全 文 ：Study of Angelica sinensis on estrogen of excising ovary rats model in menopause
Deng Yi1，Zhang Ming2，Ｒen Pengfei2，Zhang Yanping3
(1 Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmacology and Toxicology of Gansu Province;
2 Gansu University of TCM，Lanzhou 730000;3 Affiliated Hospital of Gansu College of TCM，Lanzhou 730020)
Objective:To observe the effect of Angelica on estrogen，uterus index and adrenal index of excising ovary rats model in menopause from
Minxian city in Gansu． Methods:Using ovary excision method to make model，and using Elisa(enzyme-linked immunosorbent assay)to de-
tect E2(Estrogen Estradiol)，FSH (Follicle Stimulation Hormone) ，LH(Luteinizing Hormone) ，PＲL(Prolactin) ，and using Gravimetric
method to detect uterus index and adrenal index． Ｒesults:Compared with model group，Large dose(1． 35g /kg /d) ，medium dose(0． 90g /
kg / d)and low dose(0． 45g /kg /d)group of Angelica of Minxian city angelica(岷当归)all can improve the standard of serum E2 decreasing，
and it has positive correlation tendency between interaction strength and dose;Large、medium dose can decrease density of serum FSH，large
dose has obvious difference(P ＜ 0． 01)，medium dose takes second place(P ＜ 0． 05) ;And all can improve serum LH;meanwhile，all can
decrease PＲL density，large、medium dose has obvious effect(P ＜ 0． 01) ;And all can increase uterus index and adrenal index，large dose
and medium dose have obvious difference(P ＜ 0． 05)． In comprehensive comparison，low、middle dose group function of Minxian city angelica
is weaker than Xiaoyaowan(逍遥丸)group． Conclusion:Minxian city angelica (0． 90 ～ 1． 35g /kg /d)has better regulation to E2，FSH，
PＲL，uterus index and adrenal index，Prompting Min County angelica can improve the abnormal of hypothalamus-pituitary-ovarian axis func-
tion，and relieve the decay of uterus and adrenal function to excising ovary rats model in menopause．
Key words Angelica sinensis(当归);menopause rats;estrogen
佛甲草对大鼠佐剂性关节炎的作用及对炎症因子的影响
