全 文 ：北方园艺２０１４（１６）：１２７～１３０ ·贮藏保鲜加工·
第一作者简介：赵伟伟（１９８７－），男，硕士，现主要从事药用植物资
源等研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｋｄｚｗｗ＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：李爱民（１９５６－），男，硕士，研究员，现主要从事野生果树
及药用植物的栽培和育种等工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｕｏｊｉａｌａｍ＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：吉林省科技厅科技支撑资助项目（２０１３０２０６０７０ＮＹ）。
收稿日期：２０１４－０４－２９
蓬蘽悬钩子水杨酸提取工艺及含量变化研究
赵 伟 伟，李 爱 民，张 正 海，张 　 悦，陈 晓 丹
（中国农业科学院 特产研究所，吉林，长春１３０１１２）
　　摘　要：以蓬蘽悬钩子为试材，通过正交实验，对蓬蘽悬钩子中游离态与结合态水杨酸的提
取工艺条件进行了优化，并测定了蓬蘽悬钩子生长期各器官中水杨酸含量。结果表明：游离态水
杨酸提取最佳工艺条件为以乙腈为提取溶剂，加入磷酸，超声１５ｍｉｎ；结合态水杨酸提取最佳工
艺条件乙醚作为提取溶剂，加入磷酸，超声１５ｍｉｎ。蓬蘽悬钩子新梢和果实中游离态与结合态水杨
酸含量变化趋势相似（ｒ＝０．８６８＊＊和０．９８６＊＊）。开花期前，新梢水杨酸含量较高（１．１７９ｍｇ／ｇ）；开花
期至果实发育期（青果期），新梢水杨酸含量呈下降趋势；果实着色期至充分成熟期，新梢水杨酸
含量呈上升趋势；８月上中旬果实采摘后，新梢水杨酸含量急剧上升（１．４３４ｍｇ／ｇ）。总之，果实水
杨酸含量在整个发育期呈下降趋势，发育期（青果期）果实水杨酸含量比成熟期高。
关键词：蓬蘽悬钩子；水杨酸；提取工艺
中图分类号：Ｓ　６６３．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１４）１６－０１２７－０４
　　蓬蘽悬钩子（Ｒｕｂｕｓ　ｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ）属蔷薇科（Ｒｏｓａ－
ｃｅａｅ）悬钩子属（Ｒｕｂｕｓ）树莓亚属（Ｉｄｅｏｂａｔｕｓ）多年生落叶
　　　　
灌木型果树，果实也称为树莓（Ｒａｓｐｂｅｒｒｉｅｓ），中医称为覆
盆子。覆盆子（青果期果实）水杨酸含量较高，能抑制前
列腺素Ｈ２合成酶的转录，减少促炎性潜在肿瘤前列腺
素的合成从而达到抗癌的作用，定期摄取含水杨酸的食
物可以减少癌症等疾病的发生［１］。同时，覆盆子还可作
为发汗剂，是治疗感冒、流感、咽喉炎的良药。我国东北
拥有丰富的蓬蘽悬钩子资源，选取优化的提取工艺，研
究悬钩子不同生育期水杨酸含量变化，对合理开发利用
　　　　
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Ｌｅａｆ　Ｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ
ＹＡＮ　Ｘｕｅ－ｒｕｉ，ＺＨＯＵ　Ｙｕａｎ，ＺＨＡＯ　Ｒｕｉ－ｊｉｅ，ＤＡＩ　Ｈａｎ－ｐｉｎｇ，ＦＵ　Ｊｕｎ－ｆａｎ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ　ｌｅａｆ　ｐｅｒｆｏｒａｔｉｏｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｉｎ　ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｒｅａｓ　ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｂａｓｅｄ　ｏｎ　Ｋｏｃｈ’ｓ
ｐｏｓｔｕｌａｔｅｓ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ，ｒＤＮＡ－ＩＴＳ　ａｎｄ　ＥＦ－１αｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｂｌｕｓｔ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ，ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ，ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｍｙｃｅｌｉａ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｓｐｏｒｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｕｎｄｅｒ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ａｌｔｅｒｎａｔａ，ｔｈｅ
