全 文 ：王小敏 ,李海燕 ,吴文龙 ,等.蓬蘽花粉低温贮藏研究 [ J] .江苏农业科学 , 2010(3):170-171.
蓬蘽花粉低温贮藏研究
王小敏 , 李海燕 , 吴文龙 , 屈乐文 , 李维林
(江苏省中国科学院植物研究所 /南京中山植物园 ,江苏南京 210014)
　　摘要:通过对蓬蘽花粉萌发最佳培养时间 、花粉含水量 、贮藏温度和贮藏时间的研究 ,表明蓬蘽花粉在 25℃的恒
温条件下最佳的培养时间为 6 h, 花粉低温贮藏的最适含水量为 20.31%, 最适温度为 -10 ℃。
　　关键词:蓬蘽;花粉;低温;贮藏
　　中图分类号:S663.201　　文献标志码:A　　文章编号:1002-1302(2010)03-0170-02
收稿日期:2009-09-14
基金项目:江苏省农业高科技项目(编号:BG2007311);江苏省科技
基础设施建设计划项目(编号:BM2008101)。
作者简介:王小敏(1980—),女 ,山东苍山人 ,硕士 ,研究实习员 ,主要
从事植物栽培与生物技术研究工作。 E-mail:xmwang525@ 163.
com。
通信作者:李维林。 E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net。
　　蓬蘽(RubushirsutusThunb.)是蔷薇科悬钩子属 (Rubus
L.)浆果植物 ,聚合果 , 外观呈圆球形 ,色泽鲜红 ,香味独特 ,
酸甜适中 ,含丰富的氨基酸 、糖 、矿质元素 、有机酸和维生素 E
等营养物质 ,可鲜食或作药用 、食用原料 ,如加工成果汁、果
酱 、果酒 、果冻 , 或制茶 [1 -3] ,是悬钩子类果树宝贵的育种材
料 。蓬蘽花粉在贮藏运输过程中 ,花粉的生活力 、萌发率会受
到一定程度的影响 ,从而影响杂交育种工作的成功率 。国内
外已有黄藤花 、沙田柚 、西南桦等花粉低温贮藏的研究报
道 [ 4 -6] ,但迄今为止未见蓬蘽花粉低温贮藏的研究报道 。本
试验以蓬蘽花粉为材料 ,进行了低温贮藏的初步研究 ,旨在为
悬钩子果树(黑莓 、树莓)的杂交育种工作提供科学依据 。
1　材料与方法
1.1　材料
试验花粉采自南京紫金山野生蓬蘽植株 。 2008年 4月
采集蓬蘽不同植株上含苞待放的花蕾 ,用镊子取下花药后置
于硫酸纸上铺开 ,待花粉散落后 ,收集花粉过 100目筛 ,装入
医用小瓶(10 mL)并抽真空 , 3 ℃下保存待用 。
1.2　方法
1.2.1　花粉培养时间 　用悬滴法培养新鲜花粉 。用吸管取
培养液 1 ～ 2滴在盖玻片上 ,用毛笔蘸取少量花粉轻拍 ,使花
粉均匀散落在培养液表面 ,将盖玻片倒扣在载玻片凹穴 ,使培
养液呈悬滴状态 ,置于 25 ℃的恒温箱内培养 。每隔 1h将花
粉置于 OlympusCX -41系统显微镜下放大 200倍观察 1
次 ,每次观察 5个视野 ,每个视野的花粉需在 50粒以上 ,统计
花粉粒总数和萌发花粉数 ,计算花粉萌发率。
1.2.2　花粉的干燥　取 15个医用小瓶 (10 mL),每瓶中分
别放入 0.5 g花粉 ,随机分成 5组 ,分别敞口放入装有 100 g
硅胶的罐头瓶内 ,将罐头瓶密封后置于 3 ℃的冰箱中 ,每隔
2 h取出 1组称重(为了防止花粉吸潮 , 天平内放少许干燥
剂),计算各处理的花粉含水量和初始萌发率 。将新鲜花粉
以及干燥 2、4、6 、8、10h后的花粉密封抽真空 ,置于 0 ℃冰箱
内 , 5 d后用悬滴法检测花粉萌发率 , 确定花粉干燥最佳
时间 。
1.2.3　花粉含水量测定　将称量瓶(含瓶盖)在 105 ℃的烘
箱中烘至恒重(W1 ),然后放入适量花粉(0.050±0.0 01g),
