全 文 ：陕西天士力植物药业有限责任公司提供的土荆芥挥
发油批次间差异不大, 能够保证土荆芥挥发油的质
量及相关上市产品的稳定性。
参考文献:
[ 1] 中国药科大学 中药辞海 [ M ] 第一卷 北京:中国医药科
技出版社, 1993
[ 2] 李 意 RPHPLC法分离和测定荆花胃康原料药和胶丸中
的对异丙基甲苯和 萜品烯 [ J] 分析试验室, 2006, 25
( 6) : 2527
[ 3] 番 馨, 梁 鸣, 陈森鸿 土荆芥中挥发油的气相色谱质谱
分析 [ J ] 药物分析杂志, 2007, 27( 6) : 909911
[ 4] 黄雪峰, 孔令义 土荆芥挥发油的化学成分分析 [ J] 中国
药科大学学报, 2002, 33( 3) : 256257
UFLC法测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素
李芙蓉,陈世忠,罗世恒, 王 弘*
收稿日期: 20100514
作者简介:李芙蓉( 1982 ) ,女,山东烟台人,北京大学药学院硕士,研究方向为药用植物资源和质量控制。
T el : ( 010) 82802723 Email: f ronglee@ 163. com
* 通讯作者 王 弘 T el: ( 010) 82801559 Email: hw 9505@ bjmuedu. cn
(北京大学药学院 天然药物化学系, 北京 100191)
摘 要:目的 进行超快速液相色谱 ( UFLC) 测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的方法研究,并与 HPLC 方法
比较 ,建立准确、高效的茜草药材质量分析方法。方法 使用新型的 UFLC 系统, 色谱柱为 Shimpack XRODS
( 75 mm ! 3. 0 mm, 2. 2m) ,流动相为乙腈0 2% 磷酸 ( 52∀ 48) 溶液, 体积流量: 1 0 mL/ min,柱温 60 # , 检测
波长为 250 nm。结果 UFLC 法和 HPLC 法测定的茜草两种化学成分的量差异不大; UFLC 分析时间显著缩短,
羟基茜草素和大叶茜草素的分析时间由 H PLC 法的 7 2、25 3 min 缩短为 1 2、10 5 min。结论 本研究建立的
UFLC 测定方法精密度高、重现性好、快捷简便,适用于茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的分析, 是一种高效、可行
的质量评价技术。
关键词:茜草; UFLC; 羟基茜草素; 大叶茜草素
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2087 03
超快速液相色谱 ( ult ra fast liquid chromato g
r aphy, UFLC) 是一种新型液相色谱技术, 其色谱
柱使用 2 2 m 粒度的填料,能获得更高的柱效, 并
能缩短分析时间, 增加峰容量, 降低柱外峰展宽效
应[ 1]。作为一种新的快速分析技术, 它与超高效液
相色谱的最大区别是其不需要系统超高压, 在略高
于普通液相色谱压力极限下即可实现高流速、高分
辨率,适用于高通量、高效率的分析[ 2] 。采用高效、
灵敏、快速的分析技术进行中药质量分析,是制定科
学可行的质量评价标准的保障。U FLC 采用较小的
填料颗粒,达到更高的分辨率被越来越广泛地应用
于快速分析生物制品和中药材中目标化合物的分
离[ 34]。本实验通过方法学研究, 首次建立了 UFLC
法同时测定茜草中羟基茜草素和大叶茜草素的方
法,并与 HPLC 方法进行比较。结果, U FLC 测定
方法精密度高、重现性好,与 HPLC 法比较,在测定
结果差异不大的前提下, U FLC 法可显著缩短分析
时间,并且平衡、冲洗色谱柱的时间也显著缩短, 减
少了溶剂消耗。
1 仪器与试药
岛津 LC 20A 液相色谱系统: LC 20ADXR
泵; CT O 20AC 柱温箱; P rominence SIL 20AC
自动进样器; SPD M20A 二极管阵列紫外可见光
检测器; DGU 20A3 脱气机; CBM 20A 系统控
制器, Shimpack XR ODS ( 75 mm ! 3. 0 mm,
2. 2 m) 色谱柱。
色谱纯甲醇购自天津大茂试剂公司; 色谱纯乙
腈为美国 J. T . Baker 公司生产; 磷酸均为分析纯,
由北京化工厂生产; 水为超纯水。大叶茜草素
( r ubimaillin) 由中国药品生物制品检定所提供, 批
号 110884200604; 羟基茜草素 ( purpurin) 由本课
题组纯化精制, 质量分数达 98% 以上。样品为自
采集与市购,经北京大学医学部王弘副教授鉴定为
茜草科植物茜草 Rubia cor dif olia L. 的干燥根和
根茎。
2 方法与结果
2 1 色谱条件: 色谱柱为 Shimpack XRODS
( 75 mm ! 3. 0 mm, 2. 2 m) ; 流动相为乙腈0 2%
磷酸 ( 52 ∀ 48) ; 体积流量为 1 0 mL/ min; 柱温
60 # ;检测波长为 250 nm。色谱图如图 1。
∃2087∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
1羟基茜草素 2大叶茜草素
1purpu rin 2 rubimaillin
