全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2012，27(2)∶198 ～ 199
基金项目:四川省中药管理局科技专项课题资助(2010 － 72)
作者简介:李晓英(1986—) ，女，正攻读天然药物化学专业的硕士学位。Email:lxy535455@ yahoo． cn
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:yphan65@ tom． com
HPLC测定十三味菥蓂丸中的大叶茜草素
李晓英，陈佳正，张苏阳，韩泳平*
(西南民族大学少数民族药物研究所，四川 成都 610041)
摘要:目的 建立藏药十三味菥蓂丸质量标准中的含量测定项。方法 采用 HPLC测定制剂中大叶茜草素的含量。结果
0． 1688 ～ 2． 1100 μg大叶茜草素与峰面积的线性关系良好(r = 0． 9999) ，平均回收率为 100． 27%(n = 6) ，RSD = 1． 74%。结论
所用方法灵敏、准确、重复性好、专属性强，可用于测定藏药十三味菥蓂丸中大叶茜草素的含量。
关键词:十三味菥蓂丸;大叶茜草素;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2012)02 － 0198 － 02
Determination of rubimaillin in Shisanwei Ximing pill by HPLC
LI Xiao － ying，CHEN Jia － zheng，ZHANG Su － yang，HAN Yong － ping*
(Ethnic Pharmaceuitical Institute of College of Southwest University for Nationalities，Chengdu，Sichuan，610041 P． R． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish a content determination method of Shisanwei Ximing pill． METHODS The content of rubi-
maillin was determined by HPLC． RESULTS The content of rubimaillin showed a good linearity in the range of 0． 1688 － 2． 1100 μg
(r = 0． 9999)． The average recovery rate was 100． 27 % with the RSD of 1． 7%(n = 6)． CONCLUSION The method is sensitive，
accurate，specific and reproducible，which can be effectively used for the determination of rubimaillin in Shisanwei Ximing pill．
Key words:Shisanwei Ximing pill;Rubimaillin;HPLC;Content determination
CLC number:R917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2012)02 － 0198 － 02
十三味菥蓂丸为藏医常用药，是由菥蓂子、茜
草、诃子、紫草茸、大托叶云实、芒果核、蒲桃、山矾
石、圆柏枝、豆蔻、刀豆、波棱瓜子、巴夏嘎等十三味
药材制成的一种复方制剂，具有清热、通淋、消炎止
痛的功效，临床上主要用于淋病、睾丸肿大、膀胱炎、
腰痛等症状的治疗［1］。茜草作为复方中主药之一，
具有凉血、止血、祛淤、通经等功效［2］;主要有效成
分为大叶茜草素，具抗菌、消炎的作用。在该药的质
量控制标准中只有茜草和紫草茸的薄层鉴别项［1］，
缺少含量测定的指标，不利于制剂的质量控制。为
了有效地保证其在临床上的疗效，需建立适当的含
量测定方法。现采用 HPLC法测定了十三味菥蓂丸
中大叶茜草素的含量，可为该制剂的质量控制提供
依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
2695 型高效液相色谱仪(美国 Waters) ;KQ －
250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司)。大叶茜草素对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:110884 － 200604) ;十三味菥蓂丸及缺味阴
性样品(自制) ;甲醇为色谱纯;水为重蒸水;其余试
剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 色谱条件 采用依利特 C18色谱柱(250
mm ×4． 6 mm，0． 5 μm) ，流动相为甲醇 －水(84∶
16) ，检测波长 270 nm，流速 1． 0 mL·min －1，柱温
30 ℃，理论板数按大叶茜草素峰计不低于 4 × 103。
1． 2． 2 溶液的制备 精密称取 8． 44 mg 大叶茜草
素对照品，置 100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，得
84． 4 μg·mL －1对照品溶液。取适量十三味菥蓂丸，
研碎，精密称定 4 g 粉末，置 50 mL 蒸馏瓶中，精密
加入 30 mL 甲醇，密塞，称重，水浴中加热回流 30
min，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用