一起将称量瓶和花粉称重(W2),将盛有花粉的称量瓶放入烘
箱中 ,于 105 ℃下烘干至恒重 。烘干完毕后称量瓶迅速盖上
瓶盖 ,置于干燥器中 ,待冷却后再次称重(W3),计算花粉含水
量 。重复 3次 ,取平均值 。花粉含水量 =(W2 -W3)/(W2 -
W1 )×100%。
1.2.4　花粉低温贮藏条件 　将最佳含水量的花粉平均分为
16份 , 每份 0.2 g, 随机分成 4组 ,分别密封于医用小瓶
(10mL)中 ,分别置于 3、0、 -10、 -18℃的冰箱中 ,贮藏 0、3、
10、15、30d后测定花粉生活力和萌发率 。为防止出现冻融现
象 ,从 0℃以下取出的花粉 ,先在 3 ℃放置 15 min,再流水冲
20 min。统计每视野的花粉粒总数和萌发花粉数时 ,每视野随
机抽取 5粒花粉 ,用显微测微尺测定花粉管的长度 。花粉培
养液 为 H2BO3 1 g/L+Ca(NO3 )2 · 4H2O 3 g/L+
MgSO4 · 7H2O2g/L+KNO3 1g/L+蔗糖 5%。
1.3　数据处理
应用 SPSS11.0和 Excell软件对花粉萌发率进行方差分
析 。花粉萌发率按下式计算:花粉萌发率 =(1个视野中萌发
的花粉粒数 /1个视野中全部花粉粒数)×100%。花粉管长
度大于或等于花粉粒直径的即为萌发 ,取 5个视野的平均值
代表花粉萌发率 。
2　结果与分析
2.1　花粉培养时间对萌发率的影响
由图 1看出 ,蓬蘽花粉在培养液中培养时间不同其萌发
率有较大差异 。培养 2h以内的花粉萌发率很低(<8.1%),
培养 2 h之后萌发率迅速上升 ,培养 4 ～ 5 h后又减缓 ,培养
6 h时达 64.4%,之后趋于稳定 。由此可确定 ,在 25 ℃下 ,蓬
蘽花粉培养的最佳时间为 6 h。
2.2　花粉含水量对花粉萌发率的影响
由表 1可知 ,新鲜花粉用硅胶干燥 6h、8h和 10h后 ,其
含水量从 39.31%分别下降至 20.31% 、12.47%和 7.24%。
干燥 2 ～ 6 h花粉的萌发率差异不显著 ,干燥 2h的萌发率比
新鲜花粉降低了 4.2百分点 ,干燥 10h花粉的萌发率迅速下
降 ,比新鲜花粉的萌发率降低了 42.6百分点。未经干燥处理
—170— 江苏农业科学　2010年第 3期
DOI :10.15889/j.issn.1002-1302.2010.03.114
的花粉贮藏 5d后萌发率下降 42.4百分点 。含水量 36.02%
(干燥 2 h)的花粉贮藏 5 d后萌发率下降了 28.8百分点 。含
水量 20.31%(干燥 6 h)的花粉贮藏 5 d后萌发率下降最少 ,
为 1.6百分点 。含水量 7.24%(干燥 10h)的花粉贮藏 5d后
萌发率仅为 5.2%。由此可以看出 ,蓬蘽花粉属于干燥敏感型
花粉 ,花粉的含水量对萌发率有较大的影响 。当花粉的含水量
过高(>36.02%)或过低(<12.47%)时 ,贮藏一段时间后 ,花
粉的萌发率均显著下降 。本试验可以确定蓬蘽花粉低温贮藏
的最适含水量为 20.31%,即新鲜花粉用硅胶干燥 6h。
表 1　蓬蘽花粉不同干燥时间下的含水量及其对萌发率的影响
花粉干燥时间
(h)
含水量
(%)
初始萌发率
(%)
贮藏 5d后
萌发率(%)
新鲜花粉 39.31a 62.7a 20.3e
2 36.02b 58.5b 29.7d
4 27.56c 56.9b 43.1bc
6 20.31d 55.2b 53.6a
8 12.47e 51.4c 46.9b
10 7.24f 20.1f 5.2f
　　注:同列数字不同的小写字母表示 5%差异。表 2、表 3同。
2.3　花粉贮藏条件对花粉萌发的影响
由表 2可知 ,蓬蘽花粉在 3 ℃下贮藏 3 d,萌发率下降
