全 文 ： ·1326· Chin J Mod Appl Pharm, 2014 November, Vol.31 No.11 中国现代应用药学 2014 年 11 月第 31 卷第 11 期
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收稿日期：2013-10-31



蜂斗菜不同提取物对豚鼠离体回肠收缩的影响

熊卫艳 1，金祖汉 2，毛培江 2，张如松 2，杨苏蓓 2*(1.浙江中医药大学药学院，杭州 310053；2.浙江中药研究所，杭州 310023)

摘要：目的 比较蜂斗菜不同提取物对豚鼠离体回肠收缩的影响。方法 采用豚鼠离体回肠实验，以组胺、乙酰胆碱不
同激动剂为研究模型，比较蜂斗菜 CO2 超临界提取物、80%乙醇提取物、80%乙醇提取物的不同极性提取物及乙酸乙酯
提取物经硅胶柱层析分离获得的不同馏分对豚鼠离体回肠的收缩作用，计算各个提取物对豚鼠回肠收缩幅度的抑制率。
结果 蜂斗菜不同提取物对组胺、乙酰胆碱所致的豚鼠离体回肠收缩有显著拮抗作用，其中乙酸乙酯提取物硅胶柱色谱
的馏分抑制作用最强。结论 蜂斗菜不同提取物均能抑制组胺、乙酰胆碱引起的豚鼠离体回肠收缩作用，脂溶性成分抑
制作用最强，其机制可能与 M、H1 受体的抑制有关。
关键词：蜂斗菜；豚鼠离体回肠；组胺；乙酰胆碱
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2014)11-1326-05
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2014.11.007

Effect of Different Extracts of Petasites Japonicus on the Contraction of Isolated Ileum of Guinea Pig

XIONG Weiyan1, JIN Zuhan2, MAO Peijiang2, ZHANG Rusong2, YANG Subei2*(1.College of Pharmaceutical
Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053, China; 2.Zhejiang Research Institute of Traditional Chinese
Medicine Co., Ltd., Hangzhou 310023, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To compare the effect of different extracts of Petasites japonicus on the contraction of isolated
ileum of guinea pig. METHODS By using isolated guinea pig ileum experiments, histamine, acetylcholine load model were
used as research models. Petasites japonicus was extracted by supercritical CO2 and 80% ethanol respectively. The 80% ethanol
extract was fracted by petroleum, ethyl acetate, n-butyl alcohol. The ethyl acetate extract was purified by silica gel column
chromatography. Inhibition ratio of the contraction extent was calculated. RESULTS Different extracts of Petasites japonicus
remarkably inhibited the contraction caused by histamine and acetylcholine. Ethyl acetate extract which was purified by silica gel
column chromatography had the strongest inhibitory effect. CONCLUSION The different extracts of Petasites japonicus
significantly inhibited the contraction of isolated ileum of guinea pig caused by histamine and acetylcholine. The effect of
Petasites japonicus on the contraction of isolated ileum of guinea pig was fat-soluble components and was highly relevant to M
ACh-receptors and H1 receptors.
KEY WORDS: Petasites japonicus; isolated guinea pig ileum; histamine; acetylcholine


