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王 寒1，周 英1，李 燕1，黄赤夫2，*
(1.贵州大学生命科学学院，贵州贵阳，550025;
2.美国肯塔基大学口腔学院，美国肯塔基列克星敦，40503)
摘 要:目的:研究苦石莲不同提取组分对 THP－1 细胞中白细胞介素 6(IL－6)、白细胞介素 8(IL－8)浓度的影响。方
法:通过 ELISA法测定苦石莲乙醇提取物的乙酸乙酯层样品作用于 THP－1 细胞后 IL－6、IL－8 的浓度变化。结果:苦
石莲不同提取组分均能显著降低 IL－6、IL－8 浓度。结论:苦石莲不同提取组分能够有效抑制 IL－6、IL－8 的分泌，对牙
周炎的治疗具有一定的临床应用价值。
关键词:苦石莲，提取物，抗炎活性，牙周炎
Effect of Caesal pinia minax Hance extracts on the concentration of
IL－6 and IL－8 in C.Rectus infected THP－1
WANG Han1，ZHOU Ying1，LI Yan1，HUANG Chi－fu2，*
(1.College of Life Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China;
2.College of Dentistry，University of Kentucky，Lexington Kentucky of U.S.A.，40503)
Abstract:Objective:The effect of the different components of Caesal pinia minax Hance on the concentration of IL－6
and IL－8 in THP－1 were studied.Methods:The concentration of IL6 and IL8 in THP－1 were measured by ELISA
after THP－ 1 was treated with EAc extractive from ethanol extract of Caesal pinia minax Hance. Results:The
contents of IL6 and IL8 in THP－1 were significantly reduced by the components of Caesal pinia minax Hance.
Conclusion:The contents of IL6 and IL8 could be decreased by the different components of Caesal pinia minax
Hance.So the different components of Caesal pinia minax Hance had certain clinical significance to the diagnosis
of periodontitis.
Key words:Caesal pinia minax Hance;extracts;antiinflammatory activity;periodontitis
中图分类号:TS201.3 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2009)11－0074－03
收稿日期:2009－01－05 * 通讯联系人
作者简介:王寒(1982－) ，女，在读硕士研究生，研究方向:生物活性
成分分离提取。
基金项目:国家教育部留学回国人员科研基金及贵州省留学回国科技
项目资助。
白细胞介素 6(interlukin6，IL－6)是一种来源广
泛的多功能细胞因子，与牙周炎有密切的关系。最
近，有学者研究发现在病变牙周组织中存在着 IL－6
的表达，且表达程度显著高于正常牙周组织［1－2］。白
细胞介素 8(interlukin8，IL－8)主要是由单核细胞分
泌的中性粒细胞趋化因子［3］，在急性炎症期，可以引
导中性粒细胞聚集到炎症部位。中性粒细胞在吞噬
牙周病原菌时，自身消化溶解，同时释放出弹性蛋白
酶(elastase，EA)等。其中弹性蛋白酶能够水解胶原
蛋白、纤维粘连蛋白，广泛地破坏牙周结缔组织和骨
组织。因此对 IL－6 于 IL－8 的检测以及抑制 IL－6 与
IL－8 的分泌和破坏作用，对牙周炎的诊断和治疗具
有一定的临床价值。前期工作中我们选用 80 种中
药针对 IL－6、IL－8 的影响进行研究，初步发现苦石
莲有较强的抗炎活性。苦石莲(Caesal pinia minax
Hance)为豆科(Leguminosae)云实属(Caesal pinia)植
物喙荚云实的果实，生于低海拔的旷野草丛或缓坡
林缘，分布于广西、云南等地［4］，具有散瘀止痛、清热、
