全 文 ：第 34 卷 第 5 期
2013 年 9 月
内 蒙 古 农 业 大 学 学 报
Journal of Inner Mongolia Agricultural University
Vol． 34 No． 5
Sep． 2013
DNS比色法测定菥蓂子中多糖的含量*
包志华1， 高建萍2* ， 徐天宇2
(1． 内蒙古商贸职业学院，呼和浩特 010110;2．内蒙古医科大学院药学院，呼和浩特 010110)
摘要: 目的:采用 DNS法测定菥蓂子中多糖的含量。方法:以葡萄糖为对照品，在波长为 540nm处。采用 3，5 －二
硝基水杨酸比色法(DNS法)测定多糖的含量。结果:葡萄糖在 0． 01mg /m ～ 0． 06mg /ml范围内与吸光度呈良好的线
性关系。y = 0． 074 9x + 0． 001 8，r = 0． 996 3，结论:本法重现性好，便捷、准确、灵敏度高，有助于菥蓂子质量控制方
法的研究。
关键词: 菥蓂子; 多糖; 3，5 －二硝基水杨酸比色法; 含量测定
中图分类号: Ｒ917 文献标识码: A 文章编号:1009 － 3575(2013)05 － 0023 － 03
QUANTITATIVE DETEＲMINATION OF POLYSACCHAＲIDE
IN Thlaspi arvense Linn WITN DNS METHOD
BAO Zhi － hua1， GAO Jian － ping2* ， XU Tian － yu2
(1． InnerMongolia Business Vocational College，Huhhot 010110，China;2． InnerMongolia Medical University，Huhhot 010110，China)
Abstract: Objective:Polysaccharide of Thlaspi arvense Linn was determined by DNS method． Method:Contrast to glucose，the ab-
sorptions of processed samples were tested at the wavelength of 540nm． Ｒesult:The calibration curve was in good linearity over the range
of 0． 01 ～ 0． 06mg /ml． y = 0． 0749x + 0． 0018，r = 0． 9963，Conclusion:The method which can be used for the quality control of Thlaspi
arvense Linn is convenient，accurate and sensitive with good reproducibility．
Key words: Thlaspi arvense Linn; polysaccharide; 3，5 － dinitrosalicylic acid colorimetry; content determination
菥蓂 Thlaspi arvense Linn 为双子叶十字花科菥
蓂属一年生草本植物，又叫遏蓝菜、败酱草(江苏)、
犁头草(陕西) ，分布于中国各地。其全草、嫩苗，种
子均可入药。全草可入药，具有清肝明目，清热利尿
等功效［1］。DNS比色法原理是 3，5 －二硝基水杨酸
与多糖水解后的还原糖反应生成红棕色氨基化合
物，通过其颜色的变化再用紫外分光光度法测得吸
收度。由朗伯比耳定律，其吸收度和单糖浓度呈线
性关系，由此计算出浓度。
1 仪器与试液
WFJ7200 型可见分光光度计(尤尼科(上海)仪
器有限公司) ，AL204 型电子天平(梅特勒 －托利多
仪器(上海)有限公司) ，DZKW － D － 2 型电热恒温
水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂) ，SFG － 01 型电
热恒温鼓风干燥箱(黄石市恒丰医疗器械有限公
司) ，BFX5 － 320 型离心机(白洋离心机厂) ;葡萄糖
标准品，无水乙醇，乙醚，丙酮，氢氧化钠，盐酸，3，5
－二硝基水杨酸，蒸馏水，试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 多糖的提取［2］
将菥蓂子粉碎成粉末，取 50g。用 300ml石油醚
* 收稿日期: 2013 － 01 － 29
作者简介: 包志华(1963 －) ，女，副教授，主要从事食品、药品检测技术的研究．
* 通讯作者: E － mail:haimade@ aliyun． com
60℃提取 3 次，每次 0． 5h，过滤，石油醚回收。滤渣