周 青，眭荣燕，连磊凡，曹性玲，吴丽珍，黄志华*
(赣南医学院，赣州 341000)
摘 要 目的:研究佛甲草对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用，并探讨其对炎症反应相关细胞因子及炎症介质的影响。方法:
采用弗氏完全佐剂免疫诱导大鼠佐剂性关节炎动物模型; 测定原发性和继发性足肿胀;观察胸腺及脾脏指数的变化; 检测血清炎性
细胞因子 TNF-α、IL-6 的水平和关节液 PGE2 含量。结果:与模型组相比，4 g /kg 及 8 g /kg 佛甲草治疗后均能抑制大鼠原发性及继
发性足肿胀，下调胸腺及脾脏指数，显著降低血清 TNF-α、IL-6 水平及关节液 PGE2 含量。结论:佛甲草对大鼠佐剂性关节炎具有明
显的治疗作用，其作用机制可能与调节机体的免疫功能、减少炎性细胞因子及炎性介质的生成有关。
关键词 佛甲草;佐剂性关节炎;炎症因子
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，ＲA)是一种病因不明
的以慢性破坏性关节病变为特征的全身性自身免疫性疾病，表
现为多关节疼痛、肿胀和功能障碍。中医药对类风湿性关节炎
的治疗有着悠久的历史和切实的疗效，其治疗机制包括调节机
体免疫机能、改善血液流变及微循环、抗自由基损伤、调节细胞
因子等［1，2］。佛甲草是景天科植物佛甲草的全草。前期研究结
果证实佛甲草对急、慢性炎症反应均有较强的抑制作用和免疫
调节功能［3］，但佛甲草对类风湿性关节炎是否有治疗作用尚未
见文献报道。佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型是
评价治疗类风湿性关节炎药物的常用动物模型之一，本研究在
前期研究的基础上，采用佐剂性关节炎大鼠动物模型，观察佛
甲草对类风湿性关节炎的治疗作用，同时通过检测血清 TNF-α、
IL-6 及关节液 PGE2 的含量，探讨其治疗 ＲA 的可能机制，为将
佛甲草开发为治疗类风湿性关节炎的有效药物提供理论依据
和研究基础。
1 材料与方法
1． 1 试验药物 佛甲草:佛甲草晒干后粉碎至粗粉，取适量蒸
馏水加热提取 3 次，每次 30 min，过滤，合并 3 次滤液并浓缩至
适量，加入相当浓缩液 3 倍量 95%乙醇，放置冰箱 48 h 后减压
过滤，滤液回收乙醇至无醇味并浓缩成 2． 5 g /ml 的溶液，实验
前用生理盐水稀释至所需浓度供用;雷公藤多苷片(TPT)，黄石
飞云制药有限公司生产，批号:20101001。
1． 2 动物 Sprague-Dawley(SD)大鼠，SPF级，雄性，体重(180
± 20)g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证
号:SCXK(湘)2009-0004。实验前适应性饲养 1 周。
1． 3 试剂 肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNF-α
)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)酶联免疫试剂盒购自博士
德生物科技有限公司;弗氏完全佐剂(Freund＇s complete adju-
vant，FCA)为 Sigma公司产品。
1． 4 仪器 自制足趾容积测量器;连续光谱多功能酶标仪，美
501中药药理与临床 2013;29(4)
* 通讯作者
国热电;中佳 KLC-2046 型低速冷冻离心机，科大创新股份有限
公司中佳分公司;LB801 型超级恒温水浴箱，湖北黄石市医疗器
械厂。
1． 5 方法 大鼠 50 只，随机分为 5 组:正常组、佐剂性关节炎
模型组、佛甲草低剂量组(4 g /kg)、佛甲草高剂量组(8 g /kg)及
TPT(10 mg /kg)组，每组 10 只。各组大鼠左后足常规消毒后，
于足底皮下注射 0． 1 ml FCA致炎，正常对照组注射 0． 1 ml生理
盐水。第 7 d加强一针，复制佐剂性关节炎模型。于致炎前 3 d
及致炎后 16d，各组分别连续 ig 给予高、低剂量的佛甲草、阳性
药物及等体积的生理盐水，每天 1 次。
1． 5． 1 原发性及继发性足肿胀度测定 根据排水法原理采
用自制足容积测量器，按照文献方法［4］，于致炎前测定每只大
鼠左、右后肢足容积(ml)，分别于致炎后 6、12、18、24、48 及 72 h
测定大鼠致炎侧足容积，以致炎前、后致炎足容积差作为原发
