7): 388— 389.
Determination of Polyphenol Content from Roadside Green
by Ultraviolet Spectrophotometry
OU YAN G Yu-Zhu　 LV Cheng-Li　 KUANG You-Yuan
(College of Chem istr y and Chemical Engineering , Jishou Universitr y, Jishou, Hunan 416000, P. R .Ch ina )
Abstract　 The content o f polyphenol w as analy zed by ul t ravio let spect rophotometry and
methodolog y o f experiment results was investigated. The resul ts showed tha t the content of
polyphenol f rom roadside g reen w as 1. 7293% . The recovery o f the average adding sample and i ts
RSD were 99. 4% , 1. 7% , respectiv ely. Relativ e standa rd dev iation o f precision, repeatabi li ty and
stabili ty analysis were 0. 29% , 0. 41% and 0. 35% , respectiv ely.
Key words　 Roadside Green; Polyphenol; Ult raviolet Spect ropho tometry
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1058 光谱实验室 第 27卷