烘干溶媒，用 300ml 70%乙醇 80℃提取 3 次，每次
2h，过滤。滤渣烘干乙醇，加 300ml蒸馏水 90℃提取
3 次，每次 1h，趁热过滤，合并滤液。滤液减压蒸馏
浓缩至 120ml。用 Sevage 法(氯仿:正丁醇 = 5:1 v /
v，料液 1:1，静置 25min 振摇 30min，离心)除去蛋白
质成分后，加 95%的乙醇使含醇量达到 80%，冰箱
过夜，过滤。干燥得棕色粉末状菥蓂子总糖，称重，
得到 0． 8095g。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 供试品溶液的制备［2］ 精确称取 2 份总糖
粉末 0． 0509g 0． 0512g，分别置于三角瓶中。1 号加
入 10ml 6mol /L 盐酸和 15ml 蒸馏水，置沸水浴中加
热 30min，取出，冷去至室温，加酚酞指示剂 1 滴，用
10%NaOH 溶液中和至溶液显微红色，再定容至
100ml容量瓶中，摇匀，作为总糖供试液。2 号加少
量蒸馏水溶解，加酚酞指示剂 1 滴，用 10% NaOH 溶
液中和至溶液显微红色，再定容至 100ml 容量瓶中，
摇匀，作为单糖供试液。
2． 2． 2 对照品溶液的配制［3］ 精密称取在 105℃干
燥至恒重的的无水葡萄糖 0． 1058g，置于 100ml容量
瓶中，加蒸馏水溶解并定容，摇匀，得 1． 058mg /ml葡
萄糖对照液。
2． 2． 3 DNS试剂的制备［4］ 称取 DNS 6． 3g 溶于少
量水中，加入 2mol /L NaOH 溶液 262ml。再精密称
取 185g酒石酸钾钠，加到 500ml 蒸馏水中，水浴加
热。两溶液合并。再加 5g 结晶苯酚和 5g 亚硫酸
钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至 1000ml，贮于
棕色瓶中，贮存 7 天，备用。
2． 3 波长的选择
取葡萄糖标准液与 DNS 试剂反应，制作空白
液。在紫外分光光度仪上以每 10nm 测定一次吸光
度，测得在 540nm处吸光度最大。
2． 4 葡萄糖标准曲线的绘制［3］
取 7 支 25ml 容 量 瓶，按 表 1 分 别 加 入
1． 058mg /ml葡萄糖标准液，蒸馏水和 DNS 试剂，配
成不同浓度的葡萄糖反应液。
表 1 葡萄糖标准曲线的绘制(n = 6)
Tab． 1 Drawing of the glucose standard curve(n = 6)
管号 葡萄糖标准液(ml) 蒸馏水(ml) DNS(ml)
0 0 2． 0 1． 5
1 0． 2 1． 8 1． 5
2 0． 4 1． 6 1． 5
3 0． 6 1． 4 1． 5
4 0． 8 1． 2 1． 5
5 1． 0 1． 0 1． 5
6 1． 2 0． 8 1． 5
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热 5min，取出，
冷却至室温，用蒸馏水定容至 25ml，混匀，在分光光
度仪上进行比色。波长调至 540nm，用 0 号管调零，
测出 1 ～ 6 号管的吸光度。在 Excel 中作出标准曲
线，结果如表 2:
表 2 葡萄糖标准曲线的绘制结果(n = 6)
Tab． 2 The result of the glucose standard curve(n = 6)
管号 1 2 3 4 5 6
吸光度 0． 082 0． 195 0． 351 0． 420 0． 526 0． 654
葡萄糖标准液浓度(mg /ml) 0． 0085 0． 0169 0． 0254 0． 0338 0． 0423 0． 0508
2． 5 样品中多糖含量测定［5］
总糖单糖供试液分别各取 5 份，每份取 4ml 供
试液，并加入 1． 5mlDNS 试剂于 25ml 容量瓶中，摇
匀。再制作一空白液。所有试液在沸水浴中准确加
热 5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至 25ml，
混匀，在分光光度仪上进行比色［2005 年版《中华人
民共和国药典》(一部)附录 VA］。波长调至
540nm，调零，测出供试品液的吸光度。
总糖粉末中多(单)糖含量 =
试液中多(单)糖含量(mg)÷ 4 × 100
样品量(g)× 1000
结果:单糖供试液吸光度为 0，可看作总糖供试
液中都是多糖，不含单糖。总糖(多糖)吸光度:
0. 115，0. 122，0. 116，0. 113，0. 122(n = 5，ＲSD =
3. 54%) ，均值 = 0. 118，25ml 容量瓶中多糖浓度 =
0. 0106mg /ml，100ml 容量瓶中多糖供试品浓度 =