15.8百分点 ,而在 0 ℃、 -10 ℃和 -18 ℃下贮藏 3d花粉的
萌发率分别下降了 1.1、0.8和 0.3百分点。 4种温度下贮藏
10 d,花粉的萌发率差异显著 ,但 -10℃和 -18 ℃贮藏的花
粉萌发率差异不显著 。 3 ℃和 0 ℃贮藏 15 d时 ,花粉萌发率
分别下降了 36.8和 22百分点 。 3 ℃和 0 ℃贮藏 30 d萌发率
仅剩 9.2%和 27.4%,而 -10 ℃和 -18 ℃条件下贮藏 30 d
花粉的萌发率差异不显著 ,仅降低了 5.9和 4.7百分点 ,活力
保存较好 。从节约成本方面考虑 ,蓬蘽花粉短期内的低温贮
藏 , -10℃优于 -18 ℃。
表 2　不同贮藏温度和时间下蓬蘽花粉的萌发率(%)
贮藏
温度
(℃)
花粉萌发率(%)
新鲜花粉 贮藏 3h 贮藏 10h 贮藏 15h 贮藏 30h
3 55.2 39.4b 25.9c 18.4c 9.2c
0 55.2 54.1a 39.8b 33.2b 27.40b
-10 55.2 54.4a 52.9a 51.1a 49.3a
-18 55.2 54.9a 53.1a 51.9a 50.5a
　　由表 3可知 ,贮藏温度和时间对蓬蘽花粉管萌发长度影
响较大 ,随着贮藏温度的下降和贮藏时间的延长 ,花粉管的萌
发长度变短 。蓬蘽花粉在 3 ℃和 0 ℃下 ,贮藏 10 d以内 ,花
粉管的长度差异不显著 ,分别下降了 8.9 μm和 10.5μm。而
在 -10℃和 -18℃条件下贮藏 10d,花粉管的萌发长度差异
不显著 ,比贮藏 3 d的分别下降 12.6 μm和 14.7 μm。贮藏
15 d时 ,花粉管长度差异显著 , -10 ℃贮藏的花粉管长度比
-18 ℃贮藏的长 10.8μm。贮藏 30d时 4种贮藏温度下 ,花
粉管的萌发长度均差异显著 。综合考虑花粉的萌发率和花粉
管萌发长度的因素 ,蓬蘽花粉短期内低温贮藏 ,温度掌握在
-10 ℃即可 。
表 3　不同贮藏温度和时间下蓬蘽花粉管萌发的长度
贮藏
温度
(℃)
花粉管萌发长度(μm)
贮藏 3d 贮藏 10d 贮藏 15d 贮藏 30d
3 147.2a 138.3a 129.6a 122.7a
0 145.6a 135.1ab 121.5b 116.3b
-10 144.8a 132.2b 118.3bc 111.4c
-18 144.4a 129.7b 107.5d 96.7d
3　结论
蓬蘽新鲜花粉在 25℃下培养 ,萌发率随着培养时间的延
长而升高 , 6 h后花粉的萌发率趋于稳定 ,因此认为蓬蘽花粉
25 ℃下培养的最佳时间为 6 h。
蓬蘽花粉属于干燥敏感型花粉 ,干燥易使其失活从而降
低杂交育种的成功率 。新鲜蓬蘽花粉的含水量为 45.31%,
花粉含水量较高(大于 36.02%)或较低(小于 12.47%)均不
利于花粉活力的保存 。用硅胶干燥 6 h至含水量约为
20.31%时 ,花粉的活力 (萌发率)保存较好 ,且有利于低温
贮藏 。
蓬蘽花粉在 3℃条件下贮藏 30 d,活力(萌发率)迅速下
降 ,在 0 ℃条件下贮藏 30d活力(萌发率)保存也较低 ,而在
-10 ℃和 -18℃条件下贮藏 30 d活力下降较少 ,仍保存较
高的萌发率 ,因 -10 ℃和 -18 ℃花粉的萌发率差异不显著 ,
故选取 -10 ℃作为蓬蘽花粉低温贮藏的条件 。
蓬蘽花粉管萌发的长度受贮藏温度和贮藏时间的影响较
大 ,随着贮藏温度的下降和贮藏时间的延长 ,花粉管萌发长度
变短 。
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—171—王小敏等:蓬蘽花粉低温贮藏研究