全 文 ：西北林学院学报 ２０１２，２７（２）：９３～９７
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－７４６１．２０１２．０２．２０
海棠花离体繁殖技术研究
　收稿日期：２０１１－０３－１９　修回日期：２０１１－０５－１２
　基金项目：西北农林科技大学国外引进人才科研启动基金（Ｚ１１１０２０９０１）；陕西省自然科学基金（２０１０ＪＱ３００９）。
　作者简介：谭黎霞，女，硕士，主要从事果树组织培养和转基因方面的研究。
＊通讯作者：王敦，男，博士，硕士生导师。ｗａｎｇｈａｎｄｅｃｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ；李厚华，男，博士。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｉｈｏｕｈｕａ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
谭黎霞１，田强强２，王　敦１＊，阙　怡２，李厚华２＊
（１．西北农林科技大学 植物保护学院，陕西 杨陵７１２１００；２．西北农林科技大学 林学院，陕西 杨陵７１２１００）
摘　要：以海棠花组培苗和叶片为材料，应用正交试验法，以 ＭＳ培养基为基础，分别加入不同浓度
配比的６－ＢＡ／ＩＢＡ 组合和ＴＤＺ／ＩＢＡ 组合作为增殖培养基和叶盘不定芽再生培养基，研究了不同
植物激素及其配比对组培苗增殖、叶片不定芽再生的影响。结果表明：在添加６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１
＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１的 ＭＳ培养基上最适宜海棠花组培苗的增殖及生长，增殖倍数高达８．１１，海
棠花组培苗平均高度达２．１４ｃｍ；在添加ＴＤＺ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１的 ＭＳ培养基上
叶再生效率最高，再生效率为１００％，每叶平均再生芽数为６．７３。
关键词：海棠花；叶片；不定芽再生；组织培养
中图分类号：Ｓ６８５．０４３　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１２）０２－００９３－０５
Ｍｉｃｒｏｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍａｌｕｓ　ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
ＴＡＮ　Ｌｉ－ｘｉａ１，ＴＩＡＮ　Ｑｉａｎｇ－ｑｉａｎｇ２，ＷＡＮＧ　Ｄｕｎ１＊，ＱＵＥ　Ｙｉ　２，ＬＩ　Ｈｏｕ－ｈｕａ２＊
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｏｎ　ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｍａｌｕｓ　ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．
Ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６－ＢＡ，ＴＤＺ　ａｎｄ　ＩＢＡ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ＭＳ　ａｄｄｉｎｇ　ｗｉｔｈ　６－ＢＡ　２．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒ－
