全 文 ：第 ３３卷　 第 ２期 《新疆师范大学学报》（自然科学版） Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．２
２０１４年 ６月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｎ．２０１３
（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
独行菜 ｅＥＦ－１ａ基因片段
分离克隆及 ＲＴ－ＰＣＲ分析
葛凤伟，　 田永芝，　 曾卫军，　 赵惠新﹡
（新疆师范大学 生命科学与化学学院，新疆 乌鲁木齐 ８３００５３）
　 　 ［收稿日期］ ２０１４－０４－１０
　 　 ［基金项目］ 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目（２０１２２１１Ａ０５４）。
　 　 ［作者简介］ 葛凤伟（１９７７－），女，新疆乌鲁木齐人，博士，主要从事植物抗逆生理生态与分子生物学方向的研究。
∗　 ［通讯作者］ 赵惠新（１９７５－），女，新疆奇台人，博士，硕导，副教授，主要从事植物逆境生理生化与分子生物学方向的研究。
摘 要： 文章根据已知植物 ｅＥＦ－１ａ（编码 Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ１－ａｌｐｈａ）基因的保守序列设计引物 ，采用 ＲＴ－ ＰＣＲ
的方法扩增独行菜（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ．）ｅＥＦ－１ａ基因片段。 结果获得一大小为 ５７０ｂｐ 的基因片段，序列比对表明，该基因片
段与拟南芥 ｅＥＦ－１ａ基因核苷酸序列的同源性达到 ９５％，推测该其应该是独行菜 ｅＥＦ－１ａ基因片段。 采用 ＲＴ－ ＰＣＲ方法，对独行
菜三个生长阶段材料及对应阶段冷诱导后地材料中的 ｅＥＦ－１ａ基因表达作了分析，表明 ｅＥＦ－１ａ 在独行菜组织中表达稳定，可以
作为实时荧光定量 ＰＣＲ研究独行菜基因表达分析中的看家基因。
关键词： ｅＥＦ －１ａ（ｅＥＦ１Ａ）基因； 克隆； ＲＴ－ＰＣＲ分析
中图分类号：　 Ｑ７８５　 　 　 文献标识码：　 Ａ　 　 　 文章编号：　 １００８⁃９６５９（２０１４）０２⁃０２２⁃０５
实时荧光定量 ＰＣＲ 是最近几年新发展起来的方法 ，已被广泛应用于转录组学研究、碳水化合物代谢与
抗耐性等途径相关基因的表达分析［１－５］。 在应用实时荧光定量 ＰＣＲ 检测基因的表达量中 ，必须选择合适的
内参基因进行校正和标准化。 内参基因在 ＰＣＲ 扩增中的变化可以反映 ＲＮＡ 数量、质量和 ｃＤＮＡ 合成效率
的变化。 ｅＥＦ－１ａ （编码 Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ１－ａｌｐｈａ）在植物组织中表达相对稳定，可以作为实时荧光
定量 ＰＣＲ研究植物基因表达分析中的看家基因［６］。
独行菜（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ．）属于十字花科独行菜属植物，分布广泛，我国南北各省均有分布，多生
于路旁，荒地，屋旁及田间。 生活在新疆北部的独行菜属于比较典型的早春短命植物类型，能在早春萌发，其
萌发过程必然会常常受到低温的胁迫。 因此研究独行菜萌发过程及生长周期低温胁迫基因差异表达，对揭
示植物短命机制、萌发低温耐受机制等有重要的意义。 目前还没有独行菜有关看家基因的研究尚未见报道。
鉴于此，本研究以独行菜幼苗为材料，采用 ＲＴ－ ＰＣＲ方法克隆独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因片段，并对其在独行菜中
的表达稳定性作初步分析，为研究其它基因在独行菜的表达和调控选择内标参照奠定基础。
１　 材料与方法
１．１　 材料
１．１．１　 实验材料
独行菜（Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ）种子采自乌鲁木齐鲤鱼山。 独行菜幼苗提取总 ＲＮＡ。 菌株为Ｅ． ｃｏｌｉ