0. 0662mg /ml，多 糖 粉 末 中 多 糖 含 量:6. 62mg /
42 内 蒙 古 农 业 大 学 学 报 2013 年
0. 0509g = 13. 00%。
2． 6 精密度试验［6］
取同一组总糖(多糖)供试液如 2． 5 操作制作显
色试液，重复测得吸光度为 0. 113，0. 120，0. 115，
0. 113，0. 121。n = 5，ＲSD =3. 30%，说明仪器性能良
好，操作是精确的。
2． 7 稳定性试验［7］
取总糖供试液 4ml 一份，如 2． 5 操作制作显色
试液。2h内分别于 0h，0． 5h，1h，1． 5h，2h 处测吸光
度 A:0． 139，0. 138，0. 138，0. 137，0. 139。ＲSD =
0. 60%，n = 5。说明总糖供试液在 2h内是稳定的。
2． 8 重复性试验［8］
取同一批多糖粉末，按总糖供试液制备方法制
备，依法测定，测得总糖含量为 13． 21%，13． 04%，
12． 75%，12． 77%，12． 83%。n = 5，ＲSD = 1． 54% 。
说明本方法重复性好。
2． 9 加样回收率试验［9］
取同一批多糖粉末各 50mg，按总糖供试品溶液
制备方法制水解液 5 份，每份再分别加入 6． 23ml，
1． 058mg /ml葡萄糖标准液于 100ml容量瓶中，定容，
每瓶再取 2ml 加至 25ml 容量瓶中。按 2． 5 中样品
含量测定法测定其含量。结果如表 3:
表 3 样品加样回收试验结果(n = 5)
Tab． 3 The results of recovery test(n = 5)
编号
多糖粗品
(mg)
粗品含糖量
(mg)
加入葡萄糖量
(mg)
吸光度
测得含量
(mg)
回收率
(%)
回收率均值
(%)
ＲSD
(%)
1 50． 5 6． 565 6． 6 0． 115 13． 017 97． 90 100． 34 0． 93
2 50． 9 6． 617 6． 6 0． 118 13． 298 101． 38
3 49． 4 6． 422 6． 6 0． 116 13． 110 101． 49
4 51． 5 6． 695 6． 6 0． 117 13． 204 98． 77
5 50． 5 6． 565 6． 6 0． 118 13． 298 102． 17
3 讨论
一般选用苯酚 －硫酸法或硫酸蒽酮比色法进行
总糖测定，因总糖中包含多糖和单糖，不能准确的表
明其多糖含量。另外，硫酸有较强的腐蚀性，不便操
作。所以本试验采用 DNS 法以葡萄糖为对照品，通
过测定总糖和单糖以求出多糖的含量［10］。
Sevage法脱蛋白相比于三氯乙酸法脱蛋白效率
更高，反映更温和［11］。其它方法反应剧烈，能够引
起多糖成分降解，回收率较低，不宜大量应用。
参 考 文 献:
［1］ 中国科学院中国植物志编辑委员会． 中国植物志(33
卷)［M］．北京:科学出版社，80 － 81．
［2］ 王红英，钱斯日古楞，赵前程，等． 3，5 －二硝基水杨酸
比色法测定麦冬多糖含量［J］． 沈阳农业大学学报，
2005，36(5):628 － 630．
［3］ 蔡丽朋，惠秋沙． DNS法测定玉米须保健饮料中总多糖
含量［J］．齐鲁药事，2011，30(2):88 － 90．
［4］ 薛 丰，程 远，孙成均． 3，5 － 二硝基水杨酸光度法测定
甘薯中淀粉多糖［J］． 现代预防医学，2010，37(5):900
－ 902．
［5］ 章丽华，张利平，胡锦群，等． 3，5 －二硝基水杨酸比色
法测定红毛五加中多糖的含量［J］．中国中医药信息杂
志，2008，15(5):49 － 51．
［6］ 舒 馨，刘雄民，梁秋霞． 3，5 － 二硝基水杨酸吸光光度
法测定八角残渣中总糖、还原糖含量［J］． 食品工业科
技，2010，31(6):341 － 343．
［7］ 吴瑾瑾，朱雨晴，章德军，等． 3，5 －二硝基水杨酸比色
法测定猕猴桃根提取物中多糖［J］． 中草药，2010，41
(10):1649 － 1650．
［8］ 王华洋，耿东升．莲威阿那奇处方水提浸膏中总糖含量
测定［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(5):47 － 48．
［9］ 杨志刚．紫外分光光度法测定复方黄芪口服液中多糖
的含量［J］．中医药导报，2008，14(9):81 － 82．
［10］ 王丽娜，陈水钫，张 兵，等． 3，5 －二硝基水杨酸法测
定多糖含量的研究进展［J］． 吉林医药学院学报，
2009，30(4):232 － 234．
［11］ 郭 辉，李善玲，张红旭，等．红毛五加粗多糖脱蛋白工
艺比较［J］．现代中药研究与实践，2004，18(6):53 －
55．
52第 5 期 包志华等: DNS比色法测定菥蓂子中多糖的含量