全 文 ：〔总 2 5期 )沈 阳 药 学 院 学 报
翻白草抗菌活性成份的研究
刘艳南 辛 苏世文徐 .朱廷儒样
摘要 :首次从翻 白草 中分离出九个单体化合物 , 其 中七种经理化性质和光谱数据鉴 定 为
富马酸 ( F u m a r i c a c i d ) 工, 没 食子酸 ( G a l l i e a e i d ) 亚 , 懈皮素 ( Q u e r c e t i n ) l , 原儿 茶
酸 ( P r o t o c a t e c h lt i c a c i d )环 , 才由皮素 ( N a r i n g e n i n ) V , 山奈素 ( K a e m p f e r o l ) VI 和 l’q 苯二
酸 ( m 一 P ht h al i c a ic d ) 孤 。 以 上七 种均系首次 从 翻 白草中分 离出的 已 知 化合 物 , 其 中结 -
晶 工、 V和孤均 系首次从委陵菜属植物 中分离得到 。
抑 菌实验表明 : 结 晶 工、 五 、 皿 、 『 、 V 、 租和孤对福 氏和志贫氏痢疾 杆菌均 具有不 同程
度的抑制作用 。 其中尤 以兀和 皿的抑菌活 性最强 , 最 低抑菌浓度分别 为 59 和 37 p p m / m l。 此
外 且与 l , V1 , V之 间都呈明显 的协 同作用 。
翻白草 ( P ot e武 il la id s c ol or B u n g e ) 系蔷薇科委陵菜 属 植物 , 干燥全草入药 , 我 国
大部分地区均有分布 〔功 。
翻白草为我国的传统 中药 , 曾有记载翻 白草治疗痢疾 , 疖痈〔 2 〕。 近年来 , 辽宁省 2 19 医院
将翻白草制成定型制剂 , 用于临床治疗千余例急性细菌性痢疾 , 有效率达 95 % 以上 , 且尚未
发现毒副作用 〔 3 〕。
有关委陵菜属植物的研究 , 国内外文献中已有很多报道 , 所涉及到的有三十多个种 , 从
中分离和鉴定的化学成份大约 40 余神〔冷 1 尔 6 〕 , 但对翻 白草化学成份和抑菌活性成份的研究
至今尚未见报道 。
我们经水醇法以及不同溶剂萃取 , 以体外抑菌试验为指标 , 确定了乙醚提取物为抑菌活
性部位 , 经硅胶薄层和柱层层析 , 分别得到了结晶 工~ 玫号 。
通过理化性质 、 混合熔点 、 T L C 、 U V 、 IR 、 H N M R 和 M S证 明 工、 卫~ xI 号分别为富马
酸 ( I ) , 没食子酸 ( 1 ) , 概皮素 ( l ) 、 原儿茶酸 ( W ) , 抽皮 素 ( V ) , 山崇素 (矶 ) , irtJ
苯二酸 ( 珊 ) , 以及结晶孤和班有待确证 。
结晶 工为白色棱柱状结晶 , 结晶五为 白色针状结晶 , 结晶 班 为黄色针状晶 , 结晶 vI 为棕
色结晶 , 结 晶孤为白色粉末状结 晶 , 它们的熔点 , 以 及其它理化性质 和光谱数据分别与富马
酸 、 没食子酸 、 棚皮素 、 原儿茶 酸 、 间苯二酸完全一致 , 且重叠 IR 光谱完全一致 , 混合熔
点不下降 。
研究生
指导教师
DOI : 10. 14066 /j . cnki . cn21 -1349 /r . 1983. 18. 003
结晶 v, 浅黄色针一晶 , 二 . p . 25 3℃ , 具有双氢黄酮的反应 。 M s 给出分子量 27 2 , 分子式为
C ` 。 H : : 0
5 ,
! R 表示有 一 O H ( 3 3 0 0 , 3 1 0 0 , 12 5 。 , 1 1 5 0 ) , 一 C = O ( 1 6 4 5 ) , 苯环 ( 1 6 0 0 ,
15 2 0
, 1 4 6 0
,
5 9 0
, 5 3 0 )
, 以 及 饱和的碳氢伸 缩 振 动 ( 2 9 0 0 , 2 5 4 0 ) 。 U V 鉴别反 应 ,
, : 、 , .