ａｔｉｏｎ，ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｙ　ｏｆ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｖａｌｕｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　８．１１，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｈｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｗａｓ　２．１４ｃｍ；Ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ
ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｓｈｏｏｔｓ（１００％）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｈｏｏｔｓ　ｐｅｒ　ｅｘｐｌａｎｔ（６．７３）ｏｃｃｕｒｒｅｄ　ｏｎ　ＭＳ
ｍｅｄｉｕｍ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　１．０ｍｇ·Ｌ－１　ＴＤＺ　ａｎｄ　０．５ｍｇ·Ｌ－１　ＩＢＡ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍａｌｕｓ　ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ；ｌｅａｆ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ
　　海棠花 （Ｍａｌｕｓ　ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ）是蔷薇科苹果属落
叶小乔木，株型峭立，花繁叶茂，在华北、华东地区广
泛栽培，是早春重要的观花树种［１］。海棠花花色艳
丽芳香，花５～７朵簇生，伞形总状花序，多为半重
瓣，花未放时，花苞深红点点，初开放时，花色淡红一
片，将谢时，有如隔宿粉妆，素有“国艳”之誉［２］。其
果梨果球形，黄绿色，冬季挂果时间长，是一种优良
的观果植物，其果实亦可食用，可广泛用于城乡绿
化，庭院美化，既有生态效益又有经济效益，在生态
建设中有着广阔的市场前景［３］。但传统的压条及嫁
接等方法繁殖系数小且周期较长，不能满足生产和
生活需要，播种繁殖虽然繁殖系数高，却不能保证种
苗对母株优良性状的稳定遗传，而组织培养技术可
以为解决这一问题提供有效的研究手段。组织培养
不仅具有取材方便、操作简便、繁殖系数高和成苗速
度快等优点，还可结合基因工程对植物的某些性状
进行定向修饰，使其在抗病虫、抗逆性、花色、花期等
方面发挥重要作用。建立良好的再生体系是进行植
物基因遗传转化工作的基础，因此，开展海棠花离体
快繁技术研究，不仅对突破繁殖材料数量上的限制
和开发这一优良树种资源具有重要意义，也为相关
转基因研究提供重要的物质基础。
山梨醇可作为苹果品种和砧木、杏和桃等果树
愈伤组织生长的适宜碳源［４－５］。在山梨醇、蔗糖、葡
萄糖、果糖４种碳源中，山梨醇对苹果品种 Ｍａｃｓｐｕｒ
新梢离体再生的调节作用最好，新梢产生数量最
多［６］。人工合成的苯基脲衍生物ＴＤＺ（Ｎ－苯基－Ｎ′－
１，２，３－噻二唑－５－基－脲）是广泛用于植物组织培养形
态发生的高效生物调节剂［７］，可以调节内源植物生
长激素水平、生长素的极性运输及促进脯氨酸的形
成和积累等［８－９］，具有生长素和细胞分裂素双重作用
的特殊功能。在组织培养时极低浓度的ＴＤＺ就表
现出能促进组织中心部位的生长［１０］。与腺嘌呤型
细胞分裂素相比，ＴＤＺ对于木本植物的再生是最有
效的［１１－１２］，这已在苹果［１３－１５］、梨［１６］等品种中得到证
实。秦玲［１７］等研究了不同细胞分裂素对２００１富士
苹果离体叶片再生不定芽的影响，结果也显示，ＴＤＺ
诱导的再生效率远远高于６－ＢＡ和ＣＰＰＵ。以海棠
花组培苗为试验材料，研究不同浓度的细胞分裂素
和生长素组合对海棠花离体繁殖的影响，筛选适于
叶再生培养激素配比，建立快速、高效、稳定的海棠
花叶片再生体系。
１　材料与方法
１．１　无菌材料的建立
１．１．１　植物材料　试验外植体材料海棠花带芽枝
条采自中国科学院北京植物园。
１．１．２　培养基　基本培养基：ＭＳ培养基［１８］。