性肿胀度。分别于致炎第 12、16、20、24、28 d 用同样方法测定
大鼠非致炎侧足容积，求出肿胀度作为继发性足肿胀度。
1． 5． 2 胸腺指数及脾脏指数测定 于致炎后 28 d，10%水合
氯醛麻醉大鼠，称体重，取胸腺及脾脏并称重，分别计算胸腺及
脾脏指数。脏器指数 =脏器重量(mg)/体重(g)。
1． 5． 3 血清 TNF-α及 IL-6 含量测定 于致炎后 28 d，10%水
合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，静置，3000 × g，4℃离心 10
min，分离血清于-80℃保存，严格按试剂盒说明，采用酶联免疫
吸附试验方法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测
血清 TNF-α、IL-6 含量。
1． 5． 4 关节液 PGE2 含量测定 于致炎后 28 d，大鼠麻醉后，
于左侧踝关节上 0． 5 cm处剪下炎性肿胀足，称重，剪碎，生理盐
水 5 ml浸泡 2 h，取出足爪，2 500 × g 离心浸泡液 10 min，取上
清液 0． 3 ml，加入 0． 5 mol /L KOH甲醇溶液 1． 0 ml，50℃水浴 20
min异构化，加甲醇 2． 5 ml，在 278nrn 波长下进行比色，用吸光
度(A)表示 PGE2 含量。
2 结果
2． 1 佛甲草对 AA 大鼠原发性病变的影响 与正常组相比，
AA模型组大鼠左足明显肿胀;佛甲草从致炎后 6 h开始发挥疗
效。佛甲草高、低剂量 ig给药均可明显减轻 AA 大鼠原发性病
变，结果见表 1。
表 1 佛甲草醇提物对 AA大鼠原发性病变的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
致炎后不同时间致炎足肿胀度(△ml)
6 h 12 h 18 h 24 h 48 h 72h
正常对照 0． 16 ± 0． 11＊＊ 0． 14 ± 0． 09＊＊ 0． 21 ± 0． 12＊＊ 0． 26 ± 0． 05＊＊ 0． 13 ± 0． 13＊＊ 0． 10 ± 0． 11＊＊
模型对照 1． 26 ± 0． 24 1． 36 ± 0． 19 1． 48 ± 0． 32 1． 43 ± 0． 28 1． 48 ± 0． 37 1． 43 ± 0． 39
佛甲草 4 0． 96 ± 0． 22* 1． 01 ± 0． 20＊＊ 1． 13 ± 0． 26* 1． 12 ± 0． 21＊＊ 1． 07 ± 0． 35* 0． 99 ± 0． 29*
佛甲草 8 0． 99 ± 0． 17* 1． 10 ± 0． 27* 1． 01 ± 0． 31＊＊ 1． 07 ± 0． 21＊＊ 1． 11 ± 0． 19* 1． 19 ± 0． 23
雷公藤多苷 0． 01 1． 02 ± 0． 21* 1． 09 ± 0． 26* 1． 15 ± 0． 21* 1． 08 ± 0． 17＊＊ 1． 20 ± 0． 29* 1． 19 ± 0． 25
与模型组比较 * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01(下同)
2． 2 佛甲草对 AA大鼠继发性病变的影响 结果如表 2 所示，
与正常组相比，模型组大鼠在致炎后 16 d 右后足出现明显肿
胀，且持续到第 28 d，佛甲草各剂量组右足肿胀程度均明显轻于
模型组，表明佛甲草醇提物可明显抑制 AA大鼠的继发性病变。
表 2 佛甲草醇提物对 AA大鼠继发性病变的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
致炎后不同时间非致炎足肿胀度(△ml)
12 d 16 d 20 d 24 d 28 d
正常对照 0． 15 ± 0． 09 0． 15 ± 0． 10＊＊ 0． 16 ± 0． 10＊＊ 0． 19 ± 0． 08＊＊ 0． 21 ± 0． 08＊＊
模型对照 0． 23 ± 0． 11 0． 32 ± 0． 09 0． 36 ± 0． 07 0． 42 ± 0． 08 0． 36 ± 0． 09
佛甲草 4 0． 16 ± 0． 08 0． 17 ± 0． 06＊＊ 0． 24 ± 0． 08* 0． 29 ± 0． 07＊＊ 0． 21 ± 0． 09＊＊
佛甲草 8 0． 18 ± 0． 08 0． 19 ± 0． 10＊＊ 0． 26 ± 0． 10* 0． 31 ± 0． 06＊＊ 0． 22 ± 0． 09＊＊
