全 文 ：3 2102DABË
图 1　10-DAB Ë 对照品 (A)和东北红豆杉
枝叶提取物的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of 10-DAB Ë reference
substance (A) and Taxus cusp ida ta branches
and leaves extract (B)
峰面积呈良好的线性关系。
216　精密度试验: 取 14125 ΛgömL 102DAB Ë 对照
品溶液, 连续进样 6 次, 测定峰面积, 计算浓度, 结果
浓度R SD 为 0166% (n= 6)
217　稳定性试验: 取供试品溶液 1 份, 每隔 1 h 测
定 1 次, 考察供试品溶液中 102DAB Ë 含量变化。结
果含量R SD 为 0192% (n= 6) , 表明供试品溶液在
5 h 内稳定。
218　重现性试验: 精密称取同一批样品 6 份, 平行
制备 6 份供试品溶液, 进样测定, 102DAB Ë 含量为
01423 3% , R SD 为 0180% (n= 6)。
219　回收率试验: 精密称取 9 m g 样品粉末 4 份, 分
别加 915, 19, 2815 ΛgömL 102DAB Ë 对照品溶液,
各 1 mL , 另一份做空白, 平行制备 4 份供试品溶液,
进样测定, 每份测 3 次, 结果平均回收率为
10015% , R SD 为 210% (n= 4)。
2110　样品的测定: 精密称取 1 批样品 3 份, 制备供
试品溶液, 进样测定, 结果 102DAB Ë 的含量为
01456 1% (n= 3)。
3　讨论
311　本实验对检测波长、流动相系统、提取方法进
行考察, 建立了H PL C 测定东北红豆杉枝叶提取物
中 102DAB Ë 含量的方法。该方法简便、灵敏度高、
专属性强, 未见报道。可用于红豆杉提取物中紫杉烷
萜类 102DAB Ë 的质量控制。
312　检测波长的选择: 102DAB Ë 对照品甲醇溶液
在 200～ 400 nm 波长中最大吸收波长在 23319 nm ,
故选 23319 nm 作为最大检测波长。
313　流动相的选择: 实验中选择了多种流动相体
系, 包括不同配比的甲醇2水, 甲醇2乙腈2水, 乙腈2水
等效洗脱及梯度洗脱, 结果以甲醇2乙腈2水 (20∶
30∶50)等效洗脱和乙腈2水梯度洗脱的分离效果较
好, 但后者的重现性较差, 因此选甲醇2乙腈2水
(20∶30∶50)作为流动相等效洗脱。
314　提取方法的选择: 实验中采用文献报道的提取
方法[2 ]将样品以甲醇2二氯甲烷研磨, 冷浸, 超声提
取, 用水2二氯甲烷萃取。但测定结果的重现性差, 可
能由于研磨后倾入冷浸容器的过程易造成误差。因
此, 本实验采用甲醇2二氯甲烷冷浸 24 h 后超声提
取 40 m in, 再以水2二氯甲烷萃取。本方法提取效果
与前者相当, 且重现性好。
References:
[ 1 ]　B issery M C, Guenad D , V oegelin G, et a l. Experim en tal an2
t itumo r activity of taxo tere, a taxo l analogue [J ]1 Cancer R es,
1991, 51 (18) : 48451
[ 2 ]　Gao S L , Zhu D N , Zhou R H , et a l. Con ten t of the taxo l and
brevifo lio l in species of T ax us L. from east A sia and no rth
Am erica [J ]1 J Ch ina P harm U niv (中国药科大学学报) ,
1995, 26 (1) : 81
茜草提取工艺的研究
谭朝阳, 尤昭玲Ξ
(湖南中医学院 中西医结合系, 湖南 长沙　410007)
摘　要: 目的　优选茜草的最佳提取工艺。方法　比较渗漉法、浸渍法、加热回流法 3 种提取方式, 并采用L 9 (34)正
交试验, 以大叶茜草素含量和干浸膏收率为指标, 对影响茜草的乙醇加热回流提取工艺的因素水平进行了研究。结
果　茜草的最佳提取工艺为用 10 倍量 70% 乙醇加热回流提取 3 次, 每次 1 h。提取次数影响差异具有显著性。结
·993·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 4 期 2004 年 4 月
Ξ 收稿日期: 2003208212
基金项目: 国家自然科学基金项目 (30271633) ; 国家中医药管理局新药开发专项基金项目 (D 1X046B)
作者简介: 谭朝阳 (1970—) , 男, 湖南郴州人, 1992 年毕业于武汉大学生物化学专业后, 在湖南省药品检验所从事中药新药研究和质量
分析, 1999 年获湖南中医学院中药学硕士学位, 现为湖南中医学院 2001 级在读博士, 研究方向为: 妇产科中药新药研究与中
药质量分析。T el: (0731) 2290699　E2m ail: tom tzy@m ail. ch ina. com
论　乙醇加热回流提取工艺用于茜草的提取稳定可行。