M e O H
。 , 、 _ . 。 。 , 二 _ 、 、 下 ` 、 、 ` t二 二 . * 1 。 _ 工。 。 , 二 0 * 。 ` 工 _ 一一 , , _ , 一 ~ , 卜
U V 久全丁丫` 二2 8 9 , 3 2 6 s h , 加入 N a O M e后 , 带丑红移 3 s n o . 强度 增加 , 示有 5 , 7一二经基取代 ,
In a X
’ 一” ’ - - - - - - - 一一加入 N a O A c时 ,带 且红移 35 n m , 也提示有 5 , 7一二经基取代 , A IC I 。 / H C I使带 1红移 2 n ln , 也证实有 5 一 O H取代 。 N M R在 各9 . 8一 7 . 4处有一组类似于四 重峰的多重 峰 , 积分为四个 H ,J = g H z , 构成典型的 A Z ` B : `系统 , 证实 B 环是对位取代 。 推测可能 结构式为 5 , 7 , 4 ` 一三经基双氢黄酮 。 M s 的分子离子峰和各主要 碎片的 m / 。 一可进一步证 实上述结构 , 主要碎片如
下 :
O
、 。— 。O H一厂 \ / 件一了 愁一 。 H
{ } }
\一 / , ,; / `· 2 7 2 入花干
犷一飞一。 H 一 } :\ 二 /
/O H
、 _ 。 -
2一 、少/
m /
e 1 2 0
m /
e 1 1。
经与标准品抽皮素对照 , I R 、 U V 光谱完全一致 , 混合熔点不下降 , 故证明 结晶V 为袖
皮素。
结晶 VI 为黄色针晶 , m . p . 2 7 4 一 2 7 5℃ , 呈现黄酮醇 类化合物的各种显色反应 。 I R光谱上
蕊 : 。 二~ , ` , r , 人 。 , ~ . 二` 。 , : 。 。 , _ 二 , _一 二 , 一 丈 _。 _。 _ .二 _ .徒 二 了 、 : 、 M e O H 。 _ _ 。 。 _可见黄酮醇类化合物具有的一 O H ,一 C一 O和苯环结构的吸收 峰 。 U V 入士竺丫“ n m , 26 7 , 3 65 ,一 - · 一 一 ~ - - · , · - 一 ” ” ” ` 一 ` ~ - 一 ’ 一 n l a X加各种试 剂 后表 明 有 3 , 5 , 7 , 4 `一四轻基取代 。 N M R , 乙p p m , 6 . 4 5 一 6 . 2 0 ( ZH , 四重
峰 , J问 = ZH z ) 6 . 9一 5 . 1 ( 4 H , 多重 峰 , J邻 = 5 . s H z ) , 9 . 3一 1 2 . 5 ( 4 H , 4 个单 峰 , 加
重水后消失为四个经基的氢 ) , 进一步证 实有 3 , 5 , 7 , 4 ` 一四经基取代 。 U V和 N M R光谱与
山奈素标准图谱 〔 7 〕对照完全一致 , 熔点与文献报道一致 , 证实结晶 VI 为山奈素。
抑菌试验表明 : 结晶工、 五、 班 、 vI 、 v 、 姐和顶均有不同程度的抑菌作用 , 其中尤以 止和
批抑菌作用最强 , 最低抑菌浓度分别为 59 和 3 7 p p m / m l , 结晶 兀与 班 , w , V 分别进行联合
抑菌试验 , 结果表明具有明 牡的协同作用 , 这 为 在 临 床 七使用复方成份的制剂提供了科学
依据 。
实 验 部 分
于燥翻以草全草 , 于 1 9` 1年 5 ~ 6 月份采于辽宁省风城地区 。
不升华成分熔点测定是在显微熔点测定仪上进行 , 升华成份在娣勒氏管上进行 ( 一仁段加
盖氯化钠细粉 ), 所有熔点均未较正 。 紫外在日立 2t0 0 型 紫 外 分 光光度计上测定 , 红外用
IR 一 27 G 型红外分光光度计 , K B r压片法测定 , 核磁共振谱均用 T M S 内标 , 用 R 12 型 , 日立
6 o Q型核磁共振仪测定 , 化学位移值为乙( p p 。 ) 。 质谱用 JM S D 3 0 0 o一 JM S A Z0 0 0色谱一质谱仪测定 。
(一 ) 抗 菌活性部位的确定
翻 白草 ( 干燥全草 )
{
水煎 、 浓缩
浓缩液 ( 1 )
一ù一
灿月一犷工n一
一一i一 一石享液 ( 2 ) 沉淀 ( 3
{
。 :收酉享, 力。习丈稀 释 , “ 仿草取
氯仿液 ( 5 ) 水液 ( 4 )
}乙酸乙醋萃取
乙酸乙醋液 ( 6
一 !