祛湿的功效［5］。本研究采用 ELISA 法，对苦石莲提
取物作用后的 THP－1 细胞中 IL－6、IL－8 浓度的调节
作用进行了初步的探索。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
苦石莲 购于贵州省药材公司，产地四川，包装
批号 070506;IL － 6、IL － 8 试剂盒 R＆D System
company;直形弯曲菌(C.Rectus)菌株、单核细胞
THP－1 购自 ATCC;RPMI 培养基 Oxoid Ltd;石油
醚、乙酸乙酯、甲醇、纯净水、95%乙醇 均为分析
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.11.087
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纯，购于贵阳中兴化学试剂公司。
酶 标 仪 MRX plate reader (Dynatech
Laboratories) ;旋转蒸发仪 BUCHIR－ 200;SHZ－ D
(Ⅲ)循环水式真空泵 巩义市予华仪器有限公司;
二氧化碳培养箱 上海齐欣科学仪器有限公司;真
空冷冻干燥机 LABCONCO;超低温冰箱 Forma
Scientific;双光束紫外可见分光光度计 北京普析通
用仪器有限公司 TU－1901;电子天平 OHAUS。
1.2 实验方法
1.2.1 苦石莲有效成分的提取 将干燥的苦石莲粉
碎，过 40 目筛，依次用 65%、80%、95%乙醇浸泡，合
并乙醇提取液，减压浓缩，于－80℃冷冻干燥。得到
的干燥粉末溶于水中，乙酸乙酯萃取，减压浓缩除去
乙酸乙酯，得浸膏。经硅胶柱层析分离，用石油醚和
乙酸乙酯作洗脱剂。洗脱梯度依次为石油醚∶乙酸乙
酯 = 20∶1、10∶1、5∶1、1∶1、1∶2、1∶3、乙酸乙酯、甲醇。薄
层色谱跟踪检测，共得到 23 个样品:1～2，21 为甲醇
洗脱样品;3 为乙酸乙酯洗脱样品;4 为石油醚∶乙酸
乙酯 = 1∶3 洗脱样品;5 为石油醚∶乙酸乙酯 = 1∶2 洗
脱样品;6～14 为石油醚 ∶乙酸乙酯 = 1 ∶1 洗脱样品;
15～16 为石油醚∶乙酸乙酯 = 5∶1 洗脱样品;17～18 为
石油醚∶乙酸乙酯 = 10 ∶1 洗脱样品;19 为石油醚 ∶乙
酸乙酯 = 20 ∶1 洗脱样品;20 为石油醚洗脱样品;22
为水层样品;23 为乙酸乙酯层样品。干燥后进行对
IL－6、IL－8 浓度影响的研究。
1.2.2 对 IL－6 及 IL－8 含量的影响 选用对激发
IL－6和 IL－8分泌有良好促进作用的直形弯曲菌
(C.Rectus)为供试菌。采用酶联免疫吸附实验
(ELISA)进行抗炎测试。选用的单核细胞 THP－1 为
供试细胞，检测细胞中的 IL－6 与 IL－8 的浓度，进而
检测提取物的抗炎作用。
确定提取物对细胞无毒性后，进行对 IL－6 和
IL－8浓度的影响实验。人体单核细胞 THP － 1 在
RPMI培养基培养至细胞密度约为 2 × 105cells /mL，
在 48 孔板中每孔注入 500μL培养基，再注入 4μL灭
活的直形弯曲菌(C.Rectus) ，并且每孔注入 4μL的提
取物。把培养基放置在 CO2 培养箱中，在 37℃下培
养 18h后收集样品，进行 ELISA 实验，用 IL－6 细胞
因子炎性实验盒测定提取物的活性。用全自动定量
绘图酶标仪在 450nm下测每个孔的光密度。同样的
方法检测 IL－8。阴性对照为:不加供试菌与提取物
的 THP－1 细胞，阳性对照为:加供试菌的 THP－1 细
胞。读取值换算为下调率，换算公式如下:
下调率 =阳性对照 OD值 －阴性对照 OD值 －样品
OD值 /阳性对照 OD值 －阴性对照 OD值 ×100%
2 结果与分析
采用酶联免疫吸附实验方法，测定了苦石莲乙
醇提取物的 23 组不同样品对 THP－1 细胞中的 IL－6
和 IL－8 的下调作用。如图 1、图 2 所示，23 组样品均
对 IL－6 有较明显的抑制作用，其中样品 1～19，21～23
都表现出很强的抑制作用，OD 值小于 0.01，说明这
些组分具有很强的抗炎活性。仅有样品 20 对 IL－6
的 OD 值达到 0.06，但明显小于阳性对照的 OD 值
(0.136) ，这说明它对 IL－6 仍然具有一定的抑制作
用。并且可以从图 2 中发现，经过 23 种样品处理的
THP－1 细胞，它们的 IL－6 浓度均明显低于阳性对照
的 27.46pg /mL，达到阴性对照的浓度水平，甚至经过
样品 2、6 和 23 处理的比阴性对照的浓度要小
7.0pg /mL。
图 1 23 种样品对细胞 THP－1 中 IL－6 OD值的影响
图 2 23 种样品对细胞 THP－1 中 IL－6 浓度的影响
图 3、图 4 结果显示，除了样品 1、20～22 外，其他
样品均对 THP－1 细胞中 IL－8 含量有的降低作用，其