ＤＨ５α（实验室保存） ，质粒为 ｐＭＤ１８ － Ｔ Ｖｅｃｔｏｒ（Ｔａｋａｒａ） 。
１．１．２　 试剂
Ｔｒｉｚｏｌ 总 ＲＮＡ 抽提试剂盒、ＭＭＬＶ 第一链 ｃＤＮＡ 合成试剂盒、ＰＣＲ 产物克隆试剂盒等均购自宝生物公
２２
DOI:10.14100/j.cnki.1008-9659.2014.02.007
第 ２期 葛凤伟等　 　 独行菜 ｅＥＦ－１ａ基因片段分离克隆及 ＲＴ－ＰＣＲ分析
司 ， ＤＮＡ胶回收试剂盒、ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ购自东盛生物试剂公司， ＰＣＲ扩增试剂盒购自北京天根 ，其他生化试
剂均为进口或国产分析纯。
１．２　 方法
１．２．１　 总 ＲＮＡ的提取
用 Ｔｒｉｚｏｌ从独行菜 １５天龄幼苗中提取总 ＲＮＡ。 用紫外分光高度法和琼脂糖凝胶检测纯度和完整性。
１．２．２　 引物设计及 ＲＴ－ ＰＣＲ扩增
通过对已发表的植物 ｅＥＦ－１ａ 基因的核苷酸序列设计一对引物 ＡＬ、ＡＲ ，用于扩增独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因
片段 ，推测目的片段的长度为 ５７０ ｂｐ。 引物为 ＡＬ：ＣＡＣＣＡＡＴＣＴＴＧＴＡＣＡＣＡＴＣＣ，ＡＲ：ＧＡＣＣＡＣＣＡ ＡＧＴＡＣＴＡ
ＣＴＧＣＡＣ；嵌套 ＰＣＲ检测引物为：ｅｆ１－ｆ： ＣＡＡＧＧＣＴＡＧＧＴＡＣＧＡＴ， ｅｆ１－ｒ： ＣＡＡＴＣＡＴＧＴＴＧＴＣＴＣＣＣＴ。 引物均
由华大基因合成。
取 ２μｇ独行菜总 ＲＮＡ，按照第一链 ｃＤＮＡ 合成试剂盒（Ｔａｋａｒａ）说明合成第一链 ｃＤＮＡ。 ＰＣＲ 扩增反应
体系：１０× ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ ５μｌ ，２５ｍｍｏｌ ｌ－１ ＭｇＣｌ２３μｌ， ２ｍｍｏｌ ｌ
－１ ｄＮＴＰ ５μｌ ，１０ ｍｏｌ ｌ－１ ＡＬ １μｌ ，１０ ｍｏｌ ｌ－１ ＡＲ １μｌ ，
Ｔａｑ ＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ（５Ｕμｌ－１） ０． ５μｌ ， ｃＤＮＡ ２μｌ ，加水至 ５０μｌ。 反应条件：９４℃预变性 ２ｍｉｎ； ９４℃变性 ３０ｓ、
５８℃退火 ４５ｓ、７２℃延伸 ４５ｓ，３０个循环；最后 ７２℃延伸 １０ｍｉｎ。 扩增产物用 １．２ ％琼脂糖凝胶检测，回收纯化
按照柱式胶回收试剂盒操作说明进行。 扩增片段回收后作为模板进行嵌套 ＰＣＲ 检测，嵌套 ＰＣＲ 反应体系
和条件与上述 ＰＣＲ扩增基本一致，其中退火温度降至 ５２℃。
１．２．３　 阳性克隆的筛选与鉴定
将嵌套 ＰＣＲ检测为阳性的 ＰＣＲ产物连接到 ｐＭＤ１８ － Ｔ载体，转化感受态大肠杆菌，用含有 ５０μｇ ｍｌ 氨
苄青霉素的 ＬＢ 固体培养基进行蓝白斑筛选，阳性克隆经质粒 ＰＣＲ鉴定确认后，送至华大基因测序。
１．２．４　 序列的同源性分析
序列的 ＢＬＡＳＴ搜索在 ＮＣＢＩ （ｗｗｗ．ｎｃｂｉ． ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ ＢＬＡＳＴ）网站上进行。
１．２．５　 ＲＴ－ＰＣＲ分析独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因表达
取独行菜萌发过程子叶将要展开时的种子、三叶期幼苗、花期叶片、及上述三个时期对应材料经 ４℃处
理 １２小时，用 Ｔｒｉｚｏｌ提取总 ＲＮＡ，用紫外光吸收法调整各总 ＲＮＡ的浓度，尽量保持一致，取尽可能相同量的
总 ＲＮＡ进行 ＲＴ－ＰＣＲ 分析。
ｃＤＮＡ 一链合成按 １．２．２进行。 取 ０．５ μｌ 一链产物为模板进行 ＰＣＲ 扩增，２５ μｌ 体系包括 １×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ，
０．２ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ｄＮＴＰｓ，１．５ ｍｍｏｌ·Ｌ－１ ＭｇＣｌ２，上下游引物 ｅｆ１－ｆ 、ｅｆ１－ｒ：各 ０．４ μｍｏｌ·Ｌ
