全 文 ：　　第３３卷　第５期　 吉首大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．５　　
　　２０１２年９月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｓｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｓｅｐｔ．２０１２　　
文章编号：１００７－２９８５（２０１２）０５－００７８－０４
红檵木幼叶的水和醇水提取物抑菌活性分析
＊
赵虹桥，卢成瑛
（湖南省林产化工工程重点实验室，湖南 张家界　４２７０００）
摘　要：用蒸馏水和２０％乙醇经微波辅助处理提取红檵木幼叶成分，对该水和醇水的提取物进行浓缩或萃取精制，采
用牛津杯法测定水和醇水提取物样液对３种细菌的抑制效果，并用平板稀释法测定其最小抑菌浓度．幼叶水提取液对３种
细菌都有明显的抑制作用，抑菌圈较大，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌的最小抑菌生药质量浓度分别为０．０１４，
０．０１０，０．０１０ｇ／ｍＬ；幼叶的醇提取液对大肠杆菌的抑制效果不明显，对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌有较强抑制作用，其最
小抑菌生药质量浓度分别为０．０１１，０．０１４ｇ／ｍＬ．
关键词：红檵木；抑菌活性；最小抑菌生药浓度（ＭＩＣ）
中图分类号：Ｑ９４６．８；Ｒ２８４　　　　　　　文献标志码：Ａ　 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－２９８５．２０１２．０５．０２０
红檵木（Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ　ｖａｒ．ｒｕｂｒｕｍ）属金缕梅科檵木属白花檵木（Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｃｈｉｎｅｎｓｅ）的变种，为珍稀观赏园
林树种［１］．随着红檵木在园林绿化中的广泛应用，对红檵木的研究也越来越深入，从生理生化、组织培养、分类、进化、遗传育
种、遗传工程等方面均有报道［２］－３］．唐克华等 ［４－５］研究了红檵木花色素的生化特性和医药应用性能，确认了红檵木花色素具
有显著抑菌活性和一定抗氧化活性．红檵木叶色素的抗菌活性还未见报道，为此笔者对红檵木幼叶的水或醇水提取物及其
浓缩／萃取精制的样液进行了抑菌活性分析，为开发利用湖南省较丰富的红檵木资源提供了一定科学依据．
１　材料与方法
１．１材料、试剂、菌种与仪器
１．１．１材料　红檵木幼叶采于吉首大学校园内，幼叶为紫红色，鲜材料采摘后冷藏备用．
１．１．２试剂　蛋白胨（ＢＲ）、牛肉膏（ＢＲ）、琼脂（ＢＲ），其他均为国产ＡＲ试剂．
１．１．３菌种　痢疾杆菌（ｓｈｉｇｅｌａ　ｄｙｓｅｎｔｅｒｏａｅ），金黄色葡萄球菌（ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｌｕｓ　ａｕｒｅｕｓ），大肠杆菌（ｅｓｃｈｅｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ），以上菌
种均购于湖南省疾病预防控制中心．培养基选择牛肉膏蛋白胨培养基．
１．１．４仪器　旋转蒸发仪（ｙａｍａｔｏ　ＲＥ５４０）、格兰仕微波炉（Ｇａｌａｎｚ　ＷＤ７００Ａ型）、培养箱（ＦＤ－１）、高压蒸气灭菌锅（ＳＭ－５２）、
超净工作台（ＣＣＶ－１３１１）、１／万分天平（ＡＥＧ－２２０）．
１．２方法
１．２．１红檵木幼叶的水提取物样液制备　（１）水提取物的浓缩液制备．称取新鲜幼叶４０．００４ｇ，按照质量与体积之比为１∶
１５的比例加蒸馏水６００ｍＬ，使材料全部浸入水中，并于室温下搅拌浸提１ｈ，封上保鲜膜，再置微波炉于中档火力下处理３
ｍｉｎ，滤纸过滤，滤液用旋转蒸发仪减压浓缩至４０ｍＬ（条件为６０℃、０．０９ＭＰａ），使其生药质量浓度为１．０ｇ／ｍＬ．
（２）水提取物的萃取液制备．用正丁醇与无水乙醚按体积比为１∶４配制混合溶剂，取２０ｍＬ浓缩液按与混合溶剂体积