作者简介：熊卫艳，女，硕士生 Tel: 18857114349 E-mail: 1065104801@qq.com *通信作者：杨苏蓓，女，硕士，教授级高级工
程师 Tel: (0571)85229722 E-mail: yangsp@mail.hz.zj.cn
蜂斗菜，别名蛇头草、水钟流头、黑南瓜、
野饭瓜、南瓜三七、野南瓜、野金瓜头、蜂斗叶、
网丝皮，为菊科蜂斗菜属植物蜂斗菜 Petasites
japonicus(Sieb. et Zucc.) Fr. Schmidt 的地上部分。
蜂斗菜主要分布于浙江、江西、安徽、福建、四
川、湖北、陕西，一般于夏、秋季采挖，可鲜用
或晒干。蜂斗菜性凉，味苦、辛，常用于健胃止
咳、润肺、消炎、毒蛇咬伤、痈疖肿毒、跌打损
伤等，其花蕾在甘肃等地作为款冬花的替代品用
于止咳、平喘。蜂斗菜中含有倍半萜类、三萜类、
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酚类、黄酮类、木脂素类、挥发油类、生物碱等
成分[1]，其中，倍半萜类化合物具有降低细胞内
Ca2+浓度、抗组胺、抑制白三烯合成的作用。近年
来研究发现，蜂斗菜具有抗过敏作用，这引起了
人们的广泛关注。蜂斗菜及紫蜂斗菜(P. hybridus)
的根部提取物可缓解喘息和花粉症[2]，其作用可能
与其抗Ⅰ型变态反应的活性有关。为了进一步探明
蜂斗菜抗过敏作用的物质基础以及抗过敏作用的
机制，本课题组对蜂斗菜不同提取物拮抗组胺、乙
酰胆碱引起的豚鼠离体回肠收缩作用进行了观察。
1 材料与方法
1.1 药材
蜂斗菜，产于浙江磐安，经浙江中药研究所
俞旭平教授级高级工程师鉴定为菊科蜂斗菜属植
物蜂斗菜 Petasites japonica(Sieb. et Zucc.) Fr.
Schmidt 的地上部分。
1.2 药品
组胺(上海伯奥生物技术有限公司，批号：
100108)；马来酸氯苯那敏注射液[上海现代哈森
(商丘)药业有限公司，批号：H41022116]；氯化乙
酰胆碱[西格玛奥里奇(上海)贸易有限公司，批号：
BCBK5708V]；硫酸阿托品注射液(上海恒远生物
科技有限公司，批号：100040)；聚氧乙烯蓖麻油
缩合物(运宏化工制剂辅料有限公司)；克-亨试液
(NaCl 6.92 g，KCl 0.35 g，MgSO4·7H2O 0.29 g，
KH2PO4 0.16 g，NaHCO3 2.1 g，CaCl2 0.28 g，葡
萄糖 2.0 g，用蒸馏水配成 1 000 mL 溶液)。
1.3 仪器
MD2000 Superlab 生物信号采集分析系统(江
苏生物医学工程学会医电研究所)；HA221-40-08
超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公
司)。
1.4 动物
豚鼠，清洁级，♀♂兼用，体质量(250±20)g，
合格证号：SCXK(苏)2009-0005，购于浙江省医学
科学院实验动物中心。
2 方法与结果
2.1 蜂斗菜不同提取物的制备
2.1.1 蜂斗菜 80%乙醇、石油醚、乙酸乙酯和正
丁醇提取物的制备 蜂斗菜粉碎，称取样品 1 kg，
用 80%乙醇回流提取 2 次，每次 1 h，趁热过滤，
合并滤液，回收溶剂至无醇味，得 80%乙醇提取
物(Petasites japonicus extracts，PJE)。
取部分 80%乙醇提取物，加水混悬，用石油
醚、乙酸乙酯，正丁醇分别萃取，回收溶剂，得
石油醚提取物(PJE-A)、乙酸乙酯提取物(PJE-B)和
正丁醇提取物(PJE-C)。
取部分 PJE-B，进行硅胶(100~200 目)柱色谱
分离，用二氯甲烷-甲醇(25∶1→20∶1→15∶1→
10∶1)和甲醇梯度洗脱，得到 5 个馏分：PJE-B-1、
PJE-B-2、PJE-B-3、PJE-B-4、PJE-B-5。
2.1.2 蜂斗菜 CO2 超临界提取物的制备 蜂斗菜
粗粉 500 g，置超临界萃取釜中，将 CO2 冷却后由
高压泵加压到预定压力，选择所要求的萃取条件
(萃取釜温度 45 ℃，分离釜温度 30 ℃，CO2 流速