关键词: 茜草; 大叶茜草素; 正交试验
中图分类号: R 28412; R 286102　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 04 0399 03
Stud ies on extraction technology of dr ied rh izom e of R ubia cord if olia
TAN Zhao2yang, YOU Zhao2ling
(H unan Co llege of T radit ional Ch inese M edicine, Changsha 410007, Ch ina)
Key words: the dried rh izom e of R ubia cord if olia L. ; mo llugin; o rthogonal test
　　茜草为茜草科植物茜草R ubia cord if olia L. 的
干燥根及根茎, 具有凉血、止血、祛瘀、通经之功效,
主治吐血, 衄血, 崩漏, 外伤出血, 经闭瘀阻, 关节痹
痛, 跌扑肿痛等[1 ]。在临床上, 茜草常与其他中药配
伍制成各种中药制剂。蒽醌类物质是茜草的主要有
效部位之一, 由于蒽醌类不易溶于水, 故宜用醇提
取。本实验采用正交试验法, 以大叶茜草素含量和干
膏浸得率为考察指标, 对茜草的醇提取工艺条件进
行研究, 并优选最佳工艺条件。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪, 515 泵, 2487 紫外检测器 (美
国W aters 公司) ; N 22000 色谱工作站 (浙江大学) ;
大叶茜草素对照品由中国药品生物制品检定所提供
(供含量测定用, 批号: 8842200001) ; 茜草为市场所
购, 经湖南省药品检验所杨友良鉴定。水为双蒸水,
甲醇为色谱纯, 其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
211　大叶茜草素的含量测定[1 ]
21111　色谱条件: 色谱柱: K rom asil C18 (250 mm ×
416 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇2水2四氢呋喃 (340∶
60∶3) ; 检测波长: 250 nm , 流速: 110 mL öm in; 柱
温: 30 ℃; 进样量: 10 ΛL。
21112　对照品溶液的制备: 精密称取大叶茜草素对
照品 4166 m g, 置 50 mL 量瓶中, 用甲醇溶解并稀释
至刻度, 摇匀, 即得。
21113　供试品溶液的制备: 精密量取各提取液 5
mL , 置 50 mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用
0145 Λm 微孔滤膜滤过, 即得。
21114　测定法: 分别精密吸取上述供试品溶液和对照
品溶液 10 ΛL , 注入液相色谱仪, 测定, 色谱图见图 1。
212　干浸膏得率的测定: 精密量取各提取液 25
mL , 置已干燥至恒重的蒸发皿中, 在水浴上蒸干, 于
105 ℃干燥 3 h, 移置干燥器中, 冷却 30 m in, 迅速精
密称定质量, 计算干浸膏得率。
213　提取方法的比较
a2大叶茜草素
a2mo llugin
图 1　大叶茜草素对照品 (A)和茜草 (B)的 HPLC 图谱
F ig. 1　HPLC chromatogram s of mollug in
reference substance (A) and dr ied
rh izome of R. cord if olia sample (B)
21311　渗漉法: 取茜草粗粉 100 g, 照流浸膏与浸膏
剂项下的渗漉法 (《中华人民共和国药典》2000 年版
一部附录É O ) , 用 95% 乙醇 1 000 mL 浸渍 12 h
后, 以 1～ 3 mL ö(kg·m in) 速度缓缓渗漉, 收集渗
漉液, 回收乙醇, 浓缩至 100 mL。
21312　浸渍法: 取茜草粗粉 100 g, 用 95% 乙醇
1 000 mL 浸渍 24 h, 时时摇动, 滤过, 滤液回收乙
醇, 浓缩至 100 mL。
21313　加热回流法: 取茜草粗粉 100 g, 加 95% 乙
醇 1 000 mL 回流提取两次, 每次 2 h, 合并提取液,
滤过, 滤液回收乙醇, 浓缩至 100 mL。
21314　结果对比: 取 3 种提取液, 分别测定大叶茜
草素含量和干浸膏得率, 结果见表 1。可见, 3 种提取
方法中, 加热回流法提取所得大叶茜草素含量和干
浸膏得率最高, 渗漉法次之, 浸渍法最低, 故宜选用
加热回流法对茜草药材进行提取。
表 1　3 种提取方法的比较 (n= 3)
Table 1　Compar ison of three extracting methods (n= 3)
方　法　　 大叶茜草素含量ö% 干浸膏收率ö%
渗漉法　　 0. 39 7. 23
浸渍法　　 0. 24 5. 32
加热回流法 0. 73 10. 31
·004· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 4 期 2004 年 4 月