ｍｙｃｅｌｉａ　ｇｒｅｗ　ｂｅｓｔ　ｏｎ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉａ，ｕｎｄｅｒ　３０℃，ｐＨ　５，ｄｅｘｔｒｏｓｅ　ａｎｄ　ｇｌｙｃｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃａｒｂｏｎ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ
ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｓｐｏｒｅ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　３０℃，ｐＨ　５，２％ｇｌｙｃｉｎｅ　ａｎｄ　２％ｄｅｘｔｒｏｓｅ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ．ｔｈｅ　ｍｙｃｅｌｉａ　ｄｉｅｄ
ｕｎｄｅｒ　５６℃ｆｏｒ　１０ｍｉｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ；ｌｅａｆ　ｓｐｏｔ；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ａｌｔｅｒｎａｔａ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ＩＴＳ；ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
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·贮藏保鲜加工· 北方园艺２０１４（１６）：１２７～１３０
这一宝贵资源具有重要意义。
不同提取方法直接影响水杨酸的测定结果，对于结
合态水杨酸提取方法有多种，Ｄｉｎｉ等［２］采用乙腈∶水∶
醋酸（２５∶７５∶５）超声５ｍｉｎ，并用盐酸调节ｐＨ　１～２作
为提取条件；徐幼平等［３］用甲醇超声３０ｍｉｎ，并用ＤＥＡＥ
纤维素进行阴离子交换，再利用Ｓｅｐ－Ｐａｋ　Ｃ１８短柱富集；
李兆亮等［４］用乙醇、偏磷酸作为提取溶剂并用乙酸乙酯
多次抽提；张玉等［５］采用乙醚和三氯乙酸作为提取溶剂
并加入定量的盐酸，采用多次提取的方式，每次浸提
１２ｈ；邓文红等［６］以五角枫叶片为试材，采用９０％甲醇
作为初提溶剂，并用盐酸水解结合态水杨酸，然后用三
氯乙酸和乙酸乙酯∶环己烷（１∶１）再次提取；薛峰等［７］
研究了采用甲醇、乙腈等有机试剂提取水杨酸，并加入
乙酸、甲酸及磷酸等进行调节，初步的提取后，直接过滤
即可进样，也可以采用固液提取小柱进一步的纯化，使
得水杨酸更加富集，以减少样品基质的干扰。该试验在
前人的研究基础上，对蓬蘽悬钩子叶片中游离态和结合
态水杨酸的提取过程进行了优化，确定了水杨酸的最佳
提取条件。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试蓬蘽悬钩子的新梢及果实于２０１３年５～９月，
采集自中国农业科学院特产研究所左家实验基地。新
梢经过自然晾干并粉碎，经１０目筛网过滤后备用；果实
采摘以后于－１８℃冷冻，使用时在４℃条件下研磨。
水杨酸标准品，德国奥格斯堡市Ｄｒ．Ｅｈｒｅｎｓｔｏｒｆｅｒ
ＧｍｂＨ（纯度９９．５％）；水（超纯水），甲醇、乙腈、磷酸、冰
醋酸为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
仪器：ＦＡ２２０４Ｂ电子天平（上海精密科学仪器公
司）；ＫＱ－３００Ｅ型超声波发生装置（昆山市超声仪器有限
公司）；ＲＥ－２０００Ａ旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；
ＨＷＳ２４型恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）；Ｗａｔｅｒｓ
ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ超高效液相色谱仪（二极管阵列检测
器）。
１．２　试验方法
１．２．１　水杨酸提取　取２．０ｇ样品充分研磨后（果实取
５．０ｇ），置于５０ｍＬ的离心管中，加５％的酸４．０ｍＬ，加
水至２０．０ｍＬ后再加入３０ｍＬ提取溶剂充分，摇匀，浸
提１２ｈ，于下离心５．０ｍｉｎ，取出上部有机相，再经溶剂重
复提取２次，合并有机相，真空旋转蒸干后，加入１．０ｍＬ，
５０％甲醇＋乙酸缓冲液（ｐＨ　３．２）的混合液将其溶解，置
于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中保存，即为游离态水杨酸样品。残渣
加入１８．５％的ＨＣｌ至浓度为３．２％，于８０℃水浴中加热
１ｈ，冷却后用同一有机相提取３次，合并有机相，蒸干后
加入１．０ｍＬ，５０％甲醇＋５０％乙酸缓冲液（ｐＨ　３．２）的混
合液溶解，置于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中保存，即为结合态水杨酸