42 kg·h1，压力 25 MPa，萃取时间 2 h)萃取，得到
淡黄色超临界提取物(Petasites japonicus supercritical
extract，PJS)。蜂斗菜各个提取物的得率，见表 1。
表 1 蜂斗菜不同提取物的得率
Tab. 1 The extract yielding rate of the Petasites japonicus
extracts
样品 浸膏得率/%
PJE 27.53
PJE-A 1.42
PJE-B 2.85
PJE-C 2.31
PJS 2.34
2.2 溶液的配制
2.2.1 样品溶液的配制 上述提取物分别加入蓖
麻油 1.7 g 和 0.3%吐温 80 适量，加入蒸馏水，研
磨，配制成乳液。PJE、PJS 配制成 1 mL 含生药
20.0 g 的样品溶液；PJE-A、PJE-B 和 PJE-C 配制
成 1 mL 含生药 5.0，10.0，20.0 g 的低、中、高剂
量的样品溶液；馏分 PJE-B-1、PJE-B-2、 PJE-B-3、
PJE-B-4、PJE-B-5 制成 1 mL 含生药 20.0 g 的样品
溶液，置 4 ℃冰箱备用。
2.2.2 空白对照溶液配制 取与样品溶液等量的
蓖麻油和 0.3%吐温 80，加入蒸馏水，配制成
0.067 g·mL1 空白对照溶液，置 4 ℃冰箱备用。
2.2.3 马来酸氯苯那敏溶液、组胺溶液、硫酸阿
托品溶液和乙酰胆碱溶液的配制 分别取组胺、
注射用马来酸氯苯那敏、注射用阿托品和乙酰胆
碱，用蒸馏水分别配制为浓度 0.06，0.05，0.5，
2 mg·mL1 溶液。
2.3 模型的建立
参考文献[3-5]方法，豚鼠禁食 12 h，饮水不
限，击后脑处死后，剖腹，在距回盲部 1 cm 处剪
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断，取出回肠约 10 cm 左右一段，放入预冷克-亨
试液中，沿肠壁除去肠系膜，用注射器向肠腔注
入克-亨试液冲洗，剪成 1.5~2 cm 的标本。将标本
浸置于(37±0.5)℃含 20 mL 克-亨试液的麦式浴槽
中，持续通氧气，一端固定于通气钩上，另一端连
接固定于肌张力换能器上并引至计算机接口，标本
初负荷 1 N，调整张力换能器及 MD2000Superlab
信号采集分析系统，记录回肠段自发收缩，待回
肠段收缩稳定后进行实验。
取正常回肠，如上述回肠标本制备，待回肠
收缩曲线稳定后，记录回肠自发收缩活动 5 min 的
平均张力，以此为正常对照组，分别加入激动剂
组胺或乙酰胆碱 20 μL，达最大收缩稳定后，记录
加入激动剂(组胺或乙酰胆碱)后 5 min 的平均张力
为模型组，正常回肠加入激动剂前后差异有统计
学意义(P<0.05)，表明模型制备成功，结果见表 2。
2.4 蜂斗菜不同提取物对豚鼠离体回肠收缩的影响
2.4.1 蜂斗菜不同提取物对组胺引起的豚鼠离体
回肠收缩的影响 实验分为空白对照组、马来酸
氯苯那敏组、PJE 组、PJE-A 低、中、高剂量组、
表 2 豚鼠回肠收缩张力变化(n=8, sx  )
Tab. 2 The change of the contraction of isolated ileum of
guinea pig(n=8, sx  )
组 别 收缩张力/N
正常对照组 1.01±0.06
组胺组 2.09±0.101)
乙酰胆碱组 2.21±0.251)
注：与正常对照组比较，1)P<0.05。
Note: Compared with normal control group, 1)P<0.05.
PJE-B 低、中、高剂量组、PJE-C 低、中、高剂量
组、PJS 组。取正常回肠，按“2.3”项下方法制
备标本，待回肠收缩稳定后，加入激动剂组胺
20 μL，达最大收缩稳定后，分别加入马来酸氯苯
那敏溶液 20 μL 及蜂斗菜不同提取物的样品溶液
20 μL，对照组加入组胺后给予等量的空白溶液，
观察并记录给药前后 5 min 的平均张力，求出抑制
率。抑制率=(给药前张力给药后张力)/给药前张
力×100%。
蜂斗菜不同提取物对组胺引起的豚鼠离体回
肠收缩曲线见图 1。

