全 文 ：第 28卷第 4期
2001年 12月
湖 南 林 业 科 技
Hunan Forestry Science &Technology
Vol.28 No.4
Dec.2001
　　收稿日期:2001-06-08
　　修订日期:2001-10-22
文章编号:1003-5710 (2001) 04-0029-02
红 木 DNA 提取及其检测
唐前瑞1 , 李晨东2 , 陈德富2 , 陈喜文2 , 陈友云3 , 周朴华4
(1.湖南农业大学植物科技学院 , 长沙　410128;2.南开大学生物化学及分子生物学系 , 天津　300071;
3.湖南农业大学科技处 , 长沙　410128;4.湖南农业大学理学院 , 长沙　410128)
摘　要:用改良的异丙醇沉淀法对红 木 (Loropetalum chinense var.rubrum)叶片总 DNA进行
了提取 。结果表明 , OD260/OD280值接近 1.80 , 符合 RAPD分析的要求 , 且方法简便 , 成本低 , 速
度快。
关键词:红 木;DNA;提取
中图分类号:Q946.2　　　文献标识码:B
Method of DNA extraction in Loropetalum chinense var.rubrum
TANG Qian-rui1 , LI Chen-dong2 , CHEN De-fu2
CHEN Xi-wen2 , CHEN You-yun3 , ZHOU Pu-hua4
(1.Horticaltural Department , Hunan Agricultural University , Changsha 410128 , Hunan , China;
2.Department of Biochemistry and Molecular Bio logy , NanKai University , T ianjin 300071 , China;
3.Department of Scientific Research , Hunan Agricultural University , Changsha 410128 , Hunan , China;
4.Co llege of Science , Hunan Ag ricultural University , Changsha 410128 , Hunan , China)
Abstract:Total DNA was ex tracted from 16 Loropetalum materials leaves by improved isopropanol-precipi-
tating method.The results showed that the OD260/OD280was 1.80 and the DNA could be used fo r RAPD analy-
sis.Among the three main methods of DNA extraction , this method was practical and low expensive.
Key words:Loropetalum chinense var.rubum ;DNA;ex traction
　　红 木 (Loropetalum chinense var.rubrum)
为湖南特产的一种珍稀观赏树种。属金缕梅料 ,
木属 , 系 木 (L .chinense)的变种。红 木为
灌木或小乔木 , 枝叶繁茂 , 树姿多态 , 花红叶红 ,
具有很高的观赏价值 。经广大园艺工作者的不断努
力 , 形成了红 木古桩 、 红 木盆景 、 红 木绿化
苗木等系列产品 , 已销往省内外及出口创汇 。目前
国内外对红 木的研究仅对其扦插繁殖[ 1] , 组织
培养[ 2]和形态[ 3]等进行了研究 , 旨在为保证红
木 RAPD分析及有关的分子生物学研究工作顺利
进行 。
1　材料与方法
1.1　材料
试材来自湖南农业大学植物科技学院园林植物
资源圃收集的 14 份红 木材料和 2 份 木材料。
在初春取其嫩叶作为总 DNA提取材料。
1.2　方法
根据顾红雅等[ 4]的方法进行改进。随机摘取
2g 叶片 , 加入液氮研磨 , 倒入离心管中;加入
15mL buf ferl [ 0.1mol/ L Tris -Cl (pH 8.0),
0.05mol/L EDTA (pH 8.0), 0.5mol/L NaCl ,
2% PVP , 0.01 mol/L 巯基乙醇] , 混匀;加入
3mL 10%SDS , 剧烈振荡混匀;65℃水浴保温
60min;加入 6mL 5mol/L KAc (pH4.8), 剧烈振
荡;冰浴放置 30min , 然后4℃12000g 离心 20min;
上清液加入 10mL 预冷异丙醇 , -20℃放置 30 ～
60min;4℃12000g 离心 10min , 沉淀溶于 3mL
bufferll [ 0.05mol/L Tris-Cl (pH8.0), 0.01mol/
L EDTA (pH8.0)] ;加入 2/3 体积的预冷异丙醇
沉淀 DNA , -20℃放置 30 ～ 60min;4℃12000g 离
心10min , 沉淀用 1mL70%预冷乙醇洗涤 , 风干;
用适 量 TE [ 0.01mol/L Tris - Cl (pH8.0),
001mol/ L EDTA (pH8.0)] , 溶解 DNA , 4℃沉淀
过夜;第二天测 OD值 , 电泳检测 DNA。
2　结果与分析
2.1　DNA 样品纯度测定
表 1　红 木不同材料 DNA的 OD值
材料 OD 260 OD 280 OD260/OD280 浓度 (μg/μL)
1 0.075 0.046 1.63 2.25
2 0.055 0.033 1.67 1.65
3 0.081 0.050 1.62 2.43
4 0.071 0.043 1.65 2.13
5 0.055 0.034 1.62 1.65
6 0.077 0.049 1.57 2.31
7 0.025 0.016 1.56 0.75
8 0.060 0.037 1.62 1.80
9 0.050 0.032 1.56 1.50
10 0.035 0.021 1.67 1.05
11 0.064 0.039 1.64 1.92
12 0.069 0.044 1.57 2.07
13 0.034 0.023 1.48 1.02
14 0.035 0.019 1.84 1.05
15 0.028 0.017 1.65 0.84
16 0.103 0.060 1.72 3.10
　　用 TE对待测 DNA样品作 1∶600的稀释 , TE
作为空白对照 , 用 UV-9100紫外可见光分光光度
计测定提取的总 DNA 样品 , OD260 、 OD280值 。所
测得 OD值见表 1 , 16个材料所提取的总 DNA其
OD260/OD280值在 1.50 ～ 1.80 , 说明样品 DNA 的
纯度较好 。DNA浓度在 0.75 ～ 3.10ug/ul之间。
2.2　红 木总 DNA样品电泳检测
　　按每个样品 10μg 量电泳检测 DNA 样品 , 电
泳结果如图1 。从图1中可以看到 , 所提取的 DNA
比较完整 , 尽管有一定的降解现象 , 但从 RAPD
预实验结果看 , 本法所提取的 DNA 均能够得到很
好的扩增结果 。
图 1　红 木 DNA电泳图谱
3　讨论
总 DNA 提取方法主要有 3 种 , 即蛋白酶法 、
异丙醇沉淀法和异丙醇-NaCl法 。蛋白酶法提取
的总 DNA 产量高 , OD260/OD230 值最好 , 但其
OD260/OD280过高 , 说明含有较多的 RNA , 且需要
价格昂贵的蛋白酶 K , 及麻烦的酚/氯仿抽提过程 ,
花费较大 。异丙醇-NaCl法所提取的总 DNA产量
较低 , RNA含量也比较高 , 操作中也需要酚/氯仿
抽提 。而异丙醇沉淀法的产量居中 , OD260/OD280
最接近 1.80 , 操作简单 , 同时本研究对文献[ 4] 的
方法进行了改良 , 省去了 RNaseA 处理及苯酚/氯
仿 、 氯仿/异戊醇抽提等步骤 , 使 DNA 提取过程
变得更为简单 。因此 , 本实验改良的异丙醇沉淀
法 , 具有简单 , 快速 、 有效等特点。本法提取的红
木 DNA的 RAPD分析另文发表 。
参考文献:
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