雷公藤多苷 0． 01 0． 13 ± 0． 08 0． 14 ± 0． 13＊＊ 0． 18 ± 0． 06＊＊ 0． 27 ± 0． 08＊＊ 0． 12 ± 0． 07＊＊
2． 3 佛甲草对 AA大鼠胸腺、脾脏指数的影响 由表 3 可见，
模型组大鼠的胸腺及脾脏指数明显高于正常组;佛甲草(4，8
g /kg)及 TPT组大鼠的胸腺及脾脏指数明显低于模型组。
表 3 佛甲草醇提物对 AA 大鼠胸腺、脾脏指数的影响(珋x ± s，n =
10)
组别
剂量
(g /kg)
胸腺指数
(mg /g)
脾脏指数
(mg /g)
正常对照 0． 73 ± 0． 10* 1． 66 ± 0． 13*
模型对照 1． 00 ± 0． 38 1． 83 ± 0． 20
佛甲草 4 0． 52 ± 0． 13＊＊ 1． 46 ± 0． 15＊＊
佛甲草 8 0． 69 ± 0． 18* 1． 56 ± 0． 10＊＊
雷公藤多苷 0． 01 0． 49 ± 0． 077＊＊ 1． 41 ± 0． 15＊＊
2． 4 佛甲草对 AA 大鼠血清 TNF-α、IL-6 及关节液 PGE2 水平
的影响 模型组大鼠血清 TNF-α、IL-6 及关节液 PGE2 水平均
显著高于正常组;与模型组相比较，佛甲草(4，8 g /kg)能显著
降低 TNF-α、IL-6 水平，佛甲草 8 g /kg 可明显降低 PGE2 水平，
结果见表 4。
表 4 佛甲草醇提物对 AA大鼠血清 IL-6、TNF-α及关节液 PGE2 水
平的影响(珋x ± s，n = 10)
组别
剂量
(g /kg)
TNF-α
(ng /L)
IL-6
(ng /L)
PGE2
(A)
正常对照 2． 28 ± 0． 62* 12． 02 ± 2． 68＊＊ 0． 052 ± 0． 021*
模型对照 3． 22 ± 0． 54 19． 36 ± 3． 45 0． 100 ± 0． 025
佛甲草 4 1． 96 ± 0． 58＊＊ 11． 04 ± 2． 88＊＊ 0． 076 ± 0． 024
佛甲草 8 2． 35 ± 0． 48＊＊ 11． 65 ± 3． 48＊＊ 0． 044 ± 0． 021＊＊
雷公藤多苷 0． 01 3． 07 ± 0． 98 13． 04 ± 4． 34＊＊ 0． 069 ± 0． 016
3 讨论
601 中药药理与临床 2013;29(4)
ＲA是一种以慢性炎症、异常免疫反应为特征的系统性疾
病，危害性大，致残率高，在中国患病率约为 0． 32% ～ 0． 36%，
目前尚无根治的有效治疗方法。大鼠 AA模型是一种以细胞免
疫功能紊乱为主的免疫性炎症模型，其在临床表现、病理改变
和血清学特点等方面与人类 ＲA非常相似，其免疫学改变与 ＲA
也有平行关系。AA 原发病变主要是局部急性炎症反应，并于
致炎后 10 ～ 12 d开始出现继发病变，表现为双侧足肿胀进行性
加重，活动受限，是以多发性关节炎为特征病变的全身迟发性
超敏反应［5］。本研究结果表明，AA大鼠模型组原发性、继发性
足肿胀非常明显，佛甲草(4，8 g /kg)能明显抑制 AA太鼠原、继
发性足跖肿胀程度，对大鼠 AA有明显改善作用。
胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，其脏器指数以及结构
变化引起的体内免疫调节功能失衡在 ＲA 发病中具有重要意
义。ＲA的细胞免疫调节紊乱和体液免疫功能亢进与慢性炎症
损伤的临床表现密切相关，T 淋巴细胞的功能紊乱和 T 辅助细
胞功能偏移及细胞因子的表达异常在 ＲA的免疫炎症损伤中发
挥了重要作用，而 T细胞与 B细胞主要存在于脾脏和淋巴结等
外周淋巴器中，是特异性免疫应答的结构基础。T 淋巴细胞在
胸腺发育和成熟，具有识别抗原、杀伤靶细胞、免疫应答和免疫
调节作用。因此，药物对动物胸腺、脾脏质量的影响，可作为免
疫药理机制的初步指标。本研究发现，佛甲草(4，8 g /kg)对胸
腺和脾脏有抑制作用，这可能与药物的免疫调节有关，可进一
步研究其细胞免疫调节机制。
单核巨噬细胞的异常活化在 ＲA发病中起重要作用。研究
表明，在动物模型及 ＲA患者的关节滑膜液中促炎细胞因子(如
TNF-α、IL-6)水平显著升高［6］，其中 TNF-α在 ＲA中起重要作用
已得到公认。免疫调节功能的紊乱使 ＲA患者关节内巨噬细胞
和淋巴细胞产生大量 TNF-α，参与慢性炎症及受累组织的重建 /
破坏。有研究认为 TNF-α 启动了 ＲA 细胞因子的级联反应，抗
TNF-α单克隆抗体不仅在减少临床和实验室的疾病活动度指数
