全 文 ：2006 年 6 月第 13 卷第 6 期 中国中医药信息杂志 ·41·
翻白草对糖尿病大鼠血管内皮细胞
一氧化氮合酶表达的影响
韩永明,袁 芳,陈泽斌,张六通
(湖北中医学院,湖北 武汉 430061)
摘要：目的 研究翻白草对糖尿病大鼠血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法 采用四氧嘧啶建
立糖尿病大鼠模型,造模成功后,给予翻白草水煎液灌胃,连续给药 4 周；采用组织化学技术和图像分析系统检测血
管内皮细胞 NOS 活性。结果 翻白草组大鼠血管内皮细胞 NOS 平均吸光度值显著高于模型对照组和实验对照组
(P <0.01),与正常对照组无差异(P >0.05)。结论 翻白草能有效防止 NOS 的破坏,提高 NOS 的活性,提示其对血管
内皮细胞有一定的保护作用。
关键词：翻白草；糖尿病；血管内皮细胞；一氧化氮合酶
中图分类号：R289.11 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2006)06-0041-02
Effect of Potentilla Discolour Bunge (PDB) on NOS Expression of the Vascular Endothelial Cells
of DM Rats HAN Yong-ming, YUAN Fang, CHEN Ze-bin, et al (Hubei College of TCM, Wuhan 430061, China)
Abstract：Objective To study the effect of Potentilla Discolour Bunge (PDB) on the NOS expression
of the vascular endothelial cells (VEC) of DM rats. Methods The DM rat model was established by
alloxan injected, and then the rats were treated with herb of PDB for 4 weeks continuously. The NOS
expression of VEC were assayed by histochemistry method and image analysis system. Result NOS OD
value of the PDB group was higher than that of model group and Glibenclamide group (P <0.01), and
very close to the value of the control group. Conclusion PDB can effectively prevent the damage of
NOS and improve its activity, thus it has some protective effects to VEC.
Key words：Potentilla Discolour Bunge；diabetes mellitus；vascular endothelial cells；nitric oxide
synthase
翻白草(PDB),又名天青地白草,属蔷薇科委陵菜属,为多
年生草本植物,全草及根入药；具有清热润燥、凉血解毒、止
血消肿、止痢之功效；多用于治疗痢疾、疟疾、痈肿、各种
出血[1]。然民间常作为偏方治疗糖尿病,多有良效。笔者研究
证实了该药具有明显的降低糖尿病大鼠血糖的作用[2]；且近
年有少量实验研究和临床报道进一步证实了该药的降血糖作
用[3-5]。本研究通过观察翻白草对糖尿病大鼠血管内皮细胞
(vascular endothelial cells,VEC)一氧化氮合酶(NOS)的影
响,旨在探讨其防治糖尿病血管病变的可能机制。
1 材料和方法
1.1 动物
Wistar 大鼠 40 只,体重 200～250 g,雌雄不限。于实验
前 1 周一次性购进,置于避强光、温暖、安静的环境中饲养,
室温 18～25 ℃,自由摄食饮水。
1.2 造模
采用四氧嘧啶(alloxan,ALX)制作糖尿病模型的方法进
行造模[6-8]。大鼠禁食 24 h 后,以 2.5%ALX (美国 Sigma 公司)
生理盐水溶液(现配现用)按 120 mg/(kg·d)剂量对大鼠行腹
腔注射,每日 1 次,连续 2 d。在造模 48 h 内,以葡萄糖水供大

基金项目：湖北省教育厅重点科研项目(2004X080)；湖北中
医学院科研课题
鼠饮用。造模后第5日测血糖(不禁食),以血糖 16.65 mmol/L