增殖培养基：以 ＭＳ 培养基为基础，参照 Ｈ．
Ｈ．Ｌｉ［１９］等的苹果增殖培养基配方，加入不同浓度
配比的６－ＢＡ与ＩＢＡ。
叶盘不定芽再生培养基：以 ＭＳ培养基为基础
培养基，以山梨糖醇为碳源，再加入不同浓度配比的
ＴＤＺ与ＩＢＡ。
１．１．３　试验方法　将采回的海棠花枝条用清水冲
洗１～２ｈ后，于超净工作台上，在７５％ 酒精中手动
摇晃消毒３０ｓ，接着在磁力搅拌器搅拌下用５％Ｎａ－
ＣｌＯ浸泡８ｍｉｎ，再用无菌水冲洗３次，之后用手术
刀将其切成４～５ｃｍ长的茎段，接种到已灭过菌的
ＭＳ培养基上，于２５℃、弱光环境下培养。培养约
２０ｄ后带芽茎段开始萌发，当芽长至２～３ｃｍ 长时
将其转接到新的 ＭＳ培养基上进行培养初步获得组
培苗。
１．２　叶片再生芽的诱导
采用两因素五水平正交试验方法，对用于海棠
花叶片愈伤组织诱导和不定芽再生的培养基配方进
行试验。每个因素设计不同的５个水平，试验因素、
水平分别为：ＴＤＺ（０．１、０．２、０．５、１．０、２．０ｍｇ·
Ｌ－１）和ＩＢＡ （０．０５、０．１、０．２、０．５、１．０ｍｇ·Ｌ－１）
（表１）。取继代培养２５～４０ｄ的海棠花组培苗顶
部２～３叶位的幼嫩叶片，垂直于主叶脉横划２～３
刀，边缘不切断，放在叶再生培养基上培养，并使叶
片远轴面接触培养基。（２５±２）℃ 暗培养２周后
转至光照培养（光照强度１　５００～２　０００ｌｘ），光周期
为１６ｈ／８ｈ，培养基每２周更换１次，每种组合１０
片叶，重复３次。
１．３　增殖培养
以 ＭＳ为基本培养基，研究不同６－ＢＡ和ＩＢＡ
浓度组合对海棠花组培苗生长和增殖的影响。试验
因素、水平分别为：６－ＢＡ （０．５、１．０、２．０ｍｇ·Ｌ－１）
和ＩＢＡ（０．０５、０．１、０．２ｍｇ·Ｌ－１）。每个处理接种
５瓶，每瓶３株苗，重复２次。培养条件为：光照强
度１　５００～２　０００ｌｘ，光周期１６ｈ／８ｈ，温度（２５±
２）℃。
１．４　统计分析
１．４．１　叶片愈伤组织诱导和不定芽再生情况统计
　暗培养２周后对离体叶片愈伤组织诱导情况进行
调查：外观上根据愈伤组织形成的多少和质量将诱
导情况分为３个等级：１级，仅在主叶脉切口处形成
少量愈伤组织，愈伤表面干燥，颜色多呈灰白色；２
级，切口处形成较多的愈伤组织，颜色较绿；３级，切
口处形成多而松软的愈伤组织，愈伤表面湿润，颜色
深绿或褐红，质地致密。最后根据每个外植体愈伤
组织增殖情况（级别）统计结果。
愈伤组织诱导率／％＝诱导出愈伤组织叶片数／
接种叶片数×１００
培养４５ｄ后对叶片不定芽分化情况进行统计
再生效率／％＝再生芽叶片数／接种叶片数×
１００
叶片平均再生芽数＝再生芽总数／接种叶片总
数
１．４．２　组培苗生长情况统计　接种４０ｄ后对不同
处理下海棠花组培苗的高度、增殖数和健壮指数进
行统计，计算平均高度及平均增殖倍数。
平均增殖倍数＝高度大于１ｃｍ 的再生不定芽
数／接种外植体数
健壮指数，外观上根据植株生长情况进行分级，
分为３个等级。１级：叶小或内卷而未展开，再生芽
多而呈丛生状，或植株玻璃化，不宜用于生根或继续
扩繁再生；２级：叶中等大小，多数再生植株高度在
４９ 西北林学院学报 ２７卷　
１ｃｍ 以上，茎杆纤细或居中，可用于继续扩繁；３
级：叶大较嫩，适宜进行不定芽再生的培养，叶色鲜
嫩、茎杆粗壮、植株健壮。
以上数据均用ＳＰＳＳ　１７．０软件并用Ｄｕｎｃａｎ法
对统计结果进行方差分析，显著水平为０．０５。
２　结果与分析
２．１　叶片愈伤组织的形成及芽的分化
接种的海棠花叶片在暗处培养１周后部分叶盘
基部膨大，边缘翘起，叶片切口处有白色或淡黄色愈
伤组织形成，且基部多于端部（图１－ａ），以后随着培
养时间的增加愈伤组织颜色逐渐加深，但不同浓度
的激素配比，其愈伤组织的颜色和发生量也不同。２
周后部分组合的叶片开始出现嫩黄小芽（图１－ｂ），
转入正常光照下培养１周后可观察到大量的单芽或
丛生芽分化（图１－ｃ），且不定芽多产生在叶脉处（图
１－ｄ）。当产生的不定芽大于１ｃｍ 时将其转入继代
培养基上培养（图１－ｅ和１－ｆ）。
　　ａ、暗培养１周后愈伤组织形成；ｂ、暗培养２周后愈伤组织形态发生；ｃ、转入光照培养１周后大量分化出的不定芽；ｄ、光照培养４周后的