－１，１Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合
酶。 温度循环参数为 ９４℃预变性 ５ ｍｉｎ；９４℃ ４５ ｓ，５２℃ ４５ ｓ，７２℃ １ ｍｉｎ，３０ 个循环；７２℃延伸 ５ ｍｉｎ。 产物
进行琼脂糖凝胶检测。
２　 结果与分析
２．１　 总 ＲＮＡ的提取及检测
ＲＮＡ电泳结果显示（图 １） ， ２８ｓ和 １８ｓ条带整齐清晰、亮度约为 ２：１，分光光度检测 ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２８０为 １．
８－２．０；ＯＤ２８０ ／ ＯＤ２３０ 大于 ２．０。 表明总 ＲＮＡ 纯度和完整性都比较高。 可以用于 ＲＴ－ ＰＣＲ 扩增及分析
实验。
图 １　 不同生长阶段及冷处理后独行菜总 ＲＮＡ
１、２． １５天龄幼苗；３、６．萌发过程中子叶将要展开时种子；４、７．三叶期苗；５、８．花期叶片；１－５． 室温生长；６－８． ４℃处理 １２
小时。
２．２　 ＲＴ－ ＰＣＲ扩增
以总 ＲＮＡ反转录所得到的第一链 ｃＤＮＡ 为模板，用 ＡＬ、ＡＲ引物 （见材料与方法） 进行 ＰＣＲ 扩增。 扩
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新疆师范大学学报（自然科学版） ２０１４年
增产物经凝胶电泳检测发现约在 ５７０ ｂｐ 处有一条亮带，且上下无杂带，与预期目的片段的大小一致（图 ２） ，
推测可能是 ｅＥＦ－１ａ基因片断。 进一步进行嵌套 ＰＣＲ检测，得到条带清晰、大小符合预期的产物（如图 ２），
推断该 ＰＣＲ产物为目标产物，可进一步克隆测序。
图 ２　 独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因片段的 ＲＴ－ＰＣＲ扩增、嵌套 ＰＣＲ鉴定、重组质粒 ＰＣＲ鉴定
Ｍ．ＤＬ２０００（Ｍａｒｋｅｒ）， １． ＲＴ－ＰＣＲ，２． 嵌套 ＰＣＲ鉴定， ３． 重组质粒 ＰＣＲ鉴定
２．３　 重组质粒的 ＰＣＲ鉴定
将回收纯化的目的片段连接到 ｐＭＤ１８ － Ｔ克隆载体上，转化 Ｅ． ｃｏｌｉ ．ＤＨ５α。 从转化的平板上随机挑取
一个单菌落进行摇菌、提取质粒、进行 ＰＣＲ 扩增。 得到的扩增片段大小约为 ５７０ｂｐ （图 ２） ，与 ＲＴ － ＰＣＲ 结
果一致，表明这些克隆为阳性克隆，可以进行测序。
２．４　 测序结果及序列分析
将重组 ｐＭＤ１８ － Ｔ质粒进行测序，得到一段长度为 ５７０ｂｐ的序列。 序列如下： ＡＧＡＣＣＡＣＣＡＡＧＴＡＣＴＡ
ＣＴＧＣＡＣＡＧＴＣＡＴＴＧＡＴＧＣＡＣＣＴＧＧＡＣＡＴＣＧＴＧＡＴＴＴＣＡＴＣＡＡＧＡＡＣＡＴＧＡＴＴＡＣＴＧＧＴＡＣＣＴＣＣＣＡＧＧＣＴＧＡＴＴＧＴ
ＧＣＴＧＴＣＣＴＴＡＴＣＡＴＴＧＡＣＴＣＣＡＣＣＡＣＴＧＧＴＧＧＴＴＴＴＧＡＡＧＣＴＧＧＴＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧＡＴＧＧＴＣＡＧＡＣＣＣＧＴＧＡＧＣＡＣＧ
ＣＴＣＴＴＣＴＴＧＣＴＴＴＣＡＣＣＣＴＴＧＧＴＧＴＣＡＡＧＣＡＡＡＴＧＡＴＴＴＧＣＴＧＣＴＧＴＡＡＣＡＡＧＧＴＧＡＧＣＴＡＧＴＴＣＣＴＴＡＡＧＴＴＡＴＣＴ
ＴＴＴＴＴＴＴＴＧＴＡＡＴＴＴＴＴＴＡＡＴＡＧＴＣＴＡＡＡＧＣＴＡＡＴＴＴＴＴＴＴＴＴＣＴＴＴＣＡＧＡＴＧＧＡＴＧＣＣＡＣＴＡＣＣＣＣＣＡＡＡＴＡＣＴＣＣＡ
ＡＧＧＣＴＡＧＧＴＡＣＧＡＴＧＡＡＡＴＣＡＴＣＡＡＧＧＡＧＧＴＴＧＣＣＴＣＡＴＡＣＣＴＧＡＡＧＡＡＧＧＴＣＧＧＡＴＡＣＡＡＴＣＣＴＧＡＣＡＡＡＡＴＣＣ
ＣＡＴＴＣＧＴＧＣＣＣＡＴＣＴＣＴＧＧＡＴＴＴＧＡＧＧＧＡＧＡＣＡＡＣＡＴＧＡＴＴＧＡＧＡＧＧＴＣＣＡＣＣＡＡＣＣＴＴＧＡＣＴＧＧＴＡＣＡＡＧＧＧＡＣ
ＣＡＡＣＴＣＴＣＣＴＴＧＡＧＧＣＴＣＴＴＧＡＣＣＡＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＣＣＣＡＡＧＡＧＧＣＣＡＴＣＡＧＡＣＡＡＧＣＣＣＣＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＡＣＴＴＣＡ
