全 文 ：第 5卷 第 2期 辽 宁 高 职 学 报 Vol.5, No. 2
2003年 4月 LIAONING HIGHER VOCATIONAL TECHNICAL INSTITUTE JOURNAL Apr. 2003
收稿日期：2003—01—18
作者简介：赵广德（1950—），男（满族），辽宁沈阳人，铁岭师范高等专科学校讲师。
文章编号：1009—7600（2003）02—0106—02


关于欧李组织培养的报告


赵广德
（铁岭师范高等专科学校，辽宁 铁岭 112000）

摘 要：根据技术开发和高职教育加强实践课教学的需要，我们在教学中进行了欧李的组织培养
实践工作，并初获成功，本文仅将实验过程如 MS 培养基的配制、外植体的处理及培养等做一总结，
以便为进一步探索提供科学依据。
关键词：MS培养基；欧李；外植体；培养；移栽
中图分类号：S184 文献标识码：B

欧李（Prunus humilis），蔷薇科，李亚科，李属。
落叶小灌木，高 0.5～1m，花白色至淡粉红色，单生或两
朵并生，直径约 1.5cm，与叶同时开放，果实红色，近球
形，直径 1～1.5cm，酸甜可食，核仁可入药，亦可栽培
供观赏。花期 4 月下旬至 5月，果期 8 月。辽宁山区普
遍有分布。如果能够对欧李进行驯化栽培，必将对丰富
果品种类、繁荣市场，满足人们需求起到积极作用。
几年前，我们曾提出过对欧李进行驯化栽培的课题，
并进行了驯化引种工作。但是，在对欧李的采集种子和
移植工作上，均感到有一定难度，因此没有能够进行大
面积的繁育工作。于是，我们把目光转移到利用组织培
养的方法来对欧李进行大面积繁育上来。但是，关于欧
李的组织培养技术，前人尚未有报导。因此，我们只能
靠自己摸索着进行。本着高职教育改革必须加强实践课
的要求，我们采用了教学、科研相结合的形式，即利用
实践课教学，让学生动手进行欧李的组织培养工作，并
初获成功。现报告如下：
一、实验室的建立
按照组织培养工作的要求，我们利用原有的实验室，
因陋就简，建立了组织培养准备室、接种室和培养室，
准备了高压灭菌锅、冰箱、接种箱、自动控温光仪、紫
外线灭菌灯、玻璃仪器、化学药品、各种操作工具等等。
为组织培养实验课的进行奠定了坚实的物质基础。
二、培养基的制备
（一）MS培养基母液的配制
1、大量元素母液的配制
分 别 称 取 NH4NO31650mg、 KNO31900mg 、 ?
CaCl2·2H2O440mg、MgSO4·7H2O 370mg、KH2PO4 170mg
并分别溶解后依顺序混合定溶，加蒸馏水至 1L。
2、微量元素的配制
用分析天平分别称取 KI 0.83mg、MnSO4·4H2O
22.3mg、 MgSO4· 7H2O 8.6mg、 Na2MoO4· 2H2O
0.25mg、CuSO4· 5H2O 0.025mg、 CoCl2· 6H2O
0.025mg，分别溶解于少量蒸馏水中，再依次加到一起，
加蒸馏水至 1L。
3、有机化合物的配制
用分析天平分别称取甘氨酸 2mg、盐酸硫胺素
B10.4mg，盐酸吡哆素 B6 0.5mg、肌醇 100mg，分别溶解
后混合定溶，加蒸馏水至 1L。
4、铁盐的配制
称取 7.45gNa2EDTA 和 5.57gFeSO4·7H2O 溶于 1L
水中。
5、植物激素的配制
称取 50mgNAA，溶于少量 95%酒精中，再加水至
100ml，称取 50mg 6-BA，用 3.65%的 HCI溶解后，再加
水至 100ml。
将上述配制好的溶液贴上标签，贮存于 2～4℃的冰
箱中待用。
（二）培养基的配制
按学生分组实验要求，我们每次配制 2L MS培养基，
即分别吸取大量元素母液 200mg，微量元素母液 20ml，
有机化合物母液 20ml，铁盐 10ml，NAA1ml，6-BA4ml，
最后加水至 2L。
然后将此溶液的 1/3 倒入不锈钢锅中，称取 25g 琼脂
（根据其纯净度不同有所增减）和 60g 蔗糖加入锅中加
热，并不断搅拌，防止锅底烧焦或沸腾溢出。待琼脂溶