水液 ( 7 )
拌和硅胶 , 10 0℃ 以下烘干 , 不同溶 剂 提取
乙溢( 8 , 上酸乙。旨 、 9 。
以 上各提取物分别进行抑菌试验 ,
} }丙酮 ( 10 ) 甲醇 ( 1 1 )
(实验菌株为福 氏 l a 、 l b 、 Z a 、 Zb 、
一 }氨水 ( 12 )
3 e
、
4
、
5 型 ,
宋内氏及志贺氏痢疾杆菌 ) , 结果表明 8 号 乙醚提取物效果最强 , 为抑菌有效部位 。
(二 ) 结晶 工— 仅 的分离将有效部位乙醚提取物拌和硅胶 , 用氯仿洗脱 ,氯仿洗脱液再用旋转离心薄层仪进行分离
得结晶 ;I 氯仿 : 丙酮 (1 0 : 1 ) 洗脱 , 回收溶媒得结晶 七 氯仿 : 乙酸乙醋 ( 7 : 1) 洗脱 ,
洗脱液再进行硅胶柱层析 , 以石油 醚 : 乙酸乙醋 ( 1 , 1 ) 洗脱 得结 晶 VI ; 氯仿 : 乙酸乙醋
( 3
: 1 ) 洗 脱 , 再进 行硅胶柱层析分别以石油醚 : 乙酸乙醋 ( 2 : 2 . 5) 和 ( 2 : 1 )洗 脱 ,
收集流分 , 得到结晶班 , V , 租和顶 ; 氯仿 : 甲醇 ( 1 0:0 3 ) 洗脱 , 得到结晶 W。
将寻找有效部位流程 中 的⑨号即乙酸乙醋 提 取 物 进 行 硅 胶 柱 层 析 , 用氯仿 : 丙酮
( 1 0 0
: 5 ) 洗脱 , 得结晶仅 。
(三 ) 结晶 工— 仪 的理化性质和光谱数据1 .结晶 工 , 白色棱柱状结晶 , 升华 , 遇澳甲酚绿显黄色 , 遇高锰酸钾显黄色 , 遇 澳水褪
色 。 与富马酸测重叠 比 光谱完全一致 , 混合熔点不下降 。
2
. 结晶 且 , 用水重结晶 , 为 白色针品 , 升华 , m . p . 2 2 5一 2 ,10 c , 易氧化变色 ,遇 淡 甲
盼绿呈黄色斑点 , 遇三氯化铁呈蓝黑色斑点 。
O H
: ,、
K B :
_ , _ _ _ 。 J . 。 1 。 。 八 , ,
J
_ 、
. 。 , 、 , , J 。 。 , 。 , _ .、 r , 、
IR v 竺竺 e m 一 ` 3 5 0 0一 2 4 0 0 , 1 6 9 0 (一 C= 0 ) , 1 6 1 0 , 1 5 4 0 , 8 6 0 (苯 环 ) , U V 认m a x
m a x -
2 1乳 _ 2 、 7 4 n m , N M R , 7 . 1 6 ( ZH , 单峰 )
3
. 结晶 班 , 稀醇重结晶 , 黄色针晶 , 遇三氯化铝呈亮黄色 , 氧氯化钻呈亮黄色 , 三氯
化铁显深绿色 , 氨蒸汽熏呈黄色、 盐酸— 镁粉显红色 , 氯化铭反应生成红褐色沉淀 。, n K B r . _ . 。 ` 。 八 。 。 。 。 . _ 。 * . _ 。 _ . _ 。 。 . , 。 . 。 _ *
二tL V _ _ _ _ C m
二 一 J 4 U U , J 石 J U , 1匕石U 一 l b 乙 U , 1 匕乙 U , 1 4 b U一 1 乙匀U ,
U二往 X
1 8 0