以上者为造模成功,造模成功率达 70%；若造模不成功者,仍
按上法补注 1 次,成功率达 100%。
1.3 分组及给药
随机选取 40 只大鼠中的 10 只作为正常对照组,其余 30
只大鼠按上述方法进行造模。成功后随机分为 3 组：模型对
照组、实验对照组、翻白草组,每组 10 只。正常对照组为正
常大鼠,不造模、不给药。模型对照组造模成功后,不治疗。
实验对照组造模成功后,予以优降糖 0.25 mg/(kg·d)灌胃,
每日 1 次,连续治疗 4 周。翻白草组造模成功后,予以翻白草
水煎液 15 g/(kg·d)灌胃,连续治疗 4 周,每天 1 次。
1.4 取材和制片
采用血管内皮细胞平铺技术[9]和组织化学方法[10]对组织
进行处理和制片。具体步骤如下。①固定：各组大鼠以 2%戊
巴比妥钠腹腔注射麻醉,迅速打开腹腔,取出腹主动脉,用
4 ℃生理盐水将其内血液冲洗干净,继而用 4 ℃ 4%多聚甲醛
溶液冲洗 5 min。小心剥去血管周围组织,然后沿血管长轴纵
向剪开,将其贴于滤纸上(内膜面向下),最后放入 4 ℃ 4%多
聚甲醛溶液中外固定 30 min。②浸糖：将固定后的腹主动脉
浸入 30%蔗糖溶液中,置于 4 ℃冰箱中 12 h。③清洁：将血
管放入 0.3% tritonPBS 溶液中,在脱色摇床上振动 30 min,
每隔 10 min 更换药液 1 次。④孵化：将血管放入孵化液中孵
·42· Chinese Journal of Information on TCM Jun 2006 Vol.13 No.6
化 90 min,温度保持在 37 ℃。孵化液的配制：0.3% triton PBS
溶液 10 mL,加入四唑氮蓝 2 mg,充分溶解；取该溶液 2 mL,
加入 2 mg NADPH-4Na；现配现用。⑤终止孵化：将血管移入
0.01 mmol/L PBS 溶液(pH7.4)中,在脱色摇床上振动 30 min,
每隔 10 min 更换药液 1 次。此时血管已被染成蓝色。⑥脱水：
梯度浓度酒精脱水。⑦贴片：将血管剪成3段,按顺序用16%火
棉胶溶液贴于火棉胶载玻片上(将洁净载玻片浸入16%火棉胶
溶液中,然后取出放入干燥器内干燥),自然干燥(约 60 min)。
⑧软化：将切片浸入 30%酒精中软化 30～60 min。⑨剥离、脱
水：小心揭去血管外膜、中膜,血管内皮层即保留在玻片上；
常规梯度浓度酒精脱水。⑩透明、封片：以石炭酸 2.5 g、甲
苯 25 mL、二甲苯 50 mL 混合液透明；中性树胶封片。
1.5 检测
镜下观察,并用图像分析软件检测其吸光度值。
1.6 统计学方法
本实验数据用—x±s 表示,t 检验进行处理。
2 结果
2.1 镜下观察
镜下观察(400×),正常对照组大鼠 VEC 染成蓝色,着色
较深,细胞膜、胞浆、胞核显示清楚,细胞边界清晰,提示其
NOS活性较强。模型对照组大鼠VEC细胞膜模糊,胞浆着色淡,
提示其 NOS 活性较弱。实验对照组大鼠 VEC 细胞膜、胞浆、
胞核显示清楚,细胞边界较清晰,着色浅于正常对照组。翻白
草组大鼠 VEC 着色较深,接近于正常对照组。
2.2 吸光度值
用千屏图像分析软件测定各组 VEC 的 NOS 平均吸光度值
(见表 1)。
表 1 各组大鼠 VEC 的 NOS 平均吸光度值(—x±s)
组别 n 平均吸光度值
正常对照组 30 0.2172±0.0190
模型对照组 30 0.1221±0.0180※
实验对照组 30 0.1503±0.0165※#
翻白草组 30 0.2215±0.0320#◆
注：与正常对照组比较,※P <0.01；与模型对照组比较,#P <0.01；
与实验对照组比较,◆P <0.01
3 讨论
糖尿病属于中医学“消渴”范畴。中医学认为,其病因主
要是先天禀赋不足、饮食失节、情志失调、劳欲过度；基本
病机是阴津亏损,燥热偏胜,以阴虚为本,燥热为标,两者互为
因果,阴愈虚则燥热愈盛,燥热愈盛则阴愈虚。其涉及脏腑主
要为肺、胃、肾三脏,尤以肾为关键。肺为燥热所伤,则不布
津而口渴多饮；脾胃受燥热灼伤,脾阴不足,胃火炽盛,则多食
善饥而形体消瘦；肾阴亏虚,肾失濡养,开阖固摄失权,故尿多
味甜。在治疗上,以清热润燥、养阴生津为基本治则。
本实验通过观察翻白草对糖尿病大鼠 VEC 形态结构的影
响,发现翻白草可以有效地保护 VEC,防止 VEC 的形态结构和
功能的损伤,从而可以起到防治糖尿病微血管病变的作用。但
是,翻白草是通过何种途径实现对 VEC 的保护,有待今后进一
步研究。
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(收稿日期：2005-03-15,编辑：华强)

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