单芽；ｅ、将叶片分化出的不定芽切下转接到增殖培养基上；ｆ、增殖培养４０ｄ后的海棠花植株。
图１　海棠花离体叶片的再生
Ｆｉｇ．１　Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍ．ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
２．２　ＩＢＡ与ＴＤＺ不同浓度配比对叶片芽分化的影响
不同浓度ＴＤＺ和ＩＢＡ配比处理对海棠花叶片
再生效率和每叶平均再生芽数均有显著影响（表
１）。试验方差分析结果表明，当ＴＤＺ质量浓度小于
０．２ｍｇ·Ｌ－１时，叶片无法再生；在相同ＩＢＡ质量浓
度条件下，当ＩＢＡ 浓度小于０．２ｍｇ·Ｌ－１时，随着
ＴＤＺ浓度增加，叶片再生效率和平均每叶再生芽数
也相应增加；当ＩＢＡ 浓度大于０．５时，叶片再生效
率和平均每叶再生芽数随ＴＤＺ浓度的增加先增高
再减小，且均在ＴＤＺ浓度为１．０时达到最高值，即：
在 ＭＳ＋ ＴＤＺ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１
和 ＭＳ＋ ＴＤＺ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１
培养基上，愈伤等级均为３ 级，再生效率分别为
１００％ 和７０．６７％，平均每叶再生芽数分别为６．７３
和３．１７。因此，细胞分裂素和生长素的用量都应控
制在一定范围才能达到理想效果。试验范围内，在
附加ＴＤＺ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１的ＭＳ
培养基上，海棠花叶片再生效率最高达１００％，每叶
平均再生芽数最高为６．７３，为最优培养基组合。
２．３　ＩＢＡ与６－ＢＡ 不同浓度配比对芽增殖及生长
的影响
　　ＩＢＡ与６－ＢＡ不同浓度配比试验结果表明，９种
组合均能使植株生长及增殖，不同组合之间生长高
度差异明显。２种植物激素对海棠花生长高度影响
的统计分析结果表明，６－ＢＡ 和ＩＢＡ 两因素在试验
水平范围内对生长高度差异均不显著，交互作用在
０．０５水平上对生长高度和增殖均影响显著，但ＩＢＡ
对增殖倍数影响较大（表２）。
海棠花组培苗在添加６－ＢＡ　２．０ｍｇ·Ｌ－１＋
ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１的ＭＳ培养基上平均高度达２．４２
ｃｍ，显著高于其他处理，但健壮指数适中，增殖倍数
也不理想。结合直观分析，发现在添加６－ＢＡ　２．０
ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１的 ＭＳ培养基上，植
株虽然很高，但株型瘦弱，叶小茎细，不够健壮，且部
分植株有玻璃化现象，并非最优组合。在添加６－ＢＡ
１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１的培养基上，海
５９第２期 谭黎霞 等：海棠花离体繁殖技术研究
棠花组培苗平均生长高度为２．１４ｃｍ，与前者相比
差异不显著，但增殖倍数高达８．１１倍，显著高于其
他处理，且其健壮指数也是最大的，因此最适于海棠
花继代培养。综合比较：试验范围内适合海棠花生
长和增殖的最佳培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ·
Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１。
表１　不同浓度激素配比对海棠花离体
叶片再生不定芽的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｓｈｏｏｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｍ．ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ
植物激素
／（ｍｇ·Ｌ－１）
叶片再生
效率／％
平均再生