＊ 收稿日期：２０１２－０７－１５
基金项目：湖南省教育厅科学研究资助项目（Ｓ２００９Ｆ２０７２）
作者简介：赵虹桥（１９７２－），男，湖南张家界人，吉首大学张家界校区林产化工工程重点实验室副教授，主要从事植物
活性成分研究．
比为１∶１振荡萃取３０ｍｉｎ，重复萃取３次，得到色素萃取液．
（３）将水提取物的浓缩液和萃取液均取１．０ｍＬ，分别加入到干燥、洁净恒重的表面皿中，在６０℃烘箱中干燥至恒重，
称量得出其固形物净重分别为０．０６１，０．０５３ｇ，换算成红檵木幼叶的水提取物的浓缩液的固形物质量浓度是０．０６１ｇ／ｍＬ，
其萃取液的固形物质量浓度是０．０５３ｇ／ｍＬ．将红檵木幼叶的水提取物的浓缩液和萃取液分别配成６种浓度的供试样液，其
中浓缩液梯度稀释的固形物质量浓度为０．０６１，０．０５１，０．０４１，０．０３１，０．０２１，０．０１１ｇ／ｍＬ，而萃取液梯度稀释的固形物质量
浓度为０．０５３，０．０４８，０．０４３，０．０３８，０．０３３，０．０２８ｇ／ｍＬ，备用．
１．２．２红檵木幼叶的醇水提取物的样液制备　以２０％含水乙醇代替水，同红檵木幼叶的水提取物的样液制备方法相同，得
到红檵木幼叶的醇水提取物的浓缩液，其固形物质量浓度为０．０３６ｇ／ｍＬ，该浓缩液的萃取液固形物质量浓度为
０．０３２ｇ／ｍＬ．取红檵木幼叶醇提物的浓缩液稀释成质量浓度为０．０３６，０．０３１，０．０２６，０．０２１，０．０１６，０．０１１ｇ／ｍＬ的６组样
液，其萃取液则稀释成质量浓度为０．０３２，０．０２７，０．０２２，０．０１７，０．０１２，０．００７ｇ／ｍＬ的６组样液，备用．
１．２．３抑菌活性检测　在无菌条件下，向培养基表面滴加２～３滴菌悬液后，迅速涂布均匀，然后在培养皿内等距离放置４
个牛津杯，用移液管向每个牛津杯中准确加０．２ｍＬ供备用的红檵木幼叶提取物样液，置３７℃培养箱内保温培养，每隔１０
ｈ后观测并记录用游标卡尺测量的抑菌圈大小．每个样液浓度做６个平行，每个菌种做１个质量浓度为１０．０ｍｇ／Ｌ的诺氟
沙星溶液的抑菌参比．
１．２．４最小抑菌浓度（ＭＩＣ）测定　用平板稀释法［８］测定最小抑菌浓度．将红檵木叶色素水提浓缩液释成质量浓度为０．０１６，
０．０１４，０．０１２，０．０１０，０．００８，０．００６ｇ／ｍＬ的样液，醇水提浓缩液稀释成质量浓度为０．０２０，０．０１７，０．０１４，０．０１１，０．００８，０．００５
ｇ／ｍＬ的样液．用移液管向各培养基表面加入０．２ｍＬ菌悬液，用Ｌ形涂布棒涂布均匀，置３７℃恒温培养箱中培养２４ｈ，观
察菌落生长情况．
设蒸馏水为阴性对照，不加样液的培养试管作空白对照，０．１ｇ／Ｌ四环素作为测定的阳性对照．每个样液浓度作６个平
行，分无菌落生长、有少量菌落生长并有递减趋势、菌落长势旺盛３种情况统计取平均值．
２　实验结果与分析
２．１红檵木幼叶色素样液的抗菌效能
红檵木幼叶的水提物的浓缩液及萃取液对３种细菌的抑制活性测定结果见表１，２．红檵木幼叶的醇水提物的浓缩液及
萃取液对３种细菌的抑制活性测定结果见表４．
表１　幼叶水提物的浓缩液的抑菌活性
样液质量浓度
／（ｇ·ｍＬ－１）
金黄色葡萄球菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
大肠杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
痢疾杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
１．０００（０．０６１） １．５９８　 ０．６２３　 １．４５７　 ０．５２１　 １．５２８　 ０．５５２
０．８３６（０．０５１） １．５１２　 ０．５９２　 １．３８９　 ０．４９７　 １．４７５　 ０．５３３
０．６７２（０．０４１） １．４７０　 ０．５７６　 １．３１１　 ０．４６９　 １．４１３　 ０．５１１
０．５０８（０．０３１） １．４２３　 ０．５５８　 １．２５３　 ０．４４８　 １．３２０　 ０．４７７
０．３４４（０．０２１） １．３１２　 ０．５１４　 １．２１４　 ０．４３５　 １．２５４　 ０．４５３
０．１８０（０．０１１） １．２２５　 ０．４８０　 １．１５６　 ０．４１１　 １．１６８　 ０．４２２
