全 文 ：　［收稿日期］　２０１５－０５－２５；２０１５－１０－０７修回
　［基金项目］　国家自然科学基金项目青年项目（８１１０２７９６）；贵州省科技厅、安顺市人民政府、安顺学院联合基金项目［黔科合Ｊ字ＬＫＡ
（２０１２）１３］；贵州省教育厅功能材料与资源化学特色重点实验室专项［黔教高发（２０１１）２７８］。
　［作者简介］　敖国富（１９８２－），男，讲师，硕士，从事植物生理及森林培育工作。Ｅ－ｍａｉｌ：３０６４４０９１１＠ｑｑ．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１５）１０－０５５９－００８２－０４
冬青叶鼠刺叶绿素的提取及其稳定性
敖国富１，２，周甜敏３，张 来１，２
（１．安顺学院 农学院，贵州 安顺５６１０００；２．安顺学院 贵州省教育厅功能材料与资源化学特色重点实验室，
贵州 安顺５６１０００；３．安顺市第三中学，贵州 安顺５６１０００）
　　［摘　要］为给冬青叶鼠刺的生理生态研究提供理论参考，采用７种提取溶剂在室温和冰浴条件下提取
冬青叶鼠刺的叶绿素，研究在不同光照时间、不同温度、不同浓度 Ｈ２Ｏ２ 及处理时间和金属离子条件下叶绿
素的稳定性。结果表明：在室温条件下，无水乙醇∶丙酮（１∶１）混合液提取冬青叶鼠刺叶绿素ａ和叶绿素ｂ
的吸光度分别为１．６２２和０．６７５，８０％丙酮提取叶绿素ａ和叶绿素ｂ的吸光度分别为０．４５８和０．２６４，说明
无水乙醇∶丙酮（１∶１）提取冬青叶鼠刺叶绿素的效果最佳，８０％丙酮的效果最差；Ｈ２Ｏ２ 对冬青叶鼠刺叶绿
素稳定性的影响较大，温度对冬青叶鼠刺叶绿素稳定性的影响较小，光照时间对冬青叶鼠刺叶绿素ａ影响
大；金属离子Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｚｎ２＋和 Ｍｇ２＋对叶绿素ａ稳定性影响不明显，Ａｌ　３＋对叶绿素ａ稳定性减弱，Ｆｅ２＋、
Ｃｕ２＋和Ｃａ２＋对叶绿素ａ的稳定性减弱。
［关键词］冬青叶鼠刺；叶绿素；提取；稳定性
［中图分类号］Ｑ９４６．９１ ［文献标识码］Ａ
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｆｒｏｍＩｔｅａ　ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　Ｌｅａｖｅｓ
ＡＯ　Ｇｕｏｆｕ１，２，ＺＨＯＵ　Ｔｉａｎｍｉｎ３，ＺＨＡＮＧ　Ｌａｉ　１，２
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ａｎｓｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈｕｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５６１０００；２．Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ
Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　Ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｎｓｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｎｓｈｕｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５６１０００；３．Ｔｈｉｒｄ　ｍｉｄｄｌｅ
ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ａｎｓｈｕｎ　Ｃｉｔｙ，Ａｎｓｈｕｎ，Ｇｕｉｚｈｏｕ５６１０００，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｉ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　ｌｅａｖｅｓ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｓｅｖｅｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ｕｎｄｅｒ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｉｃｅ－ｂａｔｈ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｉｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　Ｈ２Ｏ２ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ　ｏｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｆ　Ｉ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ａ　ａｎｄ
ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｂ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｉｘｅｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｆ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ａｎｄ　ａｃｅｔｏｎｅ（１∶
１）ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｉｓ　１．６２２ａｎｄ　０．６７５ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｂｕｔ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ａ　ａｎｄ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ
ｂ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　ｂｙ　８０％ａｃｅｔｏｎｅ　ｉｓ　０．４５８ａｎｄ　０．２６４ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ，ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ
ｍｉｘｅｄ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｏｆ　ａｂｓｏｌｕｔｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｌｃｏｈｏｌ　ａｎｄ　ａｃｅｔｏｎｅ（１∶１）ｉｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　８０％
ａｃｅｔｏｎｅ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｗｏｒｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．Ｈ２Ｏ２ｈａｓ　ａ
ｌａｒｇｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａｂｕｔ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｈａｓ　ａ　ｌｉｔｔｌｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ
ｏｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．Ｉｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｈａｓ　ａ　ｌａｒｇｅ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ａ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．Ｋ＋，Ｎａ＋，Ｚｎ２＋ ａｎｄ　Ｍｇ２＋ ｈａｖｅ　ｎｏ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｎ
ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ａ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．Ｂｕｔ　Ａｌ　３＋，Ｆｅ２＋，Ｃｕ２＋ａｎｄ　Ｃａ２＋ｃａｎ　ｒｅｄｕｃｅ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ａ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｉｔｅａ　ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ；ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
　　冬青叶鼠刺（Ｉｔｅａ　ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　Ｏ．）为虎耳草科
（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）鼠刺属 （Ｉｔｅａ）的常绿植物［１］。
Ｃｒｏｎｑｕｉｓｔ分类系统将其归为茶藨子科（Ｇｒｏｓｓｕｌａｒｉ－
ａｃｅａｅ）鼠刺亚科（ＳｕｂＦａｍ．Ｉｔｅｏｉｄｅａｅ）鼠刺属（Ｉｔ－
ｅａ）。冬青叶鼠刺根干、平，清热止咳，滋补肝肾，用
于劳虚咳嗽，咽喉干痛，目赤；根、花用于跌打损伤，
扭伤，外伤出血［２］。叶绿素是植物光合作用的主要
参与者，其含量是评估植物生物量、生产量和健康程
度等的生理指标［３－６］。天然叶绿素不溶于水，在遇
热、光、氧等条件下易分解，所以在植物叶绿素提取
