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[ 收稿日期] 2005-01-08
[作者简介] 张颖 ,女 ,硕士 ,讲师 ,电话:0538-6229757 , E-mail:sd tazxl@eyou. com
高效液相色谱法测定翻白草中没食子
酸含量
张颖1 ,张立木2 , 高允升 1 ,齐永秀1 ,李同德1 , 王晓
丹1 　(1 .泰山医学院药学院 , 山东 泰安 271000;2. 泰安市
第一人民医院 ,山东 泰安 271000)
[ 摘要] 　目的:建立从翻白草中提取分离并测定没食子酸含
量的方法。方法:不同时间煎煮或甲醇超声处理后 , H PLC
法测定翻白草中没食子酸的含量。结果:在不同煎煮时间内
所测没食子酸的含量分别为0 . 178 3 , 0. 238 1 , 0. 223 8 mg
g -1 。结论:煎煮时间为 3. 0 h , 没食子酸含量最高。该方法
简便 、准确 , 精密度高。
[ 关键词] 　没食子酸;翻白草;高效液相色谱法;含量测定
[中图分类号] R927. 2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2006)03-0355-02
　　翻白草又名鸡腿儿 、反白蒿子 , 为蔷薇科植物翻白草
(Potentilla discolor Bunge)的带根全草。性平 , 味甘 、微苦。
清热解毒 ,消肿止血。 主治吐血 , 咳血 , 下血 , 妇女血崩 , 痢
疾 ,疟疾 , 疔疮肿毒[ 1]等。现代医学研究证明 , 翻白草具有抗
菌 、止泻和免疫抑制作用[2] 。近几年研究发现 ,翻白草具有
降血糖和抗肿瘤作用[ 3] 。其化学成分主要有鞣质 、黄酮[ 4] 、
原儿茶酸 、没食子酸等[ 5] , 其中没食子酸具有抗病毒作用[ 6] 。
翻白草中没食子酸的分离 、提取及其含量测定目前还未见报
道 ,本研究选出较好的提取分离方法和条件并采用 H PLC 法
测定没食子酸含量。
1　材料
高效液相色谱仪(美国 Water s 公司)。翻白草(安徽亳
州中药饮片厂 , 批号 20020316)经本院李同德教授鉴定;没
食子酸对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 0831-9501);
甲醇为色谱纯 ,水为注射用水。
2　方法
2. 1　色谱条件 　Water s symmetry shield TM RP18色谱柱
(3 . 9 mm×150 mm , 5 μm), 流动相:甲醇-0 . 1%磷酸溶液(15
∶85), 混匀 ,超声脱气后使用 , 流速:0. 8 m L min-1 , 进样量:
20 μL , 检测波长 273 nm , 柱温:室温。
2. 2　对照品溶液的配制　精密称取 6. 0 mg 没食子酸对照
品 , 20%甲醇溶液溶解并定容至 50 mL 量瓶中 , 得到 0. 12
g L -1的没食子酸对照液 。
2. 3　游离没食子酸供试液的制备　称取翻白草粉末(40 目)
0 . 537 0 , 0. 529 0 , 0 . 501 2 g , 分别放于锥形瓶 , 各移取 100
mL甲醇 ,准确称定甲醇重量 ,超声处理 30 min , 补足损失甲
醇重量 ,过滤 , 各精密吸取滤液 5 mL 于 25 mL 的量瓶中 ,用
水稀释至刻度 , 0 . 45 μm 微孔滤膜滤过 , 备用。
2. 4　水煎剂供试液的制备　精密称取翻白草 50 . 63 , 48 . 96 ,
51. 50 g , 加水煎煮 ,煎煮时间分别为 1. 5 , 3 . 0 , 5 . 0 h(煎煮 2
次), 过滤 ,滤液合并 , 置水浴浓缩至干 ,残渣用 80 m L甲醇超
声提取 30 min ,过滤 , 滤液用甲醇定容至 100 m L , 摇匀。精
密吸取 5 m L于 25 m L量瓶中 , 加入 4 mL 甲醇 ,用水稀释至
刻度摇匀 , 0 . 45 μm 微孔滤膜滤过 , 备用。
3　结果
3. 1　测定波长的选择　以 210 ～ 400 nm 作为吸收区间 ,结
果没食子酸在 273 nm 处有较大吸收 , 故选为测定波长。
3. 2　标准曲线的绘制　吸取0 . 12 g L -1的没食子酸对照液
0 . 2 , 0 . 4 , 0 . 6 , 0 . 8 , 1. 0 mL 于 10 mL 的量瓶中 ,用 20%的甲
醇液定容 ,摇匀 , 得到0. 024 ～ 0 . 12 g L - 1的系列溶液。用定
