全 文 ：收稿日期:2002-08-29
作者简介:邹莉波(1959-), 女(汉族),吉林长春人 , 医学博士 , 教授 , 硕士生导师 , 主要从事神经精神药理学研究 ,
Tel:(024)23843711-3317 , E-mail:dlydd@mail.sy.ln.cn。
文章编号:1006-2858(2003)02-0128-04
祁州漏芦乙醇提取物对 D-半乳糖
所致衰老小鼠学习记忆的影响
邹莉波1 , 杜立阳2 , 董爱梅1 , 李　铣1
(1.沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016;　2.中国医科大学第一临床学院 , 辽宁 沈阳 110001)
摘要:目的 研究漏芦乙醇提取物对 D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响以及对脑组织中过氧
化脂质及脂褐质含量的影响。方法 采用一次性被动回避式条件反射的方法(跳台法及避暗法)测
定动物的学习记忆能力 ,用生化学方法测定脑组织过氧化脂质及脂褐质含量。结果 漏芦乙醇提取
物剂量依赖性地减少 D-半乳糖致衰老小鼠跳台及避暗错误反应次数并延长错误反应潜伏期;显
著减少衰老小鼠脑组织中过氧化脂质及脂褐质的含量。结论 实验结果提示漏芦乙醇提取物具有
抗衰益智作用。其改善记忆障碍作用可能与抗自由基过氧化 , 减少脑组织中过氧化脂质及脂褐质
生成有关。
关键词:漏芦乙醇提取物;学习记忆;D-半乳糖;衰老
中图分类号:R 971　　　文献标识码:A
　　祁州漏芦(Rhapont icum unif lorum (L.)
DC.)为菊科多年生草本植物 ,产于华北 、东北和
西北诸省区 ,药源丰富。早在《神农本草经》中就
有“下乳汁 , ……轻身益气 ,耳目聪明 、不老延年”
的记载。近年来的研究发现漏芦有提高细胞免疫
功能[ 1] 、抗动脉粥样硬化[ 2 , 3] 、抗自由基过氧化[ 4] 、
抗缺氧[ 5] 、抗炎[ 6] 及抗衰老[ 7] 等作用。本文采用
行为药理学及生化学的方法研究其对 D-半乳糖
所致衰老小鼠学习记忆的影响以及对脑组织中过
氧化脂质及脂褐质含量的影响 。
1　实验材料
1.1　动物
昆明种雄性小鼠 ,体重18 ～ 22 g;由本校动物
室提供。
1.2　药物和试剂
祁州漏芦购于沈阳市中医研究所 ,由本校天
然药化教研室以 φ=70%的乙醇提取;D-半乳糖
由上海试剂二厂生产;其他试剂皆为市售试剂 。
2　实验方法
2.1　衰老小鼠模型的制备[ 8]
取小鼠 120只 ,雌雄各半 ,随机分成 7 组 ,分
别灌服漏芦乙 醇提取物 0.39 、 0.78 、1.56 、
3.125 g (kg·d)-1 、脑复康 0.2 g kg 及同容积蒸
馏水。除空白对照组外 ,给药组和模型组小鼠每
天皮下注射50 g L D-半乳糖0.5 mL 只 , 连续
40 d ,造成小鼠衰老模型 。第 40 d做各项指标检
测。
2.2　跳台法[ 9]
实验开始前将动物置于实验室适应环境 1 h。
实验开始时 ,将动物放在跳台装置的安全台上 ,适
应环境3 min ,然后通以 36 V 电流 ,动物跳至铜栅
时即受到电击 ,为错误反应 ,其正确反应是跳回安
全区 ,如此训练 5 min 。24 h 后进行测验。测验
时先将跳台装置通以36 V电流 ,然后将动物放在
安全台上 ,记录 3 min内的错误次数 。
2.3　避暗法[ 9]
实验装置为为 30 cm×10 cm×11 cm 的被动
回避式条件反射箱 ,分明暗两室 ,暗室底部有铜
栅 ,通 36 V 电流 ,明暗两室之间有一直径为 3 cm
的洞口 。实验时将小鼠头部背着洞口放入明室 ,
小鼠一进入暗室即受到电击 ,为错误反应 。记录
5 min 内小鼠进入暗室的潜伏期及错误反应次
数 ,24 h后进行测验 。
2.4　脑组织过氧化脂质及脂褐质含量的测定
行为学实验结束后 ,迅速取脑 ,制成匀浆 ,参
照文献方法[ 10] 测定脑组织过氧化脂质及脂褐质
第 20 卷 第 2 期
2 0 0 3 年 3 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.20 　No.2
Mar.2003 p.128
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2003.02.015
的含量。
3　实验结果
3.1　对5% D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆的影
响
如表 1 、表 2所示 ,模型组小鼠测验期跳台及
避暗错误次数较空白对照组显著增加 ,漏芦乙醇
提取物剂量依赖性地减少 D-半乳糖致衰老小鼠
跳台及避暗错误反应次数并延长错误反应潜伏
期。
Table 1　The effects of the alcohol extract of Rhaponticum unif lorum(L.)DC.(AER)on learning and memory in
senescent mice induced by 50 g L D-galactose(step-down test)
Group
Dose
Drug [ g·(kg·d)-1] D-galactose(mL·mouse-1) No
No of errors
( x±sd)
Control — — 26 0.69±0.95
Model — 0.5 34 1.68±1.25 ■■
Naofukang 0.2 0.5 13 1.15±1.40
AER 3.125 0.5 26 0.92±0.73 ＊＊
1.56 0.5 27 0.78±0.79 ＊＊＊
0.78 0.5 29 0.97±0.67 ＊＊
0.39 0.5 14 1.07±0.99
　　■■P<0.01 compared with control group;＊＊P <0.01 , ＊＊＊ P<0.001 compared with model control group
Table 2　The effects of the alcohol extract of Rhaponticum uniflorum(L.)DC.(AER)on learning and memory in senescent
mice induced by 50 g L D-galactose(step-through test)
Group
Dose
Drug [ g·(kg·d)-1] D-galactose(mL·mouse-1) No
No of errors
( x ±sd)
Latency(s)
( x±sd)
Control — — 25 0.52±0.87 241.6±97.90
Model — 0.5 34 1.21±1.08 ■■■ 192.2±102.10
Naofukang 0.2 0.5 13 1.15±1.41 267.8±52.58＊＊
AER 3.125 0.5 28 0.57±0.90 ＊＊ 257.4±68.05＊＊＊
1.56 0.5 29 0.48±0.62 ＊＊＊ 239.6±85.62
0.78 0.5 28 0.57±0.84 ＊＊ 271.5±43.04＊＊＊
0.39 0.5 14 1.00±1.04 201.1±96.05
　　■■P<0.01 compared with control group;＊＊P<0.02 , ＊＊＊ P<0.01 compared with model control group
3.2　对 50 g L D-半乳糖致衰老小鼠过氧化脂质
生成的影响
如表 3所示 ,模型组小鼠脑组织过氧化脂质
含量较空白对照组显著增加 ,漏芦乙醇提取物剂
量依赖性地减少 D-半乳糖致衰老小