图 1 羟基茜草素( A)、大叶茜草素( B)、供试品溶液( C)的 UFLC图
Fig. 1 UFLCChromatograms of purpurin ( A) , rubimaillin ( B) , and Rubiae Radix sample solution ( C)
2 2 对照品溶液的制备: 精密称取大叶茜草素、羟
基茜草素对照品适量, 分别置 50 mL 量瓶中, 用甲
醇溶解并稀释至刻度, 摇匀, 制得含大叶茜草素
108 2 g/ mL 和含羟基茜草素 48 2 g/ mL 的对照
品溶液。
2 3 供试品溶液的制备:取茜草样品粉末 (过四号
筛) 约 0 5 g,精密称定, 置具塞锥形瓶中,精密加入
甲醇 100 mL, 称定质量, 放置过夜, 超声处理 30
min, 放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量, 摇
匀,滤过, 精密量取续滤液 50 mL, 蒸干, 残渣加甲
醇25% 盐酸 ( 4∀1) 混合溶液 20 mL 溶解, 加热回
流水解 30 m in,立即冷却, 加入三乙胺 3 mL, 混匀,
转移至 25 mL 量瓶中, 加甲醇至刻度, 摇匀,备用。
依次用甲醇 ( 5 mL)、水 ( 5 mL) 活化规格为 3 0
mL 的 PEP/ C18固相萃取小柱,取备用液预洗小柱,
弃最先流出的 5 mL 后收集流分,得供试品溶液。
2 4 标准曲线制备和线性范围考察:精密吸取对照
品溶液 0 5、1、2、4、6 L 注入 UFLC 色谱仪中, 按
上述色谱条件测定。以峰面积 ( X ) 为横坐标,对照
品进样量 Y 为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方
程:羟基茜草素 Y = 2. 546 3 ! 10- 7 X + 4 722 9 !
10
- 4
, r= 0. 999 9 ( n= 5) , 线性范围为 0 024 1 ~
0 289 2 g ; 大叶茜草素 Y = 4. 174 7 ! 10- 7 X +
3 619 3 ! 10- 3 , r= 0. 999 9 ( n = 5) , 线性范围为
0 054 1~ 0 649 2 g。
2 5 精密度试验: 按照 2 3 供试品溶液制备方法
制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 5 L,注入
液相色谱仪中, 连续测定 5 次, 按上述色谱条件测
定峰面积, 计算 RSD 值, 结果表明, 羟基茜草素
RSD 为 0 86% ,大叶茜草素 RSD 为 0 09%。
2 6 稳定性试验: 按照 2 3 供试品溶液制备方法
制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液 5 L,分别
于 0、1、2、3、4、5、6、7、8 h 注入液相色谱仪中, 记录
峰面积, 计算 RSD 值, 结果羟基茜草素 RSD 为
0 70% ,大叶茜草素 RSD 为 0 09%。
2 7 重现性试验:精密称取 1 号茜草样品粉末 (过
4 号筛) ,约 0 5 g ,共 5份,精密称定,按照 2 3供试
品溶液制备方法制得供试品溶液, 精密吸取供试品
溶液 5 L,注入液相色谱仪中,每份样品测定 3 次,
羟基茜草素质量分数的 RSD 为 1 45%, 大叶茜草
素质量分数的 RSD 为 0 48%, 说明本法重现性
良好。
2 8 加样回收率试验
2 8 1 羟基茜草素的加样回收率试验: 精密称取
11 号茜草样品粉末,约 0 5 g,共 5份,精密称定,每
份精密加入羟基茜草素对照品溶液 ( 1 01 mg/ mL)
1 mL,按照 2 3 供试品溶液制备方法进行处理, 并
按上述色谱条件进行测定,计算羟基茜草素加样回
收率。羟基茜草素的平均回收率为 95 89%, RSD
为 1 07%。
2 8 2 大叶茜草素的加样回收率试验: 精密称取
11 号茜草样品粉末,约 0 5 g,共 5份,精密称定,每
份精密加入大叶茜草素对照品溶液 ( 1 048 mg/
mL) 1 mL,按照 2 3 供试品溶液制备方法进行处
理,并按上述色谱条件进行测定,计算大叶茜草素的
加样回收率。大叶茜 草素的平均 回收率为
99 47% , RSD 为 0 24%。
2 9 U FLC 与 HPLC 测定结果比较: 取 3 份自采
茜草药材样品和 12 份市售茜草饮片, 按照上述
U FLC 测定方法测定。羟基茜草素保留时间为 1 2
m in,大叶茜草素保留时间 10 5 m in。另按照 2010
版%中国药典&茜草项下 HPLC 测定方法,羟基茜草
素保留时间为 7 2 min,大叶茜草素保留时间 25 3
m in。各样品中羟基茜草素和大叶茜草素测定结果
见表 1。
3 讨论
3 1 本实验通过方法学研究,首次建立了茜草中羟
基茜草素和大叶茜草素的U FLC测定方法。该方
∃2088∃ 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
表 1 UFLC 和 HPLC 测定羟基茜草素和大叶茜草素
Table 1 Determination of purpurin and rubimaillin in samples using UFLC and HPLC
序号 来 源 产 地 羟基茜草素/ ( mg ∃ g- 1 )
