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翻白草对CCl_4所致慢性肝损伤大鼠肝组织中SOD、MDA、GSH水平的影响



全 文 :翻白草对 CCl4 所致慢性肝损伤大鼠肝组织中
SOD、MDA、GSH水平的影响①
蔡 纲1,黄 平2,李绍民1
(1.佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003;2.都昌县新型农村医疗合作局,江西 都昌 332600)
摘要:目的:观察翻白草对 CCl4 慢性肝损伤大鼠肝组织 SOD、MDA和 GSH 的影响,验证其对 CCl4 慢性肝损伤抗氧化保
护作用。方法:分别设空白对照组、模型对照组、低剂量组、高剂量组。检测各组大鼠肝组织中 SOD、MDA 和 GSH 含量。结
果:翻白草可降低模型大鼠肝组织 MDA 作用,阻止 GSH、SOD 的消耗,提高 GSH、SOD 活性。结论:翻白草能够对抗大鼠肝组
织内 CCl4 引起过氧化反应,提高模型大鼠肝脏抗氧化能力,对肝脏细胞和功能有一定的保护作用。
关键词:翻白草;慢性肝损伤;四氯化碳
中图分类号:R285. 1 文献标识码:A 文章编号:1008 - 0104(2016)01 - 0033 - 02
翻白草是多年生草本植物,隶属蔷薇科,其根部
肥大、单数羽状复叶,全草皆可入药,适合生长于低
丘山坡和疏林下草地,在我国有比较广泛的分布黑
龙江、辽宁、江西、广东、陕西等省份均可生长。翻白
草,作为一种常用药材,其历史悠久,最早可追朔于
《救荒本草》。《本草纲目》亦有记载,称其鸡腿儿,
治吐血,下血,崩中,疟疾,痈疮。临床上翻白草煎剂
常用来治疗痢疾、出血性疾病等[1]。近代,随着中
医药学及其研究方法的发展,发现翻白草安全性好,
毒性极低[2],含有多种活性成分及作用。有研究发
现翻白草可改善 2 型糖尿病患者的胰岛素抵抗,能
很好促进肝细胞糖类物质的代谢,有显著的降低血
糖作用[3,4];张远荣等的研究结果表明翻白草中的
鞣质成分具有较好的体外抗氧化作用[5];李永明等
的研究提示翻白草可以提高高血脂大鼠血清中的抗
氧化物质活性[6];李忠秀等研究表明翻白草油可有
效抑制肝癌 HepG2 细胞的异常增殖[7]。综上,笔者
抛砖引玉,通过实验评价翻白草煎剂对 CCl4 所致慢
性肝损伤大鼠肝组织中 SOD、MDA、GSH 水平的影
响,探讨翻白草煎剂对肝脏的氧化保护作用,为翻白
草用于治疗肝脏疾病提供理论依据。
1 材料和方法
1. 1 实验动物分组、造模和处理
1. 1. 1 实验动物
Wistar大鼠,由佳木斯大学动物实验中心提供,
6 ~ 7 周龄,标准体重,80 只。
1. 1. 2 实验动物分组
适应性喂养 5d后,对实验动物进行分组。取随
机数字将其分成空白对照组、模型对照组,低剂量
组、高剂量组共四组,每组 20 只。
1. 1. 3 造模和处理
对上述四组分别做如下处理:模型对照组、低剂
量组和高剂量组:给予给予新鲜配制的 40%四氯化
碳玉米油溶液 1. 5mL·kg -1 bw腹腔注射;给予空白
对照组动物注射同等剂量的玉米油;各组均每三天
注射一次。处理组每日分别给予 0. 6mL /100g 体重
翻白草水煎剂灌胃,其中低剂量组使用 1. 0g /mL 浓
度溶液(相当于生药量 6g /kg 体重)、高剂量组使用
2. 0g /mL浓度溶液(相当于生药量 12g /kg 体重)。
正常对照组、模型对照组灌胃相同体积的生理盐水。
持续 8 周。
1. 2 药材和煎剂的制备
翻白草购于佳木斯大学附属第一医院门诊中药
局。称取翻白草干草 1kg水洗、浸泡,文火煎煮,过
滤、浓缩制成生药含量分别为 1. 0g /mL、2. 0g /mL的
溶液备用。
1. 3 取材和试剂
1. 3. 1 取材
于处理 8 周后,停止所有处理因素 48h,禁食不
禁水 12h后处死大鼠,取大鼠肝脏 0. 4g,经冰生理
盐水漂洗后,用滤纸拭干,称重,在冰浴的平皿上剪
碎,用手动匀浆器将其在冰生理盐水中制成含肝组
织 10%匀浆,低温离心,取上清液测定。
1. 3. 2 主要试剂
四氯化碳和市售玉米油配制的 30%四氯化碳
玉米油溶液。SOD 活性,GSH、MDA 含量测定试剂
盒购于南京建成生物工程研究所,上述测定按试剂
盒说明书操作进行。
1. 4 统计学方法
采用 SPSS1. 9 软件对检测数据做统计学处理,