量进样环依次进样 20 μL 测定 , 以没食子酸的量为横坐标 ,
峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 计算回归方程为 Y =
6 . 158 113×106X +1 . 332 03×104 , r=0 . 999 9。 结果表明
没食子酸在0. 024 ～ 0. 12 g L - 1范围内线性关系良好。没食
子酸标准品色谱图见图 1。
图 1　没食子酸色谱图
A. 阴性样品;B. 样品;C . 对照品(保留时间为5. 238 min)
Fig 1　Chromatogram s of gal li c acid
A. negative sample;B. sample;C. stan dard (tR=5. 238 min)
3. 3　精密度考察　取对照品溶液重复进样, 对精密度进行日
内(2 , 4 , 6 , 8 , 10 h)考察 , RSD为1 . 65%, 满足实验测定条件。
3. 4　稳定性考察　取同一供试液分别在 0 , 2 , 4 , 8 , 10 h 内测
定 , RSD为3 . 4%。表明在 12 h 内测定基本稳定。 但每隔 1
d测其稳定性 , 发现没食子酸含量有较大差异。
3. 5　加样回收率考察　取已知含量的翻白草适量 , 精密称
定 ,加入没食子酸适量 , 按样品煎煮3. 0 h 测定下操作。测得
没食子酸平均回收率见表 1。
表 1　回收率试验(n=5)
Tab 1　Result o f recove ry(n=5)
已知量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
11. 849 2 2. 352 4 14. 092 8 95. 37
12. 261 2 2. 013 2 14. 268 5 99. 71
10. 564 6 1. 935 2 12. 502 1 100. 12 97. 73 1. 90
11. 869 0 2. 609 8 14. 396 8 96. 86
13. 554 3 1. 898 7 15. 387 9 96. 57
355 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 3期 Chin H osp Pharm J , 2006 Mar , Vol 26 , No. 3
3. 6　样品测定结果　见表 2 ,样品谱图见图 1。
表 2　不同煎煮时间样品含量测定结果(n=3)
Tab 2　Result o f sample in differ ent time(n=3)
煎煮时间 /h 没食子酸含量 /mg g- 1 平均含量 /mg g- 1 RSD/%
1.5 0.167 3 0. 180 3 0. 187 2 0. 178 3
3.0 0.221 0 0. 238 2 0. 254 9 0. 238 1 11.9
5.0 0.227 1 0. 215 5 0. 228 8 0. 223 8
4　讨论
通过甲醇超声和水煎煮两种提取方法比较发现 , 甲醇超
声提取液在没食子酸保留时间内无吸收 , 说明无游离没食子
酸存在。通过对不同时间煎煮液测定 , 结果显示以3 . 0 h 提
取液中没食子酸含量最高 ,当煎煮时间为5 . 0 h 时 , 没食子酸
含量降低。没食子酸为可水解鞣质的结构单元 , 其含量随提
取条件不同有较大差异。因此选择煎煮时间为3. 0 h。
通过日内精密度考察 , RSD为 1. 65%, 说明本方法具有
较高精密度。但通过日间稳定性考察 , 没食子酸结构在日内
相对稳定 ,能够保证实验测定。但日间稳定性有较大差异 ,
放置时间过长 ,溶液颜色渐成浅棕色 , 且有加深趋势 , 含量
随放置不同时间而有差异。本方法操作简便 , 结果准确 ,精
密度高 ,回收率好 , 是检测中药没食子酸含量的理想方法。
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[ 收稿日期] 2005-04-04
[作者简介] 谭建宁 ,女 ,本科 ,讲师,电话:13077736977 , E-mai l:rr8765@126. com
高效液相色谱法测定消炎利胆片中穿
心莲内酯含量
谭建宁 , 梁东梅　(广西中医学院药学院 ,广西 南宁 530001)
[ 摘要] 　目的:测定不同厂家及相同厂家不同批号消炎利胆
片中有效成分穿心莲内酯的含量。 方法:应用 RP-HPLC 法
测定 ,选用 CLC-ODS C18色谱柱 , 流动相为甲醇-水(60∶40),