图 1 蜂斗菜不同提取物对组胺引起的豚鼠离体回肠收缩曲线
A空白对照组；B马来酸氯苯那敏组；CPJE 组；DPJS 组；EPJE-A 高剂量组；FPJE-B 高剂量组；GPJE-C 高剂量组。
Fig. 1 The contraction curve of isolated guinea pig ileum caused by histamine from the different extracts of Petasites japonicus
Anormal control group; Bchlortrimeton group; CPJE group; DPJS group; Ehigh-dose PJE-A group; Fhigh-dose PJE-B group; Ghigh-dose PJE-C
group.
采用 SPSS 16.0 软件处理，各组数据以 sx 
表示，样本比较采用 t 检验。结果见表 3。
2.4.2 蜂斗菜不同提取物对乙酰胆碱引起的豚鼠
离体回肠收缩的影响[6] 实验分为空白对照组、阿
托品组、PJE 组、PJE-A 低、中、高剂量组、PJE-B
低、中、高剂量组、PJE-C 低、中、高剂量组、PJS
组。取正常回肠，按“2.3”项下方法制备标本，
待回肠收缩稳定后，加入激动剂乙酰胆碱 20 μL，
达最大收缩稳定后，分别加入阿托品溶液 20 μL
及蜂斗菜不同提取物的样品溶液 20 μL，对照组加
入乙酰胆碱后给予等量的空白溶液，观察并记录
给药前后 5 min 的平均张力，求出抑制率。结果见
表 4。
2.4.3 PJE-B 硅胶色谱馏分对组胺和乙酰胆碱引
起的豚鼠离体回肠收缩的影响 实验分为空白对
照组、阳性药对照组(马来酸氯苯那敏或阿托品)、
馏分 PJE-B-1、 PJE-B-2、 PJE-B-3、 PJE-B-4、
PJE-B-5。取正常回肠，按“2.3”项下方法制备
中国现代应用药学 2014 年 11 月第 31 卷第 11 期 Chin J Mod Appl Pharm, 2014 November, Vol.31 No.11 ·1329·
表 3 蜂斗菜不同提取物对组胺引起的豚鼠离体回肠收缩
的影响(n=8, sx  )
Tab. 3 The effect of the different extracts of Petasites
japonicus on histamine-induced contraction of isolated
guinea pig ileum(n=8, sx  )
组 别
浴槽终浓
度/g·mL1
收缩张力/N
抑制率/%
给药前 给药后
空白对照组  2.09±0.24 2.08±0.15 
马来酸氯苯那敏组 0.06×106 2.14±0.31 0.72±0.22 66.35±0.101)
PJE 组 2.00×102 2.12±0.28 1.08±0.16 49.06±0.081)2)
PJE-A 低剂量组 5.00×103 2.09±0.35 1.58±0.22 24.40±0.031)
PJE-A 中剂量组 1.00×102 2.16±0.34 1.31±0.21 39.35±0.221)
PJE-A 高剂量组 2.00×102 2.21±0.17 1.11±0.12 49.77±0.081)2)
PJE-B 低剂量组 5.00×103 2.12±0.21 1.41±0.27 33.49±0.141)
PJE-B 中剂量组 1.00×102 2.07±0.23 1.06±0.25 48.79±0.111)2)
PJE-B 高剂量组 2.00×102 2.14±0.34 0.87±0.13 59.34±0.061)2)
PJE-C 低剂量组 5.00×103 2.09±0.14 1.63±0.25 22.01±0.201)
PJE-C 中剂量组 1.00×102 2.05±0.24 1.49±0.11 27.31±0.191)
PJE-C 高剂量组 2.00×102 2.08±0.36 1.31±0.25 37.02±0.111)
PJS 组 2.00×102 2.09±0.32 1.21±0.13 42.11±0.121)2)
注：与空白对照组相比，1)P<0.05；与马来酸氯苯那敏组相比，2)P>0.05。
Note: Compared with control group, 1)P<0.05; compared with chlortri-
meton group, 2)P>0.05.
表 4 蜂斗菜不同提取物对乙酰胆碱引起的豚鼠离体回肠
收缩的影响(n=8, sx  )
Tab. 4 The effect of the different extracts of Petasites
japonicus on acetylcholine-induced contraction of isolated
guinea pig ileum(n=8, sx  )
组 别
浴槽终浓
度/g·mL1
收缩张力/N
抑制率/%
给药前 给药后
空白对照组  2.10±0.17 2.08±0.20 
阿托品组 0.50×106 2.23±0.31 0.71±0.24 68.16±0.181)
PJE 组 2.00×102 2.19±0.28 1.10±0.19 49.77±0.211)2)
PJE-A 低剂量组 5.00×103 2.15±0.37 1.64±0.26 23.72±0.091)
PJE-A 中剂量组 1.00×102 2.22±0.25 1.34±0.19 39.64±0.131)
