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火棘多糖的抗疲劳作用



全 文 :火棘多糖的抗疲劳作用
刘建芳,张艳平,张桂英
(日照市人民医院,山东日照 276800)
摘要:目的 探讨火棘果中多糖类成分的抗疲劳作用。方法 配制不同浓度的火棘多糖溶液,采用 DPPH 法
测定火棘多糖清除自由基的能力。将 50 只小鼠随机分为阴性对照组、维生素 C 对照组和火棘多糖低、中、高 3 个
剂量组,建立小鼠衰老模型,分别给予 50、100、200 mg /kg火棘多糖提取物灌胃,小鼠负重游泳后检测血浆尿素氮、
肝糖原、肌糖原、乳酸脱氢酶和血乳酸含量的变化。结果 火棘多糖高剂量组(200 mg /kg)肝糖原、肌糖原、乳酸、
乳酸脱氢酶和尿素氮的含量分别为(15. 4 ± 1. 21)mg /g、(1. 09 ± 0. 03)mg /g、(7. 40 ± 1. 25)mmol /L、(4 215. 0 ±
184. 6)U/L、(6. 91 ± 0. 95)mmol /L,与阴性对照组比较 P均 < 0. 05。结论 火棘多糖类成分具有抗疲劳作用。
关键词:小鼠;火棘多糖;抗疲劳作用
中图分类号:R589. 1 文献标志码:B 文章编号:1002-266X(2011)37-0037-02
为探讨火棘多糖对衰老小鼠的抗疲劳作用,
2011 年 3 ~ 8 月,我们对衰老小鼠的肝糖原、肌糖
原、乳酸、乳酸脱氢酶(LDH)和尿素氮(BUN)的含
量的变化进行了测定。现报告如下。
1 材料与方法
1. 1 材料 健康昆明种小鼠 50 只,体质量 18 ~ 22
g,雌雄各半,济宁医学院提供。火棘多糖,济宁医学
院提供;UV-2000 型紫外可见分光光度计,美国 uni-
co公司;1,1 二苯基苦基苯肼(DPPH) ,日本东京化
成工业株式会社;全血乳酸检测试剂盒、LDH 检测
试剂盒、血 BUN检测试剂盒,南京建成生物工程研
究所;0. 9%生理盐水、30% KOH、0. 1 mg /ml 标准葡
萄糖、1 mg /ml蒽酮显色液,北京化学试剂公司;低
温离心机,上海安亭科学仪器厂;维生素 C(VitC) ,
河北维尔康制药有限公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 动物分组及衰老模型的建立 随机将 50 只
小鼠分为阴性对照组、VitC 阳性对照组、火棘多糖
低剂量组(50 mg /kg)、火棘多糖中剂量组(100 mg /
kg)、火棘多糖高剂量组(200 mg /kg) ,每组 10 只。
除阴性对照组外,其余各组小鼠每天皮下注射 D-半
乳糖 120 mg /kg、1 次 /d,持续 60 d。火棘多糖低、
中、高剂量组在建模 14 d后给予相应剂量的火棘多
糖灌胃,共 45 d;VitC组每天按 100 mg /kg灌胃 VitC
溶液;阴性对照组用等量蒸馏水灌胃。
1. 2. 2 组织中糖原含量的测定 第 60 天,灌胃 1 h
后进行游泳实验,载重体质量 10%的铅块。游泳实
验结束后,立即断头取血,室温静置 30 min 使血液
凝固,以 5 000 r /min离心 10 min,分离出血浆,置冰
箱中冷藏备用检测血浆中乳酸、BUN 含量及 LDH
活力。同时,取出肝脏和腿部肌肉,经 4 ℃生理盐水
漂洗,用滤纸吸干,分别称取肝脏 100 mg 和肌肉
500 mg置于试管内,加入 5%三氯醋酸匀浆 1 min,
将匀浆液倒入离心管,3 000 r /min 离心 15 min,取
上清液,用葸酮法测定肝糖原和肌糖元含量。
1. 2. 3 清除 DPPH 自由基能力的测定 以
0. 050 0、0. 025 0、0. 010 0、0. 005 0、0. 001 7 mg /ml
五个浓度梯度的 DPPH溶液在 517 nm处测吸收值,
每个浓度重复 3 次,取平均值。线性方程为:y =
19. 742x + 0. 011,R2 = 0. 999 6(x,DPPH 浓度;y,吸
光度值)。线性范围 0. 001 7 ~ 0. 005 0 mg /ml。将
火棘多糖溶液稀释,配制 8 个浓度梯度的待测液分
别为 10、20、40、80、100、200、300、400 μmol /L,吸取
配好的待测液 0. 05 ml,加入到 1. 95 ml 的 DPPH
中,混匀后导入比色皿中,用乙醇调零,在 517 nm处
测定吸光度 Ai,以 0. 05 ml乙醇,加入到 1. 95 ml 的
DPPH中测定吸光度 Aj 作为对照每个浓度测 3 次,
取 3 次的平均值。根据公式计算清除率:清除率 =
(1 - Ai)/Aj × 100%
1. 3 统计学方法 采用 SPSS13. 0 统计软件,数据
用 珋x ± s 表示,组间比较采用 t 检验。P≤0. 05为差
异有统计学意义。
2 结果
2. 1 火棘多糖对 DPPH 自由基的影响 不同浓度