检测波长 225 nm。结果:在0 . 548 4～ 6 . 032 4 μg 范围内 ,线
性关系良好(r=0 . 999 8), 平均加样回收率为97. 11%, RSD
为1. 14%。结论:不同厂家及相同厂家不同批号消炎利胆片
中有效成分穿心莲内酯的含量有较大差异。
[ 关键词] 　消炎利胆片;穿心莲内酯;高效液相色谱法
[中图分类号] R927. 2　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-
5213(2006)03-0356-02
　　消炎利胆片系由穿心莲 、溪黄草 、苦木等药材组成的复
方制剂 ,具有清热 、祛湿利胆之功效 ,临床上用于治疗急性胆
囊炎 、胆道炎等疾病 , 是治疗胆道 、胆囊疾病的传统中药制
剂。其质量标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第 10
册[ 1] 。部颁标准[ 1] 对其总内酯规定了含量限度 , 其主要成分
穿心莲内酯的含量未测定。消炎利胆片中穿心莲内酯的测
定方法有薄层色谱扫描法[ 2] 、HPLC 法[ 3 ～ 5] 。本研究建立了
RP-H PLC 法测定 9 个厂家 13 个批号消炎利胆片中穿心莲
内酯的含量。现报道如下。
1　材料
Ag ilent1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)。样
品:广东 A 药厂(批号 0308081 , 0309011 , 0309222 , 0402011 ,
0401081), 广东 B 药厂(批号 030808), 广东 C 药厂(批号
030102),广东 D 药厂(批号 030503), 广东 E 药厂(批号
030401), 广东 F 药厂(批号 030901), 广东 G 药厂(批号
0307423), 广西 H 药厂(批号 030714), 广西 I 药厂(批号
030401);穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所 , 批
号 0797-9803);其他试剂为分析纯 ,水为纯化水。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件　色谱柱:Shim-pack CLC-ODS 柱(6. 0 mm
×150 mm , 5μm),柱温:室温 ,流动相:甲醇-水(60∶40),检测
波长:225 nm , 流速:1 . 0 m L min-1 。 在以上条件下 , 注入
样品溶液 ,塔板数以穿心莲内酯峰计大于2 000 , 分离度大于
1 . 5。
2. 2　溶液的制备
2. 2. 1　对照品溶液的制备　精密称取于105 ℃干燥至恒重
的穿心莲内酯对照品适量 ,置 10 m L量瓶中 , 加甲醇至刻度 ,
摇匀 ,制成浓度为1 . 371 g L﹣1的对照品溶液。
2. 2. 2　供试品溶液的制备　取消炎利胆片 20 片 , 除去糖
衣 ,精密称定 , 研细 , 精密称取适量(约相当于消炎利胆片 7
片)于锥形瓶中 , 加 65%乙醇 10 m L , 放置过夜 , 超声提取 30
min ,加入活性炭适量 , 再超声提取 30 min ,滤过 , 滤渣用适量
65%乙醇洗涤 ,合并滤液与洗液 , 定量转移至 50 mL 量瓶中 ,
加 65%乙醇至刻度 ,摇匀 , 作为供试品溶液。
2. 3　阴性实验　按消炎利胆片的处方 、工艺 , 不加穿心莲 ,
制成阴性样品 ,同供试品溶液的制备法制成阴性溶液 , 在选
定的色谱条件下 , 准确进样 10 μL。色谱图见图 1。从色谱
图上看出 ,在该色谱条件下 ,其他药材对穿心莲内酯的测定
无干扰。
图 1　消炎利胆片中穿心莲内酯 HP LC图
A.穿心莲内酯对照品;B.消炎利胆片样品;C .阴性样品
Fig 1　HP LC chromatogram s of and rog rapholide in Xiaoyanlidan
tablet s
A. referen se sub stan ces of andrographolide;B. Xiaoyan lidan tablets
sam ple;C. negative sample
2. 4　线性关系　精密吸取对照品溶液(1. 371 g L -1)0. 4 ,
356 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 3期 Chin H osp Ph arm J , 2006 Mar , Vol 26 , No. 3