214　乙醇回流提取条件的优化: 以乙醇浓度 (A )、
乙醇用量 (B )、提取次数 (C) 和提取时间 (D ) 为考察
因素, 每个因素各取 3 个水平 (表 2) , 在平行操作条
件下, 按L 9 (34) 正交设计试验, 以干浸膏得率、大叶
茜草素含量为评价指标, 结果见表 3。对表 3 结果进
行统计学处理, 得方差分析 (表 4, 5)。
表 2　试验因素水平表
Table 2　Factors and levels
水平
因　　素
A ö% Bö倍 Cö次 D öh
1 70 8 1 1　
2 80 10 2 1. 5
3 90 12 3 2　
表 3　L 9 (34)正交试验方案与结果
Table 3　D esign and results of L 9 (34) orthogonal test
试验号 A B C D
大叶茜草
素含量ö% 干浸膏得率ö%
1 1 1 1 1 0. 595 8. 55
2 1 2 2 2 0. 851 12. 80
3 1 3 3 3 0. 881 15. 01
4 2 1 2 3 0. 789 11. 54
5 2 2 3 1 0. 836 13. 10
6 2 3 1 2 0. 627 9. 44
7 3 1 3 2 0. 808 10. 70
8 3 2 1 3 0. 690 7. 57
9 3 3 2 1 0. 805 9. 52
大
叶
茜
草
素
含
量
K 1 　2. 327　2. 192　1. 912　2. 236
K 2 　2. 251　2. 376　2. 444　2. 286
K 3 　2. 303　2. 313　2. 525　2. 359
k1 　0. 776　0. 731　0. 637　0. 745
k2 　0. 750　0. 792　0. 815　0. 762
k3 　0. 768　0. 771　0. 842　0. 786
R 　0. 026　0. 061　0. 205　0. 041
干
浸
膏
得
量
K 1 36. 36 30. 79 25. 56 31. 17
K 2 34. 08 33. 47 33. 86 32. 94
K 3 27. 79 33. 97 38. 81 34. 12
k1 12. 12 10. 26 8. 52 10. 39
k2 11. 36 11. 16 11. 29 10. 98
k3 9. 26 11. 32 12. 94 11. 37
R 2. 86 1. 06 4. 42 0. 98
　　由表4及表5结果分析可知, 以大叶茜草素含
表 4　大叶茜草素含量的方差分析结果
Table 4　Var iance analysis of mollug in
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
A (误差) 0. 001 0 2 0. 000 5
B 0. 005 8 2 0. 002 9 5. 83
C 0. 073 9 2 0. 037 0 74. 16 P < 0105
D 0. 002 6 2 0. 001 3 2. 58
　　F 0105 (2, 2) = 19　F 0101 (2, 2) = 99
量为评价指标, 各因素对提取效果的影响程度依次
为C> B > D > A , C 因素影响差异有显著性; 以干浸
膏得率为评价指标, 各因素对提取效果的影响程度
依次为C> A > B > D , C 因素影响差异也有显著性,
故影响最大的是提取次数 C, 应选用 C 3 即提取 3
次。其他各因素影响差异均无显著性。
　　因评价指标大叶茜草素含量优于干浸膏得率,
故以大叶茜草素含量为评价指标, B 因素选用B 2,
即用 10 倍量。D 因素影响较小, 为节省能源与时间,
选用D 1 即每次提取 1 h。A 因素 (乙醇浓度)在所考
察的范围内影响很小, 为节省乙醇用量, 故选用
70% 乙醇作为提取溶媒。
表 5　干浸膏得率的方差分析结果
Table 5　Var iance analysis with sol id extract rate
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F 值 显著性
A 13. 13 2 6. 56 8. 96
B 1. 96 2 0. 98 1. 33
C 29. 88 2 14. 94 20. 39 P < 0. 05
D (误差) 1. 47 2 0. 73
　　F 0105 (2, 2) = 19　F 0101 (2, 2) = 99
3　验证试验:
　　根据试验结果, 最终确定茜草提取工艺: 将茜草
用 70% 乙醇加热回流提取 3 次, 每次 1 h, 每次 10
倍量。并将此工艺经 3 批验证试验, 与正交试验结果
基本一致, 以大叶茜草素计转移率约为 70% , 说明
此工艺稳定可行。
Reference:
[ 1 ]　Ch P (中国药典) [S ]1 2000 ed. V o l É 1
声　明
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《中草药》杂志编辑部
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