0． 45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
按十三味菥蓂丸处方及工艺，制备缺茜草的阴性样
品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。
1． 2． 3 专属性试验 分别取对照品、供试品及阴性
对照溶液各 10 μL，进样，记录色谱图。大叶茜草素
与其他杂质峰可达基线分离，分离度大于 1． 5，阴性
对照色谱图中，在与大叶茜草素峰相同位置处无其
他峰干扰(图 1)。
DOI:10.13375/j.cnki.wcjps.2012.02.024
A B C
0 3 6 9 12 15 18 0 3 6 9 12 15 18 0 3 6 9 12 15 18
t/min
ru
bi
m
ai
lli
n
ru
bi
m
ai
lli
n
图 1 对照品(A)、供试品(B)和阴性对照(C)溶液的色图谱
Fig 1 HPLC chromatograms of control solution(A)，sample solution(B)and negative solution(C)
1． 2． 4 线性范围的考察 精密量取 2、5、10、15、
25 μL 84． 4 μg·mL －1大叶茜草素对照品溶液，进样，
记录色谱图。以进样体积为横坐标、峰面积为纵坐
标绘制标准曲线。得回归方程为:Y = 3． 620 ×
105X － 5. 826 × 104(r = 0． 9999)。结果表明:2 ～ 25
uL大叶茜草素与峰面积的线性关系良好，进样量的
线性范围为 0． 1688 ～ 2． 1100 μg。
1． 2． 5 中间精密度试验 精密量取 10 μL 84． 4
μg·mL －1大叶茜草素对照品溶液，分别于 3 d 内以 3
位不同操作人员各进样 3 次，记录 9 次实验中大叶
茜草素的峰面积。计算 RSD = 1． 19%，表明测试方
法的中间精密度良好。
1． 2． 6 稳定性试验 取同一批供试品溶液，于室温
下放置，分别在 0、4、8、12、24 h 时取样测定，记录大
叶茜草素峰面积。计算得 RSD = 0． 20%，表明供试
品溶液在 24 h内稳定。
1． 2． 7 重复性试验 取 6 份同一批十三味菥蓂丸
样品，按“1． 2． 2”项方法制备供试品溶液，进样测
定，计算得大叶茜草素的平均含量为 0． 38 mg·g －1，
RSD = 0． 27%。
1． 2． 8 回收率试验 取约 0． 3 g 已知含量的样品，
分别加入 1． 0、1． 3、1． 6 mL 84． 4 μg·mL －1大叶茜草
素对照品溶液，按“1． 2． 1”项方法制备供试品溶液
并测定，计算回收率(表 1)。
表 1 加样回收率的试验结果(mg，n =9)
Table 1 Results of recovery test (mg，n =9)
Original Added Detected Recovery /% 珔X /% RSD /%
0． 1137 0． 0844 0． 1974 99． 11 100． 27 1． 74
0． 1136 0． 0844 0． 1959 97． 47
0． 1138 0． 0844 0． 1964 97． 86
0． 1151 0． 1097 0． 2273 102． 27
0． 1166 0． 1097 0． 2268 100． 50
0． 1160 0． 1097 0． 2273 101． 46
0． 1165 0． 135 0． 2553 102． 83
0． 1163 0． 135 0． 2523 100． 73
0． 1156 0． 135 0． 2508 100． 18
1． 2． 9 耐用性试验 精密称取 0． 3 g已知含量的样
品，在不同色谱柱、不同色谱仪器上进样，各测定两
次，大叶茜草素与其他杂质峰可达基线分离，分离度
大于 1． 5。计算得样品中大叶茜草素的平均含量为
0． 38 mg·g －1，RSD =3． 6%。
1． 2． 10 样品的测定 取 3 批样品，按“1． 2． 2”
“1. 2. 1”项方法制备供试品溶液并进行测定，每份
平行测定 3 次，计算大叶茜草素的含量。3 批样品
中大叶茜草素的含量分别为 0． 37、0． 36、0． 37 mg·
g －1，RSD分别为 0． 49%、0． 76%、0． 54%(n = 3)。
2 讨论
国内文献［2 － 3］多采用 250 nm 作为大叶茜草素
的检测波长。作者通过对大叶茜草素紫外全波长扫
描发现，大叶茜草素在 270 nm 处有最大吸收，在此
波长下，供试品中大叶茜草素的峰型理想，无杂质峰
干扰，故选择 270 nm 作为大叶茜草素的检测波长。
曾考察了甲醇 － 水 － 四氢呋喃(310∶90∶3)、甲
醇 －乙腈 －水(60∶30∶10)、甲醇 －水(84∶16)等
流动相［4 － 5］。结果表明:甲醇 －水(84∶16)作为流
动相时，所得色谱峰的峰型对称，分离度大，理论板
数大于 4 × 103，符合含量测定要求，故选择甲醇 －
水(84∶16)为十三味菥蓂丸中大叶茜草素含量测
定的流动相。
参考文献:
［1］ 中华人民共和国卫生部．药品标准 藏药(第一册) ［S］． 1995:
218．
［2］ 中华人民共和国国家药典委员会．中国药典［S］．一部．北京:
化学工业出版社，2005:218．
［3］ 刘广，齐娜，徐本明．大叶茜草素在甲醇溶液中的稳定性研究
［J］．华西药学杂志，2010，25(3) :318 － 320．
［4］ 程世琼，何筱毅，吕光华，等． HPLC测定消肿止痛膏中大叶茜
草素的含量［J］．华西药学杂志，2006，21(4) :382 － 383．
［5］ 唐宇伟，孙彬贤，黄德杰．参茜固经颗粒中大叶茜草素含量测
定［J］．中成药，2005，27(1) :28 － 31．
收稿日期:2011 － 05 － 16
991第 2 期 李晓英，等。HPLC测定十三味菥蓂丸中的大叶茜草素