均数采用 x ± s表示。数据满足正态分布,且方差齐
条件,采用方差分析,各组两两比较用 LSD检验。
2 结果
2. 1 实验动物情况
至实验结束,实验大鼠共死亡 18 只,存活 62
只,分别为空白对照组死亡 2 只、模型对照组死亡 6
只、低剂量组和高剂量组各 5 只。对存活大鼠按上
·33·HEILONGJIANG MEDICINE AND PHARMACY Feb. 2016,Vol. 39 No. 1
① 基金项目:佳木斯大学研究生创新基金项目,编号:LM2015 - 036。
作者简介:蔡纲(1982 ~)男,江西都昌人,在读硕士研究生。
通讯作者:李绍民(1966 ~)男,黑龙江佳木斯人,主任医师,教授,硕士研究生导师。E - mail:1255013304@ qq. com。
述方法采集数据,进行统计学处理。
2. 2 翻白草对大鼠肝组织 SOD活性的影响
与空白对照组比较,其余三组肝组织内 SOD 活
性均有不同程度下降(P < 0. 05)。和模型对照组比
较,翻白草低剂量组和高剂量组 SOD活性明显升高
(P < 0. 05)。翻白草煎剂的低剂量组、高剂量组处
理可以提高本模型中大鼠肝组织中 SOD含量。
2. 3 翻白草对大鼠肝组织 MDA含量的影响
与空白对照组比较,其余三组肝组织内 MDA
含量均有不同程度增加(P < 0. 05)。和模型对照组
比较,翻白草低剂量组和高剂量组 MDA 含量明显
减少(P < 0. 05)。翻白草煎剂的低剂量组、高剂量
组处理可以减少本模型中大鼠肝组织中 MDA 含
量。
2. 4 翻白草对大鼠肝组织 GSH含量的影响
与空白对照组比较,其余三组肝组织内 GSH 含
量均有不同程度减少(P < 0. 05)。和模型对照组比
较,不能认为翻白草低剂量组和模型对照组肝组织
中 GSH含量有差别 (P > 0. 05) ,可以认为翻白草
高剂量组 GSH含量增加 (P < 0. 05)。翻白草煎剂
的高剂量组处理可以增加本模型中大鼠肝组织中
GSH含量。
4 组大鼠肝组织中 SOD、MDA、GSH含量有差别
(P < 0. 05)。为明确空白对照组、模型对照组和处
理组间的差别用 LSD检验对其进行两两比较,见表
1 ~ 2。
表 1 翻白草对 CCl4慢性肝损伤大鼠肝脏 SOD、
MDA、GSH 的影响方差分析
检测指标 平方和 df 均方 F值 P值
SOD 组间 8951. 922 3 2983. 974 13. 270 0. 000
组内 13042. 210 58 224. 866
总数 21994. 133 61
MDA 组间 56. 170 3 18. 723 25. 876 0. 000
组内 41. 967 58 0. 724
总数 98. 137 61
GSH 组间 276. 352 3 92. 117 11. 186 0. 000
组内 477. 631 58 8. 235
总数 753. 984 61
表 2 翻白草对 CCl4慢性肝损伤大鼠肝脏 SOD、MDA、GSH 的影响(x ± s)
分 组 SOD U /mg prot MDA nmol /mg prot GSH mg /g prot
空白对照组 100. 15 ± 8. 80△ 3. 92 ± 0. 45△ 17. 42 ± 1. 79△
模型对照组 67. 47 ± 7. 55* 6. 50 ± 0. 60* 11. 77 ± 1. 30*
低剂量处理组 78. 67 ± 8. 18*△ 5. 61 ± 0. 40*△ 13. 38 ± 1. 57*
高剂量处理组 84. 53 ± 7. 32*△ 5. 03 ± 0. 38*△ 14. 57 ± 1. 31*△
* P < 0. 05 和空白对照组比较;△P < 0. 05 和模型对照组比较。
3 讨论
肝损伤的发生形式多样,发生机制复杂。CCl4
常用于诱导化学性肝损伤,40% CCl4 植物油溶液,
1. 5mL·kg -1 bw剂量腹腔注射,可诱导大鼠较为稳
定的慢性肝损伤[8]。四氯化碳进入体内后被肝脏
微粒体色素 P450 激活,形成活泼的三氯甲基和氯自
由基,与肝细胞溶酶体、微粒体、内质网的脂蛋白结
合,产生脂质过氧化作用,从而导致肝脏损伤[9]。
伴随着脂质过氧化过程的发生,相应的脂质过氧化
产物(如活性氧自由基、MDA等)也会增加,MDA 含
量测定常用于评价脂质过氧化程度,也可作为间接
评价细胞氧化损伤的指标[10]。SOD 活力维持在正