样品［２］。样品经０．２２μｍ的微孔过滤器过滤后，用超高
效液相色谱（ＵＰＬＣ）进行检测。
１．２．２　色谱柱　ＡＣＱＵＩＴＹ　ＵＰＬＣ　ＢＥＨ　Ｃ１８（１．７μｍ，
２．１ｍｍ×５０ｍｍ），柱温３５℃；流动相为Ｖ（乙腈）∶Ｖ
（ｐＨ　１．４２磷酸）＝３０∶７０，等梯度洗脱，流速为０．４ｍＬ／ｍｉｎ，
进样体积２μＬ；检测波长２３７ｎｍ，光谱范围１９０～４００ｎｍ。
用 Ｗａｔｅｒｓ色谱工作站进行图谱分析，包括组分纯度测
定和定量计算。
１．２．３　标准曲线的建立　精确称取水杨酸标准品，用
５０％甲醇＋５０％乙酸缓冲液（ｐＨ　３．２）的混合液配制成５
个不同质量浓度（浓度介于０．２４～２．４０μｇ／ｍＬ之间）的
标准溶液，按照上述色谱条件依次分析，得标准曲线方
程Ｙ＝７．８３×１０６　Ｘ－１．９９×１０２（Ｒ２＝０．９９９５），根据标准
曲线计算水杨酸含量。
１．２．４　游离态及结合态水杨酸提取工艺研究　试验采
用Ｌ９（３４）正交设计，设提取溶剂（Ａ）、提取时间（Ｂ）和加
酸（Ｃ）３个因素，每个因素设３个水平，３次重复，确定最
佳的提取工艺（表１）。
表１ 游离态及结合态水杨酸因素水平
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ
ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ａｎｄ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
水平
因素
Ａ提取溶剂 Ｂ提取时间 Ｃ酸
１ 乙醇 浸提１２ｈ 三氯乙酸
２ 乙醚 浸提２４ｈ 冰醋酸
３ 乙腈 超声１５ｍｉｎ 磷酸
２　结果与分析
２．１　蓬蘽悬钩子游离态与结合态水杨酸提取工艺条件
优化
试验结果表明，影响游离态水杨酸提取因素所起作
用依次为：Ａ＞Ｃ＞Ｂ，即提取溶剂的影响达到了显著水
平，其次为加不同的酸，提取时间影响最小，其最佳的提
取组合为Ａ３Ｂ３Ｃ３，即用乙腈作为提取溶剂，加入磷酸，超
声１５ｍｉｎ（表２）。
表２ 游离态水杨酸方差分析
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｆｒｅｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
误差来源 ＳＳ　 ｄｆ　 ＭＳ　 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 １０１．２９　 ２　 ５０．６５　 １９．５４ ＜０．０５
Ｂ　 １８．３６　 ２　 ９．１８　 ３．５４
Ｃ　 ３１．７５　 ２　 １５．８７　 ６．１２
误差 ５．１８　 ２　 ２．５９
　　注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９，Ｆ０．０１（２，２）＝９９。
经方差分析，影响结合态水杨酸提取因素所起作用
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北方园艺２０１４（１６）：１２７～１３０ ·贮藏保鲜加工·
依次为：Ｃ＞Ａ＞Ｂ，提取的最佳组合为Ａ２Ｂ３Ｃ３，即用乙醚
作为提取溶剂，加入磷酸，超声１５ｍｉｎ（表３）。由于乙醚
具有有特殊刺激气味，极易挥发，并且３种溶剂均未达
到显著水平，因此选取乙腈作为提取溶剂，其它条件保
持不变。
表３ 结合态水杨酸方差分析
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｖａｒｉａｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｆｏｒ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
误差来源 ＳＳ　 ｄｆ　 ＭＳ　 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 ２．２７　 ２　 １．１４　 ０．２５
Ｂ　 ０．０９４　 ２　 ０．０４７　 ０．０１０
Ｃ　 １９．７１　 ２　 ９．８６　 ２．１５
误差 ９．１７　 ２　 ４．５９
２．２　蓬蘽悬钩子新梢及果实不同生长时期水杨酸含量
的变化
２．２．１　新梢水杨酸含量变化　蓬蘽悬钩子５月上旬萌
芽，５月中旬进入新梢生长期，５下旬至６月上旬为开花
期，７月上旬进入着色期，８月上旬果实成充分成熟。试
验结果表明，蓬蘽悬钩子新梢中游离态与结合态水杨酸
含量变化趋势相似（ｒ＝０．８６８＊＊），在新梢生长期，新梢
水杨酸含量较高约为１．１７９ｍｇ／ｇ，开花期至果实发育期
（青果期）新梢水杨酸含量呈逐渐下降趋势，果实着色期
至充分成熟期新梢水杨酸含量呈逐渐上升趋势，８月上
中旬，果实采摘后新梢水杨酸含量急剧上升（图１）。果
实采后树体的营养水平直接影响第２年的产量，水杨酸
能够维持较高的水平将有助于增强植物的抗性，延缓叶
片的衰老，从而积累更多的光合产物。
图１　新梢中不同生长时期水杨酸含量变化