解后，将其余溶液全部倒入锅中，搅拌均匀后，用 0.4%
的 NaOH或 3.65%的 HCl溶液调解 PH值至 5.8即可。
（三）培养基的分装与灭菌
培养基配制好后，趁热分装于 100ml 的三角瓶中，
每瓶液面高度在 2.5cm 左右。分装后用一层硫酸纸（衬
里）和一层聚丙烯塑料薄膜包扎瓶口。
培养基分装后，立即用高压锅灭菌。当压力升至
0.5kg/cm2时，打开排气阀排出锅内的冷空气，然后关闭
排气阀压力继续上升至 1.1kg/cm2时，锅内温度可达 121
℃，保持 15～20分钟，切断电源，缓慢放出蒸汽，当压
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力逐渐降至零后打开盖子，取出培养基，准备接种。
三、外植体的处理
1、取材：于欧李灌丛上选取发育良好的一年生枝条，
拿回实验室中用自来水冲洗干净后，将枝条剪成 1cm长
小段，每段带有一个侧芽。
2、消毒：将剪好的茎段用 75%的酒精浸渍几秒钟，
然后在 5%的次氯酸钠中浸渍 10 分钟，最后用蒸馏水冲
洗数遍。
四、接种
接种前，将接种室用福尔马林加少量高锰酸钾密闭
薰蒸，再用紫外线灭菌灯照射 20分钟，然后再将接种工
具及台面用 75%酒精擦拭消毒后，即可开始接种。
接种时，在接种箱内点燃酒精灯。要求学生按无菌
操作技术规范接种步骤及全过程。由于接种箱数量有限，
学生要轮流操作，必须用 75%的酒精对学生的手和接种
工具擦拭消毒，以免造成污染。由于欧李的侧芽很小，
枝条纤细，故采取带茎段接种的方法，即切取 3mm茎节
部分，上面带有侧芽，然后将其插入培养基上即可。
五、培养
将植入外植体的三角瓶放在培养室的搁架上，利用
自动控温光仪将温度控制在 25±2℃，每天保持光照 12
小时，20天左右即可成苗，30天时，苗高达 1cm，50天
时，苗高 4cm，具 10片叶，基部已丛生出 4～5株小苗。
培养出的幼苗既可用于继代培养，以获取大量试管
苗，亦可选取一部分进行生根培养。
六、继代增殖
继代增殖仍在培养室内进行。在接种箱内将试管苗
切成 3～5mm的茎段，转移到 MS+BA1+NAA0.1的培养
基上，在培养室原有的环境条件下，即可获得大量的欧
李幼苗。
七、生根培养
一般认为矿物元素浓度较高时有利于发展茎叶，而
较低时有利于生根。另外细胞分裂素（6-BA）用量过高
时，易引起生根困难。考虑到幼苗内仍会残留部分细胞
分裂素，因此，在配制生根培养基时，全部去掉了细胞
分裂素并采用较低浓度的生长素（ NAA），即
1/2MS+NAA0.1，但糖的用量仍需保持 30g/L。
在接种箱内切取 3cm 左右无根嫩茎转插到生根培养
基上，然后在培养室内将温度控制在 250C。每日光照 12
小时，经 3周即可生根。
八、小苗移植
当试管苗具有 3～5条根后即可移栽。移栽前，将试
管苗瓶口打开，放在实验室内光照充足处锻炼 3～5天，
使其适应环境。实验室温度应控制在 25℃左右。
培养土用粗沙+园田土（1︰3）混合而成，经高压灭
菌后，分装在小塑料袋中，整齐排列在实验室阳光充足
的台面上。
幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再植入到
小塑料袋中，移栽完毕浇透水，并用 0.1%多菌灵喷雾保
苗，罩上塑料薄膜，以保持尽可能大的湿度。以后每七
天喷一次灭菌剂，并加入 0.1%的尿素，以加快苗的成活
与生长。这样在室内保持一个多月后，就可移入田间正
常生长。
由于实验室条件和教学时数所限，我们只做了少量
的试验，至于发展成大规模生产工艺流程，则还需要更
进一步的探索和总结。但是，由于学生在学习了组织培
养理论的基础上，又通过实践，掌握了组织培养的全部
操作技术，这就为他们将来走上社会拓宽了就业途径，
也为他们从事组织培养工作奠定了坚实的基础。

参考文献：
[1] 李书心.辽宁植物志[M].沈阳:辽宁科学技术出版社.
[2] 陈振光.园艺植物离体培养学[M].北京:中国农业出版社.


（责任编辑，抚顺职院：韩少中）