芽数／个
愈伤
等级
ＴＤＺ　０．１＋ＩＢＡ　０．０５　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．１＋ＩＢＡ　０．１　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．１＋ＩＢＡ　０．２　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．１＋ＩＢＡ　０．５　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．１＋ＩＢＡ　１．０　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．２＋ＩＢＡ　０．０５　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．２＋ＩＢＡ　０．１　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．２＋ＩＢＡ　０．２　 ０．００ｋ ０．００ｉ ３
ＴＤＺ　０．２＋ＩＢＡ　０．５　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．２＋ＩＢＡ　１．０　 ０．００ｋ ０．００ｉ １
ＴＤＺ　０．５＋ＩＢＡ　０．０５　 １３．３７±０．９０ｊ　 ０．２±０．０６ｈｉ　 １
ＴＤＺ　０．５＋ＩＢＡ　０．１　 ５９．８８±２．６８ｅｆ　 １．６０±０．１１ｆ ３
ＴＤＺ　０．５＋ＩＢＡ　０．２　 ４６．３４±３．５７ｇ　 １．６２±０．０５ｆ ３
ＴＤＺ　０．５＋ＩＢＡ　０．５　 ３８．０６±４．５５ｈ ０．９５±０．０７ｇ　 １
ＴＤＺ　０．５＋ＩＢＡ　１．０　 ４９．０±８．６２ｇ　 ０．８５±０．１５ｇ　 １
ＴＤＺ　１．０＋ＩＢＡ　０．０５　 ２１．６７±２．８９ｉ ０．５０±０．１１ｈ ２
ＴＤＺ　１．０＋ＩＢＡ　０．１　 ６７．３０±５．１４ｃｄ　 ２．０９±０．１６ｄｅ　 １
ＴＤＺ　１．０＋ＩＢＡ　０．２　 ５５．０４±２．６５ｆ ２．７４±０．１７ｃ ２
ＴＤＺ　１．０＋ＩＢＡ　０．５　 １００．００±０．００ａ ６．７３±０．３４ａ ３
ＴＤＺ　１．０＋ＩＢＡ　１．０　 ７０．６７±０．７２ｃ ３．１７±０．５７ｂ ３
ＴＤＺ　２．０＋ＩＢＡ　０．０５　 ５５．５２±３．８８ｆ ２．３３±０．１５ｄ ２
ＴＤＺ　２．０＋ＩＢＡ　０．１　 ８３．２４±２．９２ｂ ２．２２±０．１１ｄｅ　 ３
ＴＤＺ　２．０＋ＩＢＡ　０．２　 ６４．２９±７．１５ｄｅ　 ２．２１±０．０８ｄｅ　 ３
ＴＤＺ　２．０＋ＩＢＡ　０．５　 ７１．１５±３．７３ｃ ３．１７±０．５７ｂ ３
ＴＤＺ　２．０＋ＩＢＡ　１．０　 ６１．５５±４．５７ｅ １．９５±０．１５ｅ ３
变异来源 Ｆ值 Ｆ值
ＴＤＺ　 １　５０８．６１＊ ７６９．２７＊
ＩＢＡ　 １３４．９１＊ １２６．７４＊
ＴＤＺ×ＩＢＡ　 ５２．００＊ ８５．４３＊
注：表中数据为３次重复平均值 ± 标准误，同一行数据后有相同字
母表示经Ｄｕｎｃａｎ多重比较后差异不显著（ｐ＜０．０５）。＊表示在ｐ
＜０．０５时差异显著。健壮指数１、２、３分别表示植株生长健康情况。
表２同。
表２　不同浓度激素配比对海棠花组培苗扩繁的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ
ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｍ．ｓｐｅｃｔａｂｉｌｉｓ
植物激素
／（ｍｇ·Ｌ－１）
平均高度
／ｃｍ
增殖
倍数
健壮
指数
６－ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．０５　 ２．００±０．０８ａｂｃｄ　 ５．１１±０．８４ｂ ２
６－ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．１　 １．５２±０．０４ｄ ２．１１±０．８４ｃｄ　 １