　　　注　抑菌系数等于样液的抑菌圈直径除以诺氟沙星的抑菌圈直径［１２］；在样液浓度列中，每行的前一数据为生药浓度，加了括号的数
据为固形物浓度，以下各表格中的样液浓度列中的数据表述相同
表２　幼叶水提取物的萃取液抑菌活性
样液质量浓度
／（ｇ·ｍＬ－１）
金黄色葡萄球菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
大肠杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
痢疾杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
１．０００（０．０５３） １．４３１　 ０．５６０　 １．２６５　 ０．３５０　 １．３３８　 ０．４８４
０．９０６（０．０４８） １．３５８　 ０．５３２　 １．２１７　 ０．４６３　 １．２５０　 ０．４５２
０．８１１（０．０４３） １．２６３　 ０．４９５　 １．１５８　 ０．４１４　 １．１８０　 ０．４２９
０．７１７（０．０３８） １．１５３　 ０．４５２　 １．１２３　 ０．４０２　 １．１８８　 ０．４２６
０．６２３（０．０３３） １．０９５　 ０．４２９　 １．１０８　 ０．３９７　 １．１００　 ０．３９８
０．５２９（０．０２８） １．０２８　 ０．４０３　 １．０８３　 ０．３８８　 １．０９５　 ０．３９６
９７第５期　　　　　　　　　　　赵虹桥，等：红檵木幼叶的水和醇水提取物抑菌活性分析
表３　幼叶醇提浓缩液抑菌活性
样液质量浓度
／（ｇ·ｍＬ－１）
金黄色葡萄球菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
大肠杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
痢疾杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
１．０００（０．０３６） ２．３０００　 ０．９０１ － ０　 １．０５０　 ０．３７９
０．８６１（０．０３１） ２．１８８　 ０．８５７ － ０　 ０．９１０　 ０．３２９
０．７２２（０．０２６） ２．２２５　 ０．８７２ － ０　 ０．８４０　 ０．３０４
０．５８３（０．０２１） ２．０６０　 ０．８０７ － ０　 ０．７８０　 ０．２８２
０．４４４（０．０１６） ２．０３３　 ０．７９７ － ０　 ０．７００　 ０．２５３
０．３０６（０．０１１） １．７９２　 ０．７０２ － ０　 ０．６６３　 ０．２４０
　　　注　“－”表示无明显抑菌圈，下同
表４　幼叶醇提萃取液抑菌活性
样液质量浓度
／（ｇ·ｍＬ－１）
金黄色葡萄球菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
大肠杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
痢疾杆菌
抑菌圈直径／ｃｍ 抑菌系数
１．０００（０．０３２） １．５９６　 ０．６２５ － ０．００　 ０．９５７　 ０．３５１
０．８４４（０．０２７） １．１４５　 ０．４４９ － ０．００　 ０．８１２　 ０．２９３
０．６８７（０．０２２） ０．９６５　 ０．３７８ － ０．００　 ０．７３３　 ０．２６５
０．５３１（０．０１７） ０．７７６　 ０．３０４ － ０．００　 ０．６８８　 ０．２４９
０．３７５（０．０１２） ０．６６０　 ０．２５９ － ０．００ － ０．０００
０．２１９（０．００７） － ０．０００ － ０．００ － ０．０００
　　由表１，２结果可以看出：幼叶的水提物浓缩液和萃取液对供试验的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和痢疾杆菌均有较强抑制
作用，抑菌系数都较大，但样液的生药质量浓度大小接近时，幼叶的水提取物的萃取液比其浓缩液对同种细菌的抑菌效果略差
一些．由表３，４的结果可知：幼叶醇水提取物的浓缩液和萃取液对大肠杆菌的抑菌效果不明显，对痢疾杆菌和金黄色葡萄球菌
都有明显抑制作用，但当其浓缩液和萃取液的生药质量浓度分别低于０．２１９ｇ／ｍＬ和０．５３１ｇ／ｍＬ时，对这２种细菌几乎没有
抑菌效果了．生药浓度大小相近时，幼叶的醇水提取物的浓缩液比幼叶水提取物的浓缩液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要强
很多，而对痢疾杆菌的抑菌效果则要弱一些，醇水的提取物的萃取液的抑菌作用则比醇水的提取物的浓缩液和水的提取物的
萃取液对同种细菌的抑菌作用都弱．比较表１至表４数据可知：红檵木幼叶的醇水提取物的浓缩液和萃取液对大肠杆菌均无
抑菌作用，而红檵木幼叶的水提取物的浓缩液和萃取液在各个浓度梯度上都显示对大肠杆菌的抑菌作用，这反映因提取溶剂
的不同，提取物中可能存在抑菌活性成分种类或含量的明显差异．
２．２红檵木幼叶色素浓缩液的最小抑菌浓度
对幼叶的水和醇水提取物的浓缩液测定了其最小抑菌浓度，结果见表５，６．
表５　红檵木幼叶的水提取物及醇水提取物的最小抑菌生药浓度测定
菌种
幼叶的水提物的浓缩液生药
质量浓度／（ｇ·ｍＬ－１）
０．０１６　０．０１４　０．０１２　０．０１０　０．００８　０．００６
对照
阴性 空白 四环素
金黄色葡萄球菌 ― ― ― ― ＋＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
大肠杆菌 ― ― ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
痢疾杆菌 ― ― ― ― ＋＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
　　　注　“－”表示有抑菌圈；“＋”表示有菌落生长但有递减趋势；“＋＋”表示菌生长势很好，无抑菌作用，下同
表６　红檵木幼叶醇水提物的浓缩液的最小抑菌生药浓度
菌种
幼叶的水提物的浓缩液生药
质量浓度／（ｇ·ｍＬ－１）
０．０２０　０．０１７　０．０１４　０．０１１　０．００８　０．００５
对照
阴性 空白 四环素
金黄色葡萄球菌 ― ― ― ― ＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
大肠杆菌 ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
痢疾杆菌 ― ― ― ＋ ＋＋ ＋＋ ― ＋＋ ―
　　由表５数据可知：幼叶的水提取物的浓缩液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和痢疾杆菌的最小抑菌生药质量浓度分别是
０．０１０，０．０１４，０．０１０ｇ／ｍＬ．由表６看出，幼叶的醇水提物的浓缩液对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌的最小抑菌生药质量浓度
分别是０．０１１，０．０１４ｇ／ｍＬ，其对大肠杆菌抑制作用没有测出．
０８ 吉首大学学报（自然科学版） 第３３卷
３　结语
红檵木幼叶水的提取物的浓缩液和萃取液对３种细菌都有明显抑制效果，其中，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和痢疾杆
菌的最小抑菌生药质量浓度分别是０．０１４，０．０１０，０．０１０ｇ／ｍＬ．红檵木幼叶的醇水提物的浓缩液对金黄色葡萄球菌和痢疾
杆菌有较强的抑制作用，但对大肠杆菌没有明显抑制作用，其中，对金黄色葡萄球菌和痢疾杆菌的最小抑菌生药质量浓度分
别为０．０１１ｇ／ｍＬ和０．０１４ｇ／ｍＬ．
红檵木幼叶可作为一种抗菌消炎成份的原材料，其幼叶的水提取物和醇水的提取物，在外观颜色上看是红色素类，但其
他一些已报道的天然色素（如红曲色素和葡萄色素）的最小抑菌浓度比红檵木的这２类提取物的最小抑菌浓度要小，因此，
红檵木幼叶作为天然抑菌活性成分的制备原料是否具有一定开发利用前景，有待于深入研究．
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（ＭＩＣ） （责任编辑　易必武）
１８第５期　　　　　　　　　　　赵虹桥，等：红檵木幼叶的水和醇水提取物抑菌活性分析