时须对不同处理条件下叶绿素的稳定性进行研
究［７－１０］。冬青叶鼠刺叶绿素可用于食品添加剂、化
妆品及药物的着色等。目前未见冬青叶鼠刺叶绿素
研究的相关报道。试验以冬青叶鼠刺叶片为试验材
料，探讨适合于冬青叶鼠刺叶绿素提取和稳定性的
最适条件，旨在为冬青叶鼠刺的光合特性、耐阴性等
生理生态研究提供理论参考。
１ 材料与方法
１．１ 材料与仪器
冬青叶鼠刺叶：采自安顺市郊区，无虫、无病害
的完整叶片。
　贵州农业科学　２０１５，４３（１０）：８２～８５
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
仪器：ＵＶ５３００ＰＣ分光光度计（上海元析仪器
有限公司）。
试剂：无水乙醇、丙酮、Ｋ２ＳＯ４、ＮａＣｌ、ＦｅＳＯ４、
ＣｕＳＯ４、ＣａＣｌ２、ＺｎＳＯ４、ＭｇＳＯ４、ＡｌＣｌ３均为分析纯。
１．２ 冬青叶鼠刺叶绿素的提取及条件
取当年成熟的冬青叶鼠刺叶片，去除较大的叶
脉后，剪碎，混匀，称取０．２ｇ，加少许提取溶剂，同时
加少量的碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆后，４　０００ｒ／
ｍｉｎ离心４ｍｉｎ，取上清液加相应的提取溶剂定容到
１０ｍＬ，４次重复。提取溶剂分别为１００％丙酮、
８０％丙酮、无水乙醇、９５％乙醇、无水乙醇∶丙酮
１∶１、无水乙醇∶丙酮１∶２和无水乙醇∶丙酮
２∶１；提取温度为室温和冰浴［９－１３］。
１．３ 冬青叶鼠刺叶绿素吸收值的测定
１．３．１ 叶绿素储备液的配制 精确称取０．２ｇ叶
片，以叶绿素吸光度最大的溶剂进行提取。
１．３．２ 叶绿素吸收光谱的扫描 取一定量叶绿素
提取液于比色皿中，用紫外分光光度计在１９０～
１　０００ｎｍ进行光谱扫描。
１．４ 不同条件下冬青叶鼠刺叶绿素的稳定性测定
１．４．１ 存放时间 取５ｍＬ叶绿素浓缩液７份，实
验室（室温２１℃）自然光照条件下放置０ｈ、１ｈ、２ｈ、
４ｈ、６ｈ、８ｈ和１０ｈ后，测定吸光度值，４次重复。
１．４．２ 温度 取５份１０ｍＬ浓缩液至具塞试管
中，分别在３０℃、５０℃、６０℃、７０℃和８０℃条件下恒
温水浴加热处理１０ｍｉｎ，冷却至室温，测定吸光度
值，４次重复，以室温处理作对照。
１．４．３ 过氧化氢 取０．５ｍＬ叶绿素浓缩液，分别
加入０．１５％、０．３０％、０．６０％、０．９０％、１．２％Ｈ２Ｏ２
７．５ｍＬ，静置０．５ｈ、１ｈ和２ｈ，观察颜色变化并测
定吸光度值，４次重复。
１．４．４ 金属离子 取２ｍＬ叶绿素浓缩液，分别加
０．１ ｍｏｌ／Ｌ［１４－１５］的 Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃａ２＋、
Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋和 Ａｌ　３＋定容到１０ｍＬ，观察叶绿素溶液
颜色变化，１ｈ后测定其吸光度值，４次重复，以纯净
水作对照。
２ 结果与分析
２．１ 冬青叶鼠刺叶绿素的吸收光谱
由图１可知，冬青叶鼠刺叶绿素提取液在１９０～
１　０００ｎｍ波长扫描后，在６６３ｎｍ波长处有明显的
吸收峰，选定该波长分析冬青叶鼠刺叶绿素的稳定
性。
２．２ 不同提取溶剂和温度的冬青叶鼠刺叶绿素
吸光度
由图２可知，用９５％乙醇、无水乙醇∶丙酮
（１∶１）和无水乙醇∶丙酮（２∶１）提取冬青叶鼠刺叶
绿素时，室温下叶绿素ａ、叶绿素ｂ吸光度明显高于
冰浴；用１００％丙酮、８０％丙酮、无水乙醇、无水乙
醇∶丙酮（１∶２）提取冬青叶鼠刺叶绿素时，室温
图１ 冬青叶鼠刺叶绿素的吸收光谱
　Ｆｉｇ．１　Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａｌｅａｖｅｓ
图２ 不同提取溶剂和温度处理冬青叶鼠刺叶绿素的吸光度
　Ｆｉｇ．２　Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ
Ｉ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａｌｅａｖｅｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
下叶绿素ａ、叶绿素ｂ吸光度约高于冰浴。７种提取
溶剂中无水乙醇∶丙酮（１∶１）在室温和冰浴下叶
绿素ａ、叶绿素ｂ的吸光度最大，室温下叶绿素ａ、叶
绿素ｂ的吸光度分别为１．６２２和０．６７５，冰浴下叶
绿素ａ、叶绿素ｂ的吸光度分别为１．３６０和０．５６２；
８０％丙酮在室温、冰浴下的吸光度最小，室温下叶绿
素ａ、叶绿素ｂ的吸光度分别为０．４５８、０．２６４，冰浴
下叶绿素ａ、叶绿素ｂ的吸光度分别为０．３９４和
０．２８８。由于叶绿素是一种含有双羧酸酯的金属卟
啉衍生物，难溶于水，如提取溶剂中含水量增加，其
溶解度降低，而单一有机溶剂提取叶绿素效果往往
比混合有机溶剂差。试验用无水乙醇和丙酮等体积
混合可将冬青叶鼠刺叶绿素充分提取出来，故采用
等体积的无水乙醇和丙酮室温条件下提取叶绿素较
好。
２．３ 不同因素对冬青叶鼠刺叶绿素稳定性的影响
２．３．１ 光照时间 由图３可知，冬青叶鼠刺叶绿