ＧＧＡＴＧＴＧＴＡＣＡＡＧＡＴＴＧＧＴＧＧ
Ｂｌａｓｔ比较结果显示：该序列与拟南芥的 ｅＥＦ－１ａ基因核苷酸序列的同源性达到 ９５ ％，表明所克隆到的
片段为 ｅＥＦ－１ａ基因片段。
２．５　 独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因表达的 ＲＴ－ＰＣＲ分析
提取不同时期独行菜的总 ＲＮＡ，以及对应时期冷处理材料的总 ＲＮＡ进行 ＲＴ－ＰＣＲ 分析，结果如图 ３ 所
示，ｅＥＦ－１ａ 基因在选择的三个生长阶段及对应的冷处理后均有较高水平的表达，并且各时期间没有明显的
差异说明 ｅＥＦ－１ａ 基因在独行菜各生长阶段和冷处理后基因表达基本稳定，能够作为其他基因定量表达分
析的内标基因。
图 ３　 独行菜 ｅＥＦ－１ａ 基因表达的 ＲＴ－ＰＣＲ分析
１－３． 室温；４．ＤＬ２０００（Ｍａｒｋｅｒ）；５－７． ４℃处理 １２小时；１、５．萌发过程中子叶将要展开时种子；２、６．三叶期苗；３、７．花期叶片。
３　 讨论
真核生物延伸因子可分为 ｅＥＦ１ 和 ｅＥＦ２［７］， ｅＥＦ１ 介导氨酰－ｔＲＮＡ 与核糖体结合，它有 ４ 个亚基，分别
为 ＥＦ－１α、ＥＦ－β１、 ＥＦ－１β 和 ＥＦ－１γ，１９９５ 年 ４ 月 ＩＵＢＭＢ 委员会将其重新命名为分别为 ｅＥＦ１Ａ、ｅＥＦ１Ｂα、
４２
第 ２期 葛凤伟等　 　 独行菜 ｅＥＦ－１ａ基因片段分离克隆及 ＲＴ－ＰＣＲ分析
ｅＥＦ１Ｂβ和 ｅＥＦ１Ｂγ［８］，ｅＥＦ１Ａ相当于原核生物的 ＥＦＴｕ，为量甚多，仅次于肌动蛋白［９］，广泛存在于真核细胞
内，是在核糖体上催化氨基酸链的延伸而推动、控制蛋白质的合成等方面起到重要作用的蛋白质因子。 在植
物蛋白质合成延伸过程中，ｅＥＦ１Ａ是一个主要的翻译因子；在快速增殖的细胞中，ｅＥＦ１Ａ 基因的表达调控十
分保守，其表达水平同细胞生长及增殖速度有关。 除了参与同翻译控制有关的信号传导外，ｅＥＦ１Ａ 还参与
细胞生长、应激反应及与运动性有关的信号传导。 目前许多植物的 ｅＥＦ１Ａ 基因已被分离，植物种间的氨基
酸序列高度保守［１０－２０］；植物 ｅＥＦ１Ａ由多基因编码，但它的表达相对稳定性可作为一种新颖的分子进行遗传
和生理标记［２１，２２］。
生活在新疆北部的独行菜作为一种典型的早春短命植物 ，幼苗必然能够耐受冷胁迫，因此可能蕴含着
丰富的耐冷基因，要深入研究这些基因的表达模式及调控机制，往往需要内标参照，ｅＥＦ１Ａ 基因由于其表达
比较稳定，被许多研究者作为植物重要的内标基因之一 。 但是在 ＧｅｎＢａｎｋ 数据库中未能搜索到有关独行菜
的 ｅＥＦ１Ａ基因序列，本研究克隆了 ｅＥＦ１Ａ片段，为进一步以 ｅＥＦ１Ａ 基因为内标参照，应用荧光定量等方法
研究其他基因 ｍＲＮＡ的表达奠定了基础。
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［１５］ Ｖｉｊａｙｋｕｍａｒ Ｄ， Ｒａｍａｃｈａｎｄｅｒ Ｔ Ｖ Ｎ， Ｍａｈｉｓｈｉ Ｌ Ｈ， Ｋａｕｌ Ｒ， Ｐｙａｔｉ Ｐ Ｐａｕｌ Ｂ Ｒａｗａｌ Ｓ Ｋ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ，ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘ⁃
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １Ａ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ Ｌ［Ｊ］ ． Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２００２，１６２： ３１５－３２１．
［１６］ Ｗａｎｇ Ａ Ｑ， Ｑｉｎ Ｙ Ｚ， Ｙｅ Ｘ Ｚ， Ｆａｎ Ｙ Ｇ， Ｈｅ Ｌ Ｆ， Ｙａｎｇ Ｌ Ｔ，Ｌｉ Ｙ Ｒ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １Ａ