U V 入m a x , 人I e O H , 2 5了, 3 7 0 N a O A e ,
N a O M e
,
2 8 6
, 2 9 5 , 3 3 2
, 4 3 2
A I C 1
3
/ H C I
, 2 6 4 , 3 3 2 , 3 6 5 , 4 3 C
艺6 C , 2 7 4 , 3 2 9
1 1 7 0
,
3 8 7
N a O A e /壬1 3 B O 3 ,
8 9 0
,
2 6 1 , 3 0 0
,
6 9 0
。
3 8 7
N M R
, 各 6 . 2一 8一二 ( 2 玉于, 四重峰 , J = Z H z ) , 6 . 9一 7 . 6 ( 3 H · 多重峰 , J = S H 乙 , J = Z H z ) ,
9
.
3一 1 2 . 5 ( S H , 4 个单峰 , 加重水后消失 ) 。
4
. 结品 W , 水重结晶 , 棕色结晶 , 遇澳甲酚绿显黄色 , 遇三氯化铁显蓝色 , 遇空气棕
、 」 _ _ 、一 , , 、 r . E t O H _ _ _ _ _ _ _ _ _ 二 丁 、 K B r色 加 深 。 U V 入兰里 1 ` 2 0 7 , 2 5 9 , 2 9 2 n m 。 I R 、 竺兰 c m 一 ` , 3 2 5 0~ 2 5 0 0 , 1 6 6 0 , 1 6 2 0 , 1 5 3 0 ,一 ” 一 ” - 一 ~ In a X - 一 m a X
1 3 r o , 1 2 5 0
, 1 2 3 0
, 5 8 0
, 5 4 0
。
N M R
, 乙6 . 9 5一 7 . 5 5 ( 3H , 多重峰 ) , 3 . 3 ( 3 H , 宽 峰 ,
D
:
O交换消失 )
5
. 结晶 V , m ` p . 2 5 3 “ , 浅黄色针晶 , U V 灯下呈蓝色荧光 , 喷 醋 酸 镁 后蓝色荧光增
强 , 与三氯化铁显绿色 , 盐酸— 镁粉反应显红色 。K B r _ , _ _ _ _ _ 二 _ _ _ 八 _ _ 。 _ _ . _ _ ` _ _ _ . _ _ 。 . _ _ 二 * _ _主仄 V _ _ _ C tTI 止 , J J UV , 石 I U U 一 乙 , U U , 乙匕 4 t , , l b诬匕 , l b U U , 1匕乙 U , 1 4 b U , 1 乙勺 U , 1 1 b U
I l l U X
8 9 0 , 8 3 0
U V 入
7 6 0
。
M e O H
m a X
_ 、
2 8 9 , 3 2 6
N a O M
e 2 4 5
, 3 2 4 N a O A e 2 8 5
, 3 2 4
A IC I
。 3 10 , 3 7 0 N a O A e / H
3 B O
。 2 9 0 , 3 2 5
A IC 1
3
/ H C I 3 1 1
, 3 7 5
N M R
, 乙 3 . 0 ( Z H , 多重峰 ) , 5 . 5 ( I H , 四 重峰 J = 1 7 , 1 1H z ) , 一 5 . 9 ( ZH , 单峰 ) ,
6
.