常水平,是保护肝脏机能所必须的,对预防、修复氧
化应激引起肝损伤中具有重要的作用,SOD 活力可
间接反应机体清除活性氧自由基(ROS)的能力[11]。
GSH 是生物体内一种很重要的抗氧化剂和自由基
清除剂,对维持细胞膜的结构和功能具有重大意义。
张丽等的研究示,GSH 有抗肝纤维化作用,且一定
的剂量依赖关系,随着 GSH 浓度的增加,抑制作用
更明显[12]。MDA、SOD 和 GSH 三指标的测定常相
互配合,用于评价机体氧化应激和抗氧化应激系统
平衡,或这种平衡失衡造成的氧化损伤状态。
本次实验研究结果表明,翻白草可以提高 CCl4
致肝损伤大鼠肝脏匀浆中 GSH 和 SOD 活性,减少
MDA的生成,从而提高本模型中大鼠肝脏抗氧化能
力,其作用机制可以认为翻白草对肝脏细胞和功能
有一定的保护作用。其抗氧化能力是否存在药物剂
量依赖关系,是否能对抗慢性肝损害所导致的肝纤
维化、肝硬化病情进展,还需要进一步的研究去证
实。
肝脏作为糖类代谢的主要器官,近年来,很多研
究都表明肝脏损伤导致的肝硬化、肝纤维化和糖尿
病之间有明显联系。翻白草还有促进肝脏糖类物质
代谢,调节血糖和胰岛素抵抗等作用,那么它的这些
作用与保护肝脏之间有没有联系?很明显,组织器
官机体功能的改善也能提高抗氧化能力。翻白草中
含多种活性成分,其作用机制和途径亦是多样。本
模型中大鼠肝内抗氧化物质的提高,可能既是护肝
机制,也是肝脏机体功能改善的结果,这需要更多的
研究去发现、挖掘。
参考文献:
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(下转第 36 页)
·43· 黑龙江医药科学 2016 年 2 月第 39 卷第 1 期
表 1 各组干预前后语言功能分级比较 例(n = 20,%)
组别 时间
语言功能
1 ~ 2 级 3 ~ 4 级 5 级
观察组 治疗前 17(85. 0) 3(15. 0) 0
治疗后 10(50. 0) 10(50. 0) 0
对照组 治疗前 16(80. 0) 4(20. 0) 0
治疗后 14(70. 0) 6(30. 0) 0
表 2 各组干预前后临床疗效比较(n = 20)
组别
临床疗效
基本痊愈 显效 有效 无效 有效率%
观察组 0 10 8 2 90
对照组 0 8 7 5 75
3 讨论
构音障碍越早治疗,效果越好,治疗方法越有
效,患者交流功能的恢复越好[9]。图片交换交流系
统是 1985 年由美国德纳瓦州孤独症学习计划的,是
专门为不能建立有效语言沟通的孤独症患儿建立的
另外一种交流方式。近年来 PECS 在孤独症患儿中
的应用得到迅速发展,研究表明,图片交换交流系统
可以改善孤独症患儿情绪、认知、注意力和语言沟通
能力,尤其可提高患儿沟通的自发性,以达到沟通的
目的[10 ~ 13]。目前国内尚未发现 PECS 在构音障碍
患儿康复护理中应用的临床研究报道,本次研究将
PECS引入康复护理活动中,作为主要的康复护理方
法和理论基础,每日针对不同的患儿制定个体化护
理方案,常规训练基础下,严格按照护理程序在每日
康复护理活动中运用图片交换交流系统对患儿进行
康复护理与训练。
本次研究中,对于每例患儿均严格遵守护理程
序进行康复护理,评估患儿患病情况,提出相应的诊
断,根据诊断列出具体护理计划,按步骤实施护理计
划,最后对患儿恢复情况进行评价。观察组患儿采
用以 PECS 为指导的新型康复护理,护理过程中,护
理人员需根据每例患儿的患病程度、恢复情况、配合
程度以及性格特点设计个体化护理方案。保持室内
适宜的温湿度,空气新鲜,劳逸结合,避免患儿劳累。
记录患儿的变化情况,包括患儿每天在常规训练和
以 PECS 为指导的新型康复护理中各方面的进步情
况,以便及时调整护理方案。补充营养,增强机体抵
抗力。加强心理护理,结合实际情况,给予患儿鼓励
和帮助,避免患儿产生抵触情绪,使其可以积极配合
每个训练阶段。需要鼓励和培训患儿家长共同参与
护理计划,使患儿在培训课的课余时间也可以接受
训练,加速进步。最终经过 3 个月的治疗实验,通过
数据统计比较得出,PECS对于提高患儿的语言表达
能力具有显著疗效。
由于病例人数相对较少,观测时间相对较短,故
得出结论存在一定片面性,仍需进一步研究。
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·63· 黑龙江医药科学 2016 年 2 月第 39 卷第 1 期