方面显示了惊人的治疗效果［7］，同时也可抑制 ＲA 局部 IL-1 和
其他致炎因子的产生［8］，说明 TNF-α 在 ＲA 关节的细胞因子网
络中是一个促发并可维持炎症性关节炎的重要细胞因子。IL-6
在 IL-1β或 TNF-α作用下，由单核细胞、T细胞成纤维细胞或滑
膜细胞分泌，在免疫损伤与炎症损伤中起到重要的作用，是一
种主要的致炎细胞因子。
TNF-α、IL-6 这些炎性细胞因子的存在，刺激滑膜组织、滑
膜细胞过度表达环氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)、一氧
化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)，引起 PGE2 及 NO大量合
成和释放［9］。PGE2 可引起炎性细胞浸润、滑膜组织异常增生、
新生血管翳形成，导致关节肿胀、蜕变。我们的实验结果显示，
佛甲草 4，8 g /kg可明显降低 AA大鼠血清 TNF-α、IL-6 的水平;
佛甲草 8 g /kg能显著抑制 PGE2 含量。由此推测降低 AA 大鼠
血清炎性细胞因子(TNF-α、IL-6)的水平及关节液中 PGE2 含量
可能是佛甲草治疗 AA 的机制之一，其详细机制有待于深入研
究。
综上所述，本研究从模型的整体角度出发，证实佛甲草(4，
8 g /kg)对 AA大鼠关节炎症有明显的治疗作用，其机制可能与
调节免疫功能、减少炎性细胞因子及炎性介质的生成有关。
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hai) ，2011;43(5)∶ 380 ～ 386
Effect of Sedum lineare Thunb on adjuvant arthritis in rat and its effect of inflammatory factors
Zhou Qing，Sui Ｒongyan，Lian Leifan，Cao Xingling，Wu Lizhen，Huang Zhihua
(Gannan Medical University，Ganzhou 341000)
Objective :To investigate the therapeutic effect of Sedum lineare Thunb (SLT)on adjuvant arthritis(AA)and it＇s mechanisim about cy-
tokines and inflammatory mediators． Methods:The adjuvant-induced arthritis rat animal modele was used． Primary and Secondary paw swell-
ing of AA rats were measured． The changes of thymus or spleen index were observed． The TNF-α and IL-6 levels in serum and PGE2 content
in the joint fluid were detected． Ｒesults:Compared with model group，low SLT and high SLT both can inhibited primary and secondary paw
swelling of AA rats，and downregulated the thymus and spleen index． After treatment with SLT，the levels of TNF-α and IL-6 in serum and
PGE2 contern in joint fluid were decreased obviously． Conclusion:SLT had the therapeutic effect on AA rats，the possible mechanism corre-
lates with the regulation of immune function by reduce the inflammatory cytokines and inflammatory mediators．
Key words Sedum lineare Thunb(佛甲草);adjuvant arthritis;inflammatory factor
701中药药理与临床 2013;29(4)