5一 7 . 4 ( 4 H , 多重峰 , J “ g H z ) , 1 2 . 5 (单峰 , 加重水消失 ) 。
M S
,
M
十 2 7 2 , 1 5 3 , 1 2 0
, 1 1 9 , 9 1
一
6
. 山亲素 ( VI ) , 稀醇 重结晶 , 黄色针晶 , m . p , 2 74 一 2 75 。 , 遇三氯化铝 呈亮黄色 ,
氧氯化菇呈黄色 , 遇三氯化铁显绿色 , 盐酸— 镁粉反 应红色 。二 。 K B r _ . _ _ 。 。 _ 。 二 _ _ . ` _ _ _ . _ _ _ 二 _ _ _ . 。 _ 二 。 。 。 、 , 。 。 。 _ 。 _
1氏 V _ _ C m 么 , J 4 4 U , J J 匕U , l b b U , l b 乙 U , 1勺了 U , 1 沙U七 , 1 乙 4勺 , 1 1 石 U , 石石 U , 石 J U , 了 U U
11 1改 X
u v 、纷互犷H n m , 2 6 7 , 3 6 5
N a O M
e 2 7 8 , 3 1 5
, 4 1 6
,
A IC I
A IC 13 / H C I 2 5 6
, 2 7 0 ,
N a O A c / H
3
B o
3 2 6 5 ,
3 5 4 4 2 3
2 6 0
,
2 6 7
, 3 5 4 , 4 2 3
N a 0 A e 2 7 5
, 3 0 3 , 3 8 3
3 2 0 , 3 6 9
,
N M R各6 . 2一 6 . 4 5 ( Z H , 四重峰 , J = Z H z ) , B . 9一 8 . 1
( 4 H
, 多重峰 , J = 。H : ) , 9 . 3一 1 2 . 5 ( 4 H , 四个单峰 , 加重水后消失 ) 。
7
吸收 ,
8
1 6 1 5 ,
结晶孤 , 以水重结晶 , 白色针晶 , m . p . 17 7℃ , 升华 。 遇 澳 甲酚 绿 显黄色 , U V无
IR 表明有叛基 , 结构有待确证 。
, _。 、 . _ ~ , _ 、 , . 一 ~ ~ 一 声 , J , : 一 、 , 卜 一 ~ , 。 K B r间苯二酸 (租 )水重结晶 , 白色粉末状结晶 , IR v 泣廿二 e m 一 ` , 3 1 0 0 , 2 5 0 0 , 1 6 9 0 、
_
_
~ , 一 , · 一 - - - · - - - ~ ” 门 产 n l a X
15 8 0 , 8 3 0 , 7 3 0 , 6 9 0
U v 入 M e 0 H
n l a X
n m , 2 1 3
, 2 8 1
, 2 8 9 N M R
, 邑7 . 5一 8 . 6 ( 4 H ,
多重峰 )
9
.
,
M S给出分子离子峰 1 6 6 , 其它碎片 1 4饥 12 1 , % 。
结晶 耳 , 水透结晶 、 黄色粉末 , 。 . p . 2 67 一 2 6 8 ℃ , 遇三氯化 谓 呈 亮 黄 色 , 三氯化
铁呈绿色 , 遇氧氯化菇 呈黄色
I ,、 V轰大一 3 4 5。 , 3 2 5 0 ,试类化合物 , 结构尚待确证 。
(四 ) 抑菌试验及结果
, 。一茶酚一佩瓤应、 : 。 盯 、沈罗ha l , 269 , 3 13
1 6 9 0
,
1 5 9 0 , 1 5 5 0
, 14 7 0 , 1 3 9 0 , 1 1 8 0 , 8 2 0
· 挤佳测可能为黄酮
1
. 培养从 : 采用琼脂培养从和普通液体培养基 。
2
. 菌株 : 试验中所用菌株为福氏 , 志贺氏及宋内氏等各型痢疾杆菌 。 各种痢疾菌株均
由住院患者血便标木中分离所得 , 经生化与血清学鉴定 , 符合肠杆菌科志贺氏菌属定义 。
3
. 实验方法 : 采用双层杯碟法和试管双倍稀释法 。
4
. 实验结果 :
试管双倍稀释法抑菌试验结果
钻沐亩妙度 p p`
仰菌 样
\ 、
l
、 、
一
盯一74一仪志贺氏痢疾杆菌 5 9
福氏 即 即 即 l a 9 5 0
” ” 1 厂 即 ” Z b 5 9
乌牛二{…二一 1瞥 一卜一巡一卜一塑一 }一 竺一
} ’ 0 5 0 1 5 2 5 」 2 5 0 }
双层管碟 法抑菌试验结果
杰途几…1 …! …, …· 1丫 卜…1一 …! 笼一 …!一严下万:一卜…令…今厂叮丁票万
即 即 即 附 尸产 即 3 C 1 1 2 2 1 O 14 l 9 l 9
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志贺氏痢疾杆菌 下 {丁…下…一万…万一… 一…万一…一 ; {一一—l} 2 2
父 l
I R
、