６－ＢＡ　０．５＋ＩＢＡ　０．２　 ２．２２±０．３２ａｂ　 ３．８９±０．３９ｂｃ　 ２
６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　０．０５　 １．７７±０．１９ｂｃｄ　 ４．４４±０．５１ｂ ２
６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　０．１　 ２．１４±０．２１ａｂｃ　 ８．１１±０．６７ａ ３
６－ＢＡ　１．０＋ＩＢＡ　０．２　 １．４６±０．０８ｄ ４．００±０．８４ｂｃ　 ２
６－ＢＡ　２．０＋ＩＢＡ　０．０５　 １．６１±０．５０ｃｄ　 １．４５±０．８４ｄ １
６－ＢＡ　２．０＋ＩＢＡ　０．１　 ２．４２±０．２５ａ １．７８±０．８５ｃｄ　 ２
６－ＢＡ　２．０＋ＩＢＡ　０．２　 １．６±０．５２ｃｄ　 ０．３３±０．８ｅ １
变异来源 Ｆ值 Ｆ值
６－ＢＡ　 ０．４２　 ２９．３９
ＩＢＡ　 ２．２１　 ２．６４＊
６－ＢＡ×ＩＢＡ　 ７．０１＊ ６．８９＊
３　结论与讨论
海棠花作为中国传统名花名树，应用前景十分
广阔。试验通过对海棠花离体繁殖技术的研究，得
出海棠花组培苗增殖生长的最适宜培养基为 ＭＳ＋
６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１，增殖倍数
为８．１１，此时高度适中，增殖最多，且植株生长最为
健壮；叶片再生不定芽的最佳培养基为 ＭＳ＋ ＴＤＺ
１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１，再生效率高达
１００％。因此，可以利用其繁殖系数高和成苗速度快
的特点进行海棠花快速无性繁殖和工厂化育苗；同
时，还可结合海棠花叶片再生不定芽效率极高的特
点进行抗病虫转基因育种，避免或减少病虫源的蔓
延和危害；另外，组织培养可以弥补传统植物种质资
源的保存所存在的缺陷，在有限的空间里和简单的
维护条件下，使优良林木种质资源长久保存［２０］，目
前这种技术已在苹果、梨、酸梅等果树种质资源保存
上应用［２１－２２］，海棠花种质资源的保存也可得益于此。
已有许多学者研究表明，暗培养能促进苹果离
体叶片的再生［２３－２４］。本试验中海棠花叶片暗培养２
周后转入光照培养，接种叶片暗培养１周后即可看
到部分叶盘有愈伤组织形成，叶基部尤其近叶柄处
最先发生愈伤组织且以后不定芽再生芽数量也多，
其次为叶中部叶脉处，叶端部最差，这可能是不同部
位发育程度不同造成的［２５］。而提前置于光下培养
的叶盘愈伤组织老化，直接放在光照下培养的叶盘
则没有再生。因此海棠花暗培养的最佳时间还有待
进一步研究。
目前，林木组织培养多数还停留在试验研究上，
因此今后需要有一套可行的措施，开展以观赏价值
为主的海棠花综合价值的开发应用，将研究成果转
化为有经济价值的大规模生产实践，以创造更大的
社会效益和经济效益。
参考文献：
［１］　邓运川．海棠花的栽培管理［Ｊ］．中国花卉园艺，２００８（８）：３４－
３６．
［２］　刘志强，汤庚国．海棠在园林中的应用研究［Ｊ］．苏州科技学
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ｃｕｌｔｉｖａｒ　Ｇａｌａ　ｗｉｔｈ　ａ　ＦＴｇｅｎｅ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕ－
ｍｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｂｏｒｅａｌｉ－Ｓｉｎｉｃａ，２００８，２３
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ｐｌｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２０（１）：４９－５３．（ｉｎ
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７９第２期 谭黎霞 等：海棠花离体繁殖技术研究