ｇｅｎｅ ｉｎ ｓｕｇａｒｃａｎｅ ｓｔａｌｋｓ［Ｊ］ ． Ｓｕｇａｒ Ｔｅｃｈ， ２００８， １０（２）：１１９－１２３．
［１７］ Ａｇｕｉｌａｒ Ｆ， Ｍｏｎｔａｎｄｏｎ Ｐ Ｅ， Ｓｔｕｔｚ Ｅ．Ｔｗｏ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ ｓｏｙｂｅａｎ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｅＥＦ－１ａ ａｒｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｉｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ ｌｅａｖｅｓ［ Ｊ］ ．
Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １９９１，１７：３５１－３６０．
［１８］ Ｋａｗａｈａｒａ Ｒ， Ｓｕｎａｂｏｒｉ Ｓ， Ｆｕｋｕｄａ Ｈ， Ｋｏｍａｍｉｎｅ Ａ．Ａ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｇｌｏｂｕｌａｒ ｓｔａｇｅ ｏｆ ｓｏ－ｍａｔｉｃ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ ｅｎｃｏｄｅｓ ｅｌｏｎｇａ⁃
ｔｉｏｎ－ｆａｃｔｏｒ １ ａｌｐｈａ ｉｎ ｃａｒｒｏｔ［Ｊ］ ． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， １９９２， ２０９（１）：１５７－１６２．
［１９］ Ａｘｅｌｏｓ Ｍ， Ｂａｒｄｅｔ Ｃ， Ｌｉｂｏｚ Ｔ， Ｌｅ Ｖａｎ Ｔｈａｉ Ａ， Ｃｕｒｉｅ Ｃ， Ｌｅｓｃｕｒｅ Ｂ． Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ＥＦ－１α：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａ， Ｇｅｎｅｒａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， １９８９， ２１９：１０６－ｌ１２．
５２
新疆师范大学学报（自然科学版） ２０１４年
［２０］ Ｐｏｋａｌｓｋｙ Ａ Ｒ， Ｈｉａｔ Ｗ Ｒ， Ｒｉｄｇｅ Ｎ， Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ Ｒ， Ｈｏｕｃｋ Ｃ Ｍ，Ｓｈｅｗｍａｋｅｒ Ｃ Ｋ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １α ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］ ． Ｎｕ⁃
ｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， １９８９， １７（１２）：４６１－４６７．
［２１］ Ａｈｎ Ｊ， Ｈｏｎｇ Ｊ， Ｌｅｅ Ｈ， Ｐａｒｋ Ｍ， Ｌｅｅ Ｅ Ｋｉｍ Ｃ， Ｃｈｏｉ Ｅ， Ｊｕｎｇ Ｊ， Ｌｅｅ Ｈ． Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １－α ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏ⁃
ｎｉｎｇ ｓｅｑｕｅｎｃｅ， ａｎｄ ｕｓｅ ｏｆ ｉｔｓ ｐｒｏｍｏｔｅｒ［Ｊ］ ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ２００７， ７４： ６０１－６０８．
［２２］ Ｈａｂｂｅｎ Ｊ Ｅ， Ｍｏｒｏ Ｇ Ｌ， Ｈｕｎｔｅｒ Ｂ Ｇ， Ｈａｍａｋｅｒ Ｂ Ｒ， Ｌａｒｋｉｎｓ Ｂ Ａ． Ｅｌｏｎｇａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １ ａｌｐｈａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｌｙｓｉｎｅ ｃｏｎ⁃