u V和部分 NM R光谱由本院仪 器 教研室测 定 , 湖北 中医学院中心实验室邹俊华老
师和本院植化教研室惠赠袖皮素和懈 皮素标准品 ) 2 19 医院检验科何志春主任和木组徐淑华老
师代做和指导抑菌实验 。 本院植化组部分老师 , 木室王 素贤及裴月湖老师给予帮助指导 , 本
院电教室代制幻灯片和照片 , 在此一并致谢 。
另外一部分 M S和 N M R光谱由辽宁省理化测试中心代测 。
参 考 文 献
1
. 迁宁省林 业土攘研 究所 : 东北 草本植物志 第五卷 , 23 死 , 科学 出版社 1 9 7 6
2
. 江 苏新医 学院 : 中药大辞典 56 74 上海科学技术 出版社 19 7 7
3
. 辽宁省 卫生局医药局 : 《痢特敏 》 鉴定会资并 , 1 9 8 2
4
.
G O R I S A
, e t a !
:
C 仔” J 刀o t 5 5 : 4 7 6一 4 7 9 1 9 7 7
5
.
K a s
, y a n o r G l
: 〔: A 8 7 : 5 0 z s g K 1 9 7 7
6
.
F e d o s e e v a G M
:
C A 9 2
: 3 7 7 8 0 e 19 8 0
7
. 中国科学院上海 药物研 完所植 物化学研 完 室 ; 黄酮体 化 合 物鉴 定手册 4 72 页 ,
6 3 9页 , 才千学出版社 19 8 1
S tu di e s 、 , , ,
一
13a e t e r i o s t a t i e C o , xi p o r l e n t s F
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〕 o t e l t i l l a D i s e o l o r B t l r z g e
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A B S T R A C T
P o t e n i l l a d i s e o l o r B u n g e ( R o s a e e a e )
, a t r a d i t i o n a l m e d i e i n e
, 15 w i d e l y
d 1o t r ib u t i e d i n t h e N o r t h e a s t e r n a n d N o r t h d i s t r i e t s o f C h i n a
.
N 1n e e o m p o n e n t s h a y o b e e n i s o l a t e d f r o m P
.
d i s e o l o r B u n g e
, s e y e n o f
w h i e h h a v e b e e n i d e n l i f i e d o n t h e b a s i s o f p h y s i e o e h e m i e a l p r o p e r t i e s a n d
s p e e t r a d a t a a s F u m a r i e a e i d ( I )
,
G a l l i e a e i d (兀 ) , Q u e r e e t i n ( l ) , 玲 o t o e a t e -
e h u i e a e i d (那 ) , N a r i n g e n i n ( V ) , K a e m p f e r o l ( 矶 ) , a n d m 一 P h t h a l i e a e i d (租 ) ,
T h e o t h e r t w o e o m p o n e n t s ( Vl a n d 仪 ) r e m a i n t o b e d e t e r m i n e d .
T h e o b v i o u s b a e t e r i o s t a s i s o f t h e n i n c e o m P o n o n t s
, e x e e p t ( VI ) ( i n a e t i v c )
,
(议 ) ( n o t t e s t e d 歹e t ) , a 只a i n : t B . s h i g a e C h e s t e r a n d B . f l e x n e r l · e v i n e h a s
b e e n o b s e r v e d
.
( l ) a n d ( 租 ) a r e , n o s t b a e t e r i o s t a t i e a m o n g t h e m .
2 3 一