中样品 3、10、15、23 对 IL－8 的抑制最强，OD 值明显
小于 0.01，浓度接近于阴性对照。并且从以上 4 组实
验数据显示，苦石莲提取物对 IL－6 的抑制效果好于
IL－8。
图 3 23 种样品对细胞 THP－1 中 IL－8 OD值的影响
图 4 23 种样品对细胞 THP－1 中 IL－8 浓度的影响
3 讨论
实验数据表明，苦石莲提取物对 IL－6 和 IL－8
的表达具有很强的下调作用。如表 1 所示，对 IL－6
来说，苦石莲提取物样品 15、16、21 能够显著降低
THP－1 中的 IL－6 的浓度，下调率在 99.5%以上。除
了样品 20 的下调率为 52.09%，样品 22 的下调率为
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表 1 IL－6 和 IL－8 的下调率
样品 IL－6 的下调率(%) IL－8 的下调率(%) 样品 IL－6 的下调率(%) IL－8 的下调率(%)
1 97.72 21.05 13 95.06 92.37
2 98.10 96.88 14 95.06 90.81
3 98.48 99.82 15 100 99.78
4 98.48 97.46 16 99.62 97.77
5 96.96 98.44 17 98.48 98.57
6 95.44 97.95 18 98.86 97.68
7 95.44 97.59 19 98.48 45.00
8 97.72 97.86 20 52.09 － 39.83
9 96.58 98.17 21 99.62 82.69
10 96.58 97.32 22 92.02 － 35.50
11 97.34 92.42 23 99.24 99.38
12 97.72 97.77
92.02%外，其它样品的下调率均在 95% 以上;对
IL－8来说，样品 3、15、23 能够有效降低 THP－1 中的
IL－8 的的浓度，下调率在 99%以上。样品 5、9、17
对 IL－8 均有很好的下调作用，下调率在 98%以上。
样品 1 的下调率为 21.05%，样品 21 的下调率为
82.69%，样品 20、22 对 IL－8 没有下调作用。从研究
中发现，下调作用的不同与组分的极性有一定的关
系。极性大的组分下调率相对低于极性小的组分，
其主要的活性组分集中在石油醚 /乙酸乙酯(V∶V =
5∶1 和1∶1)的洗脱部分。
本文结果显示，苦石莲提取物对 C.Rectus 侵染的
THP－1 细胞中 IL－6 及 IL－8 的浓度有较强的下调作
用。而 IL－6 及 IL－8 的高水平表达与牙周炎的发病
密切相关，牙周炎是牙周组织常见的细菌感染性疾
病，随年龄的增长逐渐增加，一些全身因素和疾病如
吸烟、糖尿病等对牙周组织有明显的影响［6－7］，其患
病率高严重危害人类健康。因此，对苦石莲提取物
的研究为探求有抗炎特征的天然产物对人类口腔炎
症的治疗，提供一定的实际意义，同时也为苦石莲药
用价值进一步的开发提供依据。
参考文献:
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73－75.
(上接第 73 页)
量的损失。无核白葡萄干的含水量在 10%～13%之
间，同样在长期贮藏的含水量标准范围内;总糖含量
达到 60%以上，即为含热量很高的营养品;总酸含量
与无核紫葡萄干一样是随温度的升高而降低;VC 含
量受温度影响导致的变化比较大，温度越高，VC 含量
越低。
表 1 不同温度无核紫葡萄干和无核白葡萄干的品质
品种
温度
(℃)
含水量
(%)
总糖
(%)
总酸
(%)
VC
(mg /100g)
无核紫
葡萄干
30 9.90 65.36 3.25 5.97
40 13.30 65.70 2.59 4.8
50 7.19 66.35 1.89 4.47
无核白
葡萄干
30 10.30 68.56 3.09 7.6
40 12.10 63.09 2.93 5.57
50 12.70 64.67 1.94 1.25
3 结论
3.1 干燥时间，通过不同干燥温度处理实验，表明随
着干燥温度的升高，无核葡萄干燥时间缩短;经过不
同预处理实验，表明经促干剂处理比无处理的干燥
时间短，无核白葡萄通过 2% NaOH 处理，结果显示
只有护色作用，没有加速干燥作用。
3.2 无核白葡萄干燥过程中褐变情况，随着干燥温
度的升高，褐变程度越严重，同时通过护色处理，5%
亚硫酸氢钠 +促干剂比 2%NaOH的护色效果好。最
后实验得出温度为 30℃，经促干剂处理后葡萄干的
色泽最好，色泽为青绿色。
3.3 葡萄干水分含量在 7%～14% 之间;总糖含量
(以转化糖计)大于 60%;总酸和 VC 的含量随着温度
的升高而降低。
参考文献
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