PJE-A 高剂量组 2.00×102 2.17±0.30 1.07±0.13 50.69±0.081)2)
PJE-B 低剂量组 5.00×103 2.20±0.27 1.49±0.21 32.27±0.151)
PJE-B 中剂量组 1.00×102 2.21±0.24 1.12±0.23 49.32±0.141)2)
PJE-B 高剂量组 2.00×102 2.19±0.35 0.86±0.17 60.73±0.261)2)
PJE-C 低剂量组 5.00×103 2.16±0.15 1.73±0.13 19.91±0.211)
PJE-C 中剂量组 1.00×102 2.27±0.28 1.65±0.12 27.31±0.161)
PJE-C 高剂量组 2.00×102 2.23±0.37 1.47±0.26 34.08±0.101)
PJS 组 2.00×102 2.18±0.31 1.22±0.16 44.04±0.081)2)
注：与空白对照组相比，1)P<0.05；与阿托品组相比，2)P>0.05。
Note: Compared with control group, 1)P<0.05; compared with atropine
group, 2)P>0.05.
标本，待回肠收缩稳定后，加入激动剂组胺或乙
酰胆碱 20 μL，达最大收缩稳定后，分别加入马来
酸氯苯那敏或阿托品溶液 20 μL 及 PJE-B 硅胶色
谱的不同馏分的样品溶液 20 μL，对照组加入激动
剂后给予等量的空白溶液，观察并记录给药前后
5 min 的平均张力，求出抑制率。结果见表 5。
表 5 PJE-B 硅胶色谱馏分抗组胺和乙酰胆碱作用(n=8,
sx  )
Tab. 5 The effect of components that PJE-B purified by
silica gel column chromatography on histamine and
acetylcholine induced contraction of isolated guinea pig
ileum(n=8, sx  )
组 别
浴槽终浓
度/g·mL1
抑制率/%
组胺 乙酰胆碱
空白对照组   
马来酸氯苯那敏组 0.06×106 66.38±0.151) 
阿托品组 0.50×106  68.18±0.151)
PJE-B-1 2.00×102 25.76±0.081) 27.33±0.271)
PJE-B-2 2.00×102 48.53±0.131)2) 50.25±0.171)2)
PJE-B-3 2.00×102 65.45±0.061)2) 66.30±0.261)2)
PJE-B-4 2.00×102 35.86±0.081) 38.28±0.261)
PJE-B-5 2.00×102 20.49±0.141) 23.15±0.261)
注：与空白对照组相比，1)P<0.05；与马来酸氯苯那敏或阿托品组相
比，2)P>0.05。
Note: Compared with control group, 1)P<0.05; compared with chlortri-
meton or atropine group, 2)P>0.05.
蜂斗菜不同提取物均可能拮抗组胺或乙酰胆
碱引起的豚鼠离体回肠收缩作用，与对照组相比
差异有统计学意义(P<0.05)；与马来酸氯苯那敏或
阿托品组相比，蜂斗菜 80%乙醇提取物、石油醚
高剂量组、乙酸乙酯中、高剂量组、超临界提取
物组差异无统计学意义；乙酸乙酯提取物经过硅
胶柱分离后的馏分对豚鼠离体回肠的抑制率得到
了进一步的提高，其中馏分 PJE-B-3 的抑制率与阳
性药等同。
3 讨论
在速发型变态反应中，肥大细胞、嗜碱性粒
细胞、肺细胞等发生脱颗粒，释放各种化学递质，
例如组胺、慢反应物质、白三烯 C4、D4 和嗜酸性
粒细胞趋化因子。组胺是一种自体活性物质，主
要在肥大细胞和血液中的嗜碱性粒细胞中产生。
对暴露的抗原反应中，产生 IgE 抗体，与肥大细胞
和嗜碱性粒细胞上的特异受体结合，触发胞内复
杂链锁反应，导致胞裂外排过程，释放组胺进入
组织。其后组胺与外周组胺 H1 受体结合，引起呼
吸道和胃肠道中速发浓度依赖的平滑肌收缩，血
管扩张和分泌液增多，在临床上产生哮喘、鼻炎、
鼻涕、红斑、瘙痒和荨麻疹等过敏症状[7]。乙酰胆
碱为胆碱能神经递质，有兴奋支气管及胃肠道平
滑肌的作用。豚鼠离体回肠收缩实验是筛选抗Ⅰ
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型变态反应性疾病药物的有效、简便手段之一。
过敏介质组胺及乙酰胆碱是引起回肠平滑肌收缩
及诱发变态反应的主要递质，而且乙酰胆碱、组
胺又为 M、H1 受体完全激动剂。
蜂斗菜在民间用于治疗扁桃体炎，毒蛇咬伤，
在临床实验中也用于治疗过敏性鼻炎。本实验结
果表明，蜂斗菜不同提取物有明显的阻断过敏介
质组胺的作用和拮抗乙酰胆碱兴奋豚鼠离体回肠
平滑肌的作用，说明蜂斗菜不同提取物具有较好
的抗过敏作用，且可能与 M、H1 受体的抑制有关。
其中乙酸乙酯提取物硅胶柱色谱的馏分 PJE-B-3
的抑制作用最强，表明蜂斗菜抗过敏作用的有效
成分主要是脂溶性成分。此研究为进一步筛选出
蜂斗菜抗过敏有效成分奠定了基础。
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收稿日期：2014-02-25