素的吸光度随光照时间的延长降低，放置１０ｈ后吸
光度降低近一半。叶绿素的光解机制表明，叶绿素
在空气或氧气中进行光氧化时会产生羟基，这种不
可逆的氧化过程以叶绿素三重态与羟基反应得以继
续，而叶绿素的光氧化降解必须有氧分子存在，且含
有氧分子少的溶液相对稳定［１６］，长时间与空气接触
将降低叶绿素的稳定性。因此，应尽量在光照较弱
处提取冬青叶鼠刺叶绿素，且避光保存。
·３８·
　敖国富 等　冬青叶鼠刺叶绿素的提取及其稳定性
　ＡＯ　Ｇｕｏｆｕ　ｅｔ　ａｌ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｆｒｏｍＩｔｅａ　ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　Ｌｅａｖｅｓ
图３ 冬青叶鼠刺叶绿素在不同光照时间、温度和过氧化氢浓度下的吸光度
Ｆｉｇ．３　Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａｌｅａｖｅｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｈｙｄｒｏ－
ｇｅｎ　ｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
２．３．２ 温度 由图３还可知，温度对冬青叶鼠刺
叶绿素含量的影响不明显，在５０℃、６０℃和７０℃温
度下，叶绿素的吸光度几乎无变化。表明冬青叶鼠
刺叶绿素在低于７０℃时其稳定性受温度的影响较
小，有利于该叶绿素的工业化提取。
２．３．３ 过氧化氢 由图３还可知，相同处理时间
内，随着过氧化氢浓度的增加，冬青叶鼠刺叶绿素的
吸光度递减；相同浓度的过氧化氢处理时，随着处理
时间的增加，冬青叶鼠刺叶绿素的吸光度递减。说
明过氧化氢影响冬青叶鼠刺叶绿素的稳定性，可能
是其强氧化性致使其氧化脱色。
表 不同金属离子下冬青叶鼠刺叶绿素的稳定性
Ｔａｂｌｅ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍＩ．ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａｌｅａｖｅｓ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ
金属离子
Ｍｅｔａｌ　ｉｏｎｓ
吸光度
Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ
均值
Ｍｅａｎ
ＳＤ 溶液颜色
Ｃｏｌｏｒ
沉淀
Ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ
Ｋ＋ ０．９１２　 ０．９０２　 １．０７６　 ０．９５４　 ０．９６１ ＋０．０７ 绿色 浑浊，无沉淀
Ｎａ＋ ０．９０１　 ０．９２６　 １．０５１　 １．１３５　 １．００３ ＋０．１１ 绿色 浑浊，无沉淀
Ｆｅ２＋ １．８１３　 １．７２４　 １．６６０　 １．７１６　 １．７２８ ＋０．０６ 黑色 澄清，有沉淀
Ｃｕ２＋ １．３７０　 １．２４２　 １．２７１　 １．１２１　 １．２５１ ＋０．１０ 浅蓝 澄清，有沉淀
Ｃａ２＋ １．１４０　 １．１０９　 １．１７６　 ０．９７８　 １．１０１ ＋０．０９ 浅绿 澄清，絮状沉淀
Ｚｎ２＋ １．０８１　 ０．９１４　 １．００６　 ０．９３１　 ０．９８３ ＋０．０８ 绿色 浑浊，无沉淀
Ｍｇ２＋ １．０６１　 １．１３８　 ０．９０３　 １．０２０　 １．０３１ ＋０．１０ 绿色 浑浊，无沉淀
Ａｌ　３＋ ０．８６９　 ０．７７８　 ０．８４７　 ０．９５８　 ０．８６３ ＋０．０７ 绿色 浑浊，无沉淀
对照ＣＫ　 ０．９０３　 ０．８７９　 １．０５１　 ０．８８７　 ０．９３０ ＋０．０８ 绿色 澄清，无沉淀
２．３．４ 金属离子 由表可知，与对照相比，加入
Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｚｎ２＋、Ｍｇ２＋和Ａｌ　３＋离子后，溶液均浑浊，
无沉淀，６６３ｎｍ波长下 Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｚｎ２＋和 Ｍｇ２＋吸
光度略高于对照，产生的浑浊物影响吸光度，说明其
对叶绿素的稳定性有一定影响，但不明显，Ａｌ　３＋吸
光度低于对照，说明其对叶绿素稳定性有较大的影
响。加入Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋和Ｃａ２＋后，溶液均产生沉淀，
上层澄清，提取液加入Ｆｅ２＋后溶液颜色很快从绿色
变为黑色，吸光度大于对照，表明Ｆｅ２＋离子能迅速
破坏叶绿素稳定性；加入Ｃｕ２＋后颜色很快变为浅蓝
色，吸光度大于对照，加入Ｃａ２＋后颜色很快变为浅
绿色，吸光度大于对照，表明Ｃｕ２＋和Ｃａ２＋离子破坏
叶绿素稳定性。
３ 结论与讨论
通过７种不同提取溶剂在室温和冰浴条件下提
取冬青叶鼠刺叶绿素的研究表明，无水乙醇∶丙酮
（１∶１）为提取溶剂时提取冬青叶鼠刺叶绿素效果最