Ｆｉｇ．１　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｓｈｏｏｔｓ　ａｔ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄｓ
２．２．２　果实水杨酸含量变化　试验结果表明，蓬蘽悬钩
子果实中游离态与结合态水杨酸含量变化趋势相似
（ｒ＝０．９８６＊＊），果实水杨酸含量在整个发育期呈下降趋
势，果实发育期（青果期）水杨酸含量比成熟期高（图２）。
水杨酸也是一种乙烯生物合成的有效抑制剂，而乙烯的
大量生成是果实趋于成熟衰老的重要特征之一。果实
成熟发育过程中，水杨酸水平基本呈下降趋势。果实和
图２　果实中不同生长时期水杨酸含量的变化
Ｆｉｇ．２　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ
ｆｒｕｉｔ　ａｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｗｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄｓ
新梢（主要是叶片）可能存在“库源”关系，叶片是生产水
杨酸的主要器官，经由新梢转移到果实或根系。在开花
前新梢可食用或药用；青果期果实水杨酸含量高，适宜
加工药用；成熟期果实水杨酸含量较低，适宜鲜食或加
工成果酒、果酱、果汁等。
２．３　方法的精密度
在上述色谱条件下，对同一对照品溶液重复测定５
次，水杨酸在此测定方法下，波峰保留时间波动小于
０．０２ｍｉｎ，测得水杨酸峰面积的相对标准偏差为０．２７％。
２．４　方法回收率
精确称取已测知水杨酸含量的果实样品５．０ｇ，准
确加入水杨酸对照品溶液，按供试品溶液的制备方法制
备样品，测得其回收率为８９．３０％～９８．６６％（表４、５）。
表４ 果实中游离态水杨酸的回收率
　　Ｔａｂｌｅ　４　Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｆｒｅｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｆｒｕｉｔ
ＳＡ加入量／μｇ　 ＳＡ测得量／μｇ 回收率／％ 平均值／％ 标准偏差／％
５０　 ４９．１７　 ９８．３４
５０　 ４９．３３　 ９８．６６　 ９７．８７　 １．１０
５０　 ４８．３１　 ９６．６２
　　表５ 果实中结合态水杨酸的回收率
　　Ｔａｂｌｅ　５　Ｒａｔｅ　ｏｆ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｏｆ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｆｒｕｉｔ
ＳＡ加入量／μｇ　 ＳＡ测得量／μｇ 回收率／％ 平均值／％ 标准偏差／％
１０　 ８．９６　 ８９．６０
１０　 ９．１９　 ９１．９０　 ９０．２７　 １．４２
１０　 ８．９３　 ８９．３０
３　结论与讨论
该试验结果表明，影响游离态水杨酸提取因素所起
作用依次为：Ａ＞Ｃ＞Ｂ，即提取溶剂的影响达到了显著
水平，其次为加不同的酸，提取时间影响最小，其最佳的
提取组合为Ａ３Ｂ３Ｃ３，即用乙腈作为提取溶剂，加入磷酸，
超声１５ｍｉｎ；影响结合态水杨酸提取因素所起作用依次
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为：Ｃ＞Ａ＞Ｂ，提取的最佳组合为Ａ２Ｂ３Ｃ３，即用乙醚作为
提取溶剂，加入磷酸，超声１５ｍｉｎ（表２）。由于乙醚具有
特殊刺激气味，极易挥发，并且３种溶剂均未达到显著
水平，因此选取乙腈作为提取溶剂，其它条件保持不变。
蓬蘽悬钩子新梢、果实中游离态与结合态水杨酸含
量变化趋势相似。果实和新梢（主要是叶片）是“库源”
关系，新梢与果实水杨酸含量变化呈负相关。在新梢生
长期，新梢水杨酸含量较高，开花期至果实发育期（青果
期）新梢水杨酸含量呈下降趋势，果实着色至充分成熟
期新梢水杨酸含量呈上升趋势，８月中旬果实采摘后新
梢水杨酸含量急剧上升。果实中的水杨酸在整个发育
期呈下降趋势，发育期（青果期）果实水杨酸含量比进入
成熟期高。因此认为，蓬蘽悬钩子在开花前可采集新梢
利用；青果期果实水杨酸含量高，适宜加工药用；成熟期
果实水杨酸含量较低，适宜鲜食或加工成果酒、果酱、果
汁等。
目前，对植物中水杨酸测定的方法较多，由于分析
方法和样品的原产地、加工、存储的不同造成测定结果
有很大差异［８］，而提取的过程、方法和不同取样时期等
的差异也可能会导致所测的结果不同。水杨酸检测过
程中，荧光检测器比紫外检测器更具特异性，而且能使
检测结果更加准确［９］，但是含有吸电子基的基团能使水
杨酸发生荧光猝灭，提取过程中加入的盐酸、三氯乙酸、
冰醋酸等使水杨酸的荧光减弱。可以利用超高效液相
中的二极管阵列检测器，避开其它物质的干扰，达到准
确检测的目的。
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　Ａｃｉｄ　ｆｒｏｍＲｕｂｕｓｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ
ＺＨＡＯ　Ｗｅｉ－ｗｅｉ，ＬＩ　Ａｉ－ｍｉｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｚｈｅｎｇ－ｈａｉ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕｅ，ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｄａｎ
（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ　１３０１１２）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　Ｒｕｂｕｓ　ｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｒｅｅ　ａｎｄ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｒｕｂｕｓ
ｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｆｒｅｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ
ａｃｉｄ　ｗｅｒｅ：ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ａｎｄ　ａｄｄｉｎｇ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　１５ｍｉｎ；ｆｏｒ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗｅｒｅ
ｄｉｅｈｙｌ　ｅｔｈｅｒ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ａｎｄ　ａｄｄｉｎｇ　ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　１５ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｆｒｅｅ　ａｎｄ　ｂｏｕｎｄ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｄｉｓｐｌａｙｅｄ
ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｒｕｂｕｓ　ｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ　ｓｈｏｏｔｓ　ｏｒ　ｆｒｕｉｔｓ（ｒ＝０．８６８＊＊ａｎｄ　０．９８６＊＊）；ｔｈｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｎｅｗ
ｓｈｏｏｔｓ　ｓｈｏｗｎ　ａ　ｈｉｇｈｅｒ　ｌｅｖｅｌｓ（１．１７９ｍｇ／ｇ）ｂｅｆｏｒｅ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ，ａｎｄ　ｄｅｃｌｉｎｅｄ　ｇｒａｄｕａｌｙ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ　ｐｅｒｉｏｄ　ｔｏ　ｆｒｕｉｔ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄ（Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｈｉｔｅ　ｏｌｉｖｅ　ｐｅｒｉｏｄ），ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｇｒａｄｕａｌｙ　ｆｒｏｍ　ｃｏｌｏｒｉｎｇ　ｔｏ　ｆｕｌｙ　ｍａｔｕｒｅ　ｐｅｒｉｏｄ，ａｎｄ　ａ　ｓｈａｒｐ　ｒｉｓｅ
ａｆｔｅｒ　ｐｉｃｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｒｕｉｔ　ｉｎ　ｍｉｄ－Ａｕｇｕｓｔ（１．４３４ｍｇ／ｇ）．Ｉｎ　ａ　ｗｏｒｄ，ｔｈｅ　ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｒｕｉｔ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ
ｇｒｏｗｔｈ　ｐｅｒｉｏｄ，ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｌｅｖｅｌ　ｔｈａｎ　ｍａｔｕｒｅ　ｐｅｒｉｏｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｒｕｂｕｓ　ｃｒａｔａｃｇｉｆｏｌｉｕｓ；ｓａｌｉｃｙｌｉｃ　ａｃｉｄ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ
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