U FLC H PLC
大叶茜草素/ ( mg ∃ g- 1 )
U FLC H PLC
1 自采 陕西渭河 2 04 2 07 3 12 3 14
2 浙江中医药大学 陕西渭南 1 06 1 04 7 43 7 35
3 北京志新堂 陕西陇南 1 04 1 14 4 60 4 61
4 自采 山东烟台 1 68 1 70 7 94 7 91
5 北京老百姓大药房 山东聊城 2 88 2 84 4 67 4 70
6 自采 河南栾川 1 94 2 01 6 14 6 18
7 浙江中医药大学 河南信阳 1 53 1 53 5 14 5 06
8 北京航天中心医院 安徽合肥 1 12 0 94 4 77 4 82
9 浙江中医药大学 河北祁州 1 36 1 44 4 75 4 81
10 联康药店 河北保定 1 34 1 37 6 01 6 08
11 新街口药店 河北沧州 0 91 0 98 5 02 4 97
12 北京同仁堂远大路店 山西运城 1 18 1 24 2 42 2 40
13 新概念大药房 江西九江 0 97 0 84 3 96 3 90
14 中日友好医院 湖北随州 2 88 2 98 2 36 2 41
15 知春堂药店 北京 3 14 3 12 2 25 2 27
法精密度高、重现性好、快捷简便,适于茜草中羟基
茜草素和大叶茜草素的分析, 是一种高效、可行的质
量评价技术。
3 2 UFLC 色谱柱采用的填料粒径为 2 2 m, 色
谱柱内径为 3 0 mm, 色谱分析中极性小的成分不
容易被洗脱,如产生堆积会严重影响到色谱柱的使
用寿命。SIL- 20AC 自动进样器采用的管路内径
仅 0 1 mm, 易被堵塞,因此该方法对供试品溶液的
制备有特殊要求。本实验在供试品溶液制备中采用
了固相萃取小柱净化的方法制备供试品溶液。
3 3 采用 U FLC 与 HPLC 测定 15 份同样的茜草
样品中两种成分的量,结果表明,在测定结果差异不
大的前提下, U FLC 法可显著缩短分析时间, 羟基茜
草素和大叶茜草素的分析时间由 HPLC 法的 7 2、
25 3 min 缩短为 1 2、10 5 min。另因 UFLC 法使
用的色谱柱长度短, 平衡、冲洗色谱柱的时间也显著
缩短,减少了溶剂消耗。
3 4 U FLC 作为一种的新型液相色谱技术, 精密
度、稳定性和重现性都符合中药材质量控制和化学
分析要求。其分析效率高,在中药的快速检测方面
具有良好的应用前景。
参考文献:
[ 1] 王 军, 权勤波, 宋建建, 等 U FLC 同时测定复方氨酚烷
胺片中对乙酰氨基酚和咖啡因的含量 [ J] 中国药师, 2009,
12( 12) : 17751777
[ 2] Nikolin B, Imamovic B, M edanhodzicVuk S, et al . High
performance liquid chromatograph y in pharmaceut ical an aly
ses [ J ] B osn J B asic Med Sc i , 2004, 4( 2) : 59
[ 3] Kong W J, Zhao Y L, Xiao X H , et a l . Quan titat ive an d
ch emical f ingerprint analysis for qualit y cont rol of Rhiz oma
Cop tidi s Chinensis b ased on U PLCPAD combined with che
mometrics methods [ J] P hytomedicine, 2009, 16: 950959
[ 4] Min J Z, Shim izu Y, T oyo∋oka T , et al . Sim ultan eous deter
minat ion of 11 designated hallu cinogenic phenethylamin es b y
ult raf ast l iqu id chromatography w ith f lu or escence detection
[ J] J Ch romatogr B , 2008, 873: 187194
生干漆及煅干漆的生药学研究
赵 猛1, 2 , 魏朔南1 ,胡正海1 *
收稿日期: 20100427
基金项目:国家自然科学基金项目 ( 30870136) ,西北大学研究生创新基金
作者简介:赵 猛( 1980 ) ,男,讲师,在读博士,研究方向为结构植物学和资源植物学。
* 通讯作者 胡正海,教授,博士生导师。Tel: ( 029) 88302684。
( 1 西北大学生命科学学院 ,陕西 西安 710069; 2 山西师范大学,山西 临汾 041004)
摘 要:目的 对生干漆和煅干漆进行生药学研究。方法 采用生药性状描述、粉末特征鉴定、理化鉴别等方法,
对生干漆与煅干漆的主要性状进行了比较。结果 生干漆及煅干漆在生药性状、粉末特征及化学成分上均有一定
的差异。结论 可为生干漆及煅干漆的进一步开发利用提供理论依据。
关键词:生干漆; 煅干漆; 生药学
中图分类号: R286 1 文献标识码: A 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2089 04
∃2089∃中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月