佳，室温下叶绿素ａ、叶绿素 ｂ的吸光度分别为
１．６２２和０．６７５；冰浴下叶绿素ａ、叶绿素ｂ的吸光度
分别为１．３６０、０．５６２；８０％丙酮提取效果最差，室温
下叶绿素ａ、叶绿素ｂ吸光度为０．４５８、０．２６４，冰浴
下叶绿素ａ、叶绿素ｂ吸光度分别为０．３９４、０．２８８。
李得孝等［１３］研究玉米叶片叶绿素快速浸提方法，得
出浸提液以乙醇－丙酮（１∶１）混合液效果最好。孙
崇鲁通过对香樟叶叶绿素提取条件的研究得出，香
樟叶叶绿素提取的优化工艺是以乙醇∶丙酮（１∶１）
为提取剂［１１］。郭素娟等［１２］对板栗不同类型枝条花
期和幼果期光合特性研究时，也用乙醇∶丙酮（１∶
１）为提取剂测定叶绿素含量。在提取冬青叶鼠刺这
类厚革质叶的叶绿素时，由于叶较硬提取时间长，用
丙酮（室温下）提取挥发量大，对人体有一定的伤害。
故试验选用冰浴条件下丙酮提取冬青叶鼠刺叶绿
素，以减少其挥发，但与室温相比叶绿素提取量少。
因此，在植物叶绿素提取和研究时，特别是厚革质类
叶，为达到最佳提取效果，建议选用无水乙醇∶丙酮
（１∶１）室温条件下提取，不适宜单独用丙酮。
冬青叶鼠刺叶绿素的稳定性研究表明，随着存
放时间的增加，叶绿素发生光氧化反应，叶绿素的稳
定性下降。温度对冬青叶鼠刺叶绿素的稳定性影响
较小。过氧化氢的较强氧化性影响冬青叶鼠刺叶绿
素的稳定性。金属离子 Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｚｎ２＋和 Ｍｇ２＋对
叶绿素的稳定性影响不明显，Ａｌ　３＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋ 和
Ｃａ２＋使叶绿素的稳定性减弱。因此，在冬青叶鼠刺
·４８·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
叶绿素的提取和含量分析时，避免与 Ｈ２Ｏ２、Ａｌ　３＋、
Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋和Ｃａ２＋接触，应在室温下快速提取和测
定。
［参 考 文 献］
［１］ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志
［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９５：２６５．
［２］ 中国药材公司．中国中药资源志要［Ｍ］．北京：科学出
版社，１９９４：４８１－４８２．
［３］ 陆銮眉，林金水，陈金河．７种观叶小盆栽植物的光合
特性与耐阴性研究［Ｊ］．热带作物学报，２０１３，３４（４）：
７３２－７３７．
［４］ 肖松江，孙振元，杨中艺，等．３种爬山虎属植物２３个
生态型的耐荫性研究［Ｊ］．中山大学学报，２００６，４５
（２）：７３－７７．
［５］ 唐焕伟，曲彦婷，张 兴．遮光对郁金香叶片叶绿素含
量及叶绿体超微结构的影响［Ｊ］．东北农业大学学报，
２０１１，４２（４）：７７－８２．
［６］ 张智顺，张庆费，夏　檑，等．遮阴对几种绿化植物光
合特性和生长的影响［Ｊ］．东北林业大学学报，２０１０，
３８（３）：４７－４９．
［７］ 却志群．烤烟叶片叶绿素提取及其稳定性研究［Ｊ］．河
南农业科学，２０１２，４１（７）：４７－４９，５３．
［８］ 王 敏，姜 莉，张为民．冬青叶绿素稳定性的试验研
究［Ｊ］．安徽农业大学学报，２００３，３０（４）：４５５－４５８．
［９］ 李 敏，游雄鹰，赵昌琼．茎瘤芥叶片中叶绿素的稳定
性研究［Ｊ］．食品科学，２０１１，３２（１９）：５０－５３．
［１０］ 陈新香，蔡碧琼，蔡珠玉，等．芦荟皮叶绿素的提取及
稳定性研究［Ｊ］．江西农业大学学报，２０１０，３２（１）：
１７５－１８０．
［１１］ 孙崇鲁．香樟叶叶绿素的提取及稳定性研究［Ｊ］．食品
研究与开发，２０１２，３３（１１）：６１－６４．
［１２］ 郭素娟，谢 鹏．板栗不同类型枝条花期和幼果期光
合特性研究［Ｊ］．东北农业大学学报，２０１３，４４（１０）：
７６－８１．
［１３］ 李得孝，侯万伟，员海燕．玉米叶片叶绿素快速浸提方
法研究［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然科学版，
２００６，３４（１７）：６５－６７．
［１４］ 张志忠，苏 雨，王文星，等．三叶草叶绿素的稳定性
研究［Ｊ］．中国食品添加剂，２０１３（５）：１０９－１１３．
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（责任编辑：孙小岚
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（责任编辑：孙小岚）
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　敖国富 等　冬青叶鼠刺叶绿素的提取及其稳定性
　ＡＯ　Ｇｕｏｆｕ　ｅｔ　ａｌ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌ　ｆｒｏｍＩｔｅａ　ｉｌｉｃｉｆｏｌｉａ　Ｌｅａｖｅｓ