ｔｅｎｔ ｏｆ ｍａｉｚｅ ｅｎｄｏｓｐｅｒｍ［Ｊ］ ． Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ Ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ ＵＳＡ， １９９５ ，９２：８６４０－８６４４．
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅＥＦ－１ａ Ｇｅｎｅ
Ｆｒａｇｍｅｎｔ ｆｒｏｍ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ （Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ．）
ＧＥ Ｆｅｎｇ－ｗｅｉ，　 ＴＩＡＮ Ｙｏｎｇ－ｚｈｉ，　 ＺＥＮＧ Ｗｅｉ－ｊｕｎ，　 ＺＨＡＯ Ｈｕｉ－ｘｉｎ∗
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，８３００５４， Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｄｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅＥＦ－１ａ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｏｔｈ⁃
ｅｒ ｐｌａｎｔｓ． Ａｎｄ ｔｈｅ ｅＥＦ－１ａ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＲＴ－ ＰＣＲ ｆｒｏｍ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ （Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ．） ．
Ｔｈｅ ｅＥＦ－１ａ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ５７０ ｂｐ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｃｉｄｓ． Ｂｌａｓｔｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｉｔ ｈａｓ ９５ ％ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ｗｉｔｈ ｏｎｅ ｉｎ ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ． Ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｅＥＦ－１ａ
ｇｅｎｅ ｗａｓ ｓｔｅａｄｙ ｉｎ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ， ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄ ｗｈｅｎ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｏｔｈｅｒ ｇｅｎｅｓ’ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌｅｐｉｄｉｕｍ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｌｅｐｉｄｉｕｍ （Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ａｐｅｔａｌｕｍ Ｗｉｌｌｄ．）； ｅＥＦ －１ａ（ｅＥＦ１Ａ） ｇｅｎｅ； Ｃｌｏｎｅ； ＲＴ－ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ
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