的火棘多糖均有 DPPH 清除能力,且随着浓度的增
加而增强。见表 1。
2. 2 火棘多糖对小鼠肝糖原、肌糖原、乳酸、LDH、
BUN含量的影响 火棘多糖高剂量组能够明显增
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表 1 不同浓度火棘多糖对 DPPH清除能力(珔x ± s)
火棘多糖浓度(μmol /L) DPPH清除率(%)
10 10. 33 ± 0. 011
20 17. 24 ± 0. 013
40 23. 73 ± 0. 021
80 44. 76 ± 0. 018
100 50. 83 ± 0. 024
200 61. 79 ± 0. 029
300 70. 48 ± 0. 032
400 88. 17 ± 0. 036
加小鼠肝糖原和肌糖原含量,明显减少游泳之后小
鼠血液中乳酸的含量,且增加 LDH 的含量,显著减
少小鼠运动后血浆中 BUN的含量,与阴性对照组比
较 P < 0. 05,说明火棘多糖具有抗疲劳的作用。见
表 2。
3 讨论
疲劳是由运动引起机体一系列生化改变而导致
的肌肉力量的降低。传统对运动疲劳产生机制的
表 2 火棘多糖对小鼠肝糖原、肌糖原、乳酸、LDH、BUN水平的影响(珔x ± s)
组别 n 肝糖原(mg /g) 肌糖原(mg /g) 乳酸(mmol / l) LDH(U /L) BUN(mmol /L)
阴性对照组 10 9. 9 ± 1. 02 0. 71 ± 0. 02 12. 2 ± 2. 10 3 221 ± 200. 2 11. 20 ± 1. 31
VitC阳性对照组 10 16. 2 ± 1. 24a 1. 19 ± 0. 04a 6. 3 ± 1. 78a 4 976 ± 198. 4a 6. 41 ± 0. 76a
低剂量组 10 11. 1 ± 1. 31 0. 82 ± 0. 03 11. 6 ± 2. 01 3 310 ± 168. 4 10. 18 ± 1. 15
中剂量组 10 13. 5 ± 1. 15a 0. 89 ± 0. 03a 9. 6 ± 1. 96 3 972 ± 179. 9 8. 49 ± 1. 02a
高剂量组 10 15. 4 ± 1. 21ab 1. 09 ± 0. 03ab 7. 4 ± 1. 25ab 4 215 ± 184. 6ab 6. 91 ± 0. 95ab
注:与阴性对照组比较,aP < 0. 05与 VitC组比较,bP < 0. 05
认识主要能量耗竭学说、自由基学说等[1],因此对
疲劳的评价方法应包括生化指标的检测和相关自由
基的检测。近年来研究表明,大强度运动后体内自
由基代谢产物会增加[2]。自由基的增加,导致生物
膜的完整性受损,生物膜的通透性增加,细胞内酶外
释,内外状况异常,电解质失衡,酶的活性降低,细胞
功能下降,从而造成疲劳产生。
糖与耐力运动有密切关系,机体的糖原储备和
血糖水平直接影响运动耐力。一般情况下,运动时
肌群利用肌糖原比摄取血糖的供能作用大得多,肌
糖原供能作用比血糖高 3 ~ 5 倍,这时肝糖原大量分
解,使血糖维持在较高水平,延缓中枢疲劳和外周疲
劳的出现[3]。血乳酸水平也是反映机体有氧代谢
能力和疲劳程度的一个重要指标。大量运动会使骨
骼肌细胞内的主要代谢失衡,导致机体相对缺氧及
糖酵解速度加快,进而产生大量的乳酸,乳酸浓度的
增加会导致疲劳的产生。LDH 活力是反映肌肉中
乳酸清除代谢速度的标志之一,它的提高可以加速
肌肉中过多乳酸的清除代谢,延缓疲劳的发生和加
速疲劳的消除[4]。BUN是蛋白质的代谢产物,在正
常生理条件下,蛋白质和氨基酸等含氮物质在分解
代谢中脱氨基生成氨,氨在肝脏转变为尿素,BUN
经血液循环从肾脏排出体外。机体长时间运动时使
正常的能量代谢平衡受到破坏,即不能通过糖或脂
肪的分解获得足够的能量,而机体本身的蛋白质和
分解代谢会随之增强,同时核苷酸的分解代谢加强,
也会脱氨基生成氨,最终使血中 BUN 含量增高。
BUN与机体的疲劳程度及负荷量的大小密切正相
关,血 BUN的含量随运动负荷的增加而升高,因此,
血 BUN的含量变化可以说明体内含氮物质分解代
谢状况,也是评价机体在特殊条件下体力劳动负荷
承受能力的一个较敏感的指标。本实验结果表明火
棘多糖高剂量能够减少小鼠运动后血浆中 BUN 的
含量,从而减轻疲劳状态。
本研究结果显示,火棘多糖在体外能够明显清
除自由基,从而减少自由基对机体的损伤,增加肌糖
原和肝糖原的含量,显著增加 LDH 的含量,有效降
低乳酸含量,从而增加机体抗疲劳,关于火棘多糖抗
疲劳的具体作用机制有待于进一步的研究。
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(收稿日期:2011-06-25)
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