硝酸镓联合氧氟沙星抑制尿路致病性大肠杆菌生物膜形成

葛新，邢杰*(武警后勤学院病原生物与免疫学教研室，天津 300309)

摘要：目的 观察硝酸镓联合氧氟沙星对尿路致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli，UPEC)生物膜形成的抑制
作用。方法 采用结晶紫染色法检测 5 株 UPEC 生物膜形成过程，将 0.5×最低抑菌浓度(MIC)的硝酸镓和氧氟沙星单独
应用与联合使用，计算其对 UPEC 生物膜的抑制率。结果 2 种药物单独应用只能部分抑制生物膜形成，0.5×MIC 硝酸
镓(4.00 μg·mL1)和 0.5×MIC 氧氟沙星(0.25 μg·mL1)联合应用对细菌生物膜的抑制率为 94.46%~97.03%，明显强于 2 种药
物单独作用(P<0.01)。结论 硝酸镓联合氧氟沙星对 UPEC 生物膜形成有明显抑制作用，对尿路感染的防治具有进一步应
用价值。
关键词：大肠杆菌；生物膜；硝酸镓；氧氟沙星；尿路感染
中图分类号：R963 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2014)11-1330-04
DOI: 10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2014.11.008

Inhibition of Uropathogenic Escherichia Coli Biofilm by the Combination of Gallium Nitrate and
Ofloxacin

GE Xin, XING Jie*(Department of Pathogenic Biology and Immunology, Logistics College of Chinese People’s Armed Police
Force, Tianjin 300309, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To study the inhibitory effects of combination of gallium nitrate and ofloxacin on the biofilm
formation produced by five strains of uropathogenic Escherichia coli (UPEC). METHODS The crystal violet staining was

基金项目：武警后勤学院科研基金面上项目(WHM201202)
作者简介：葛新，男，博士，讲师 Tel: (022)84876726 E-mail: bigxer@163.com *通信作者：邢杰，男，硕士，副教授 Tel:
(022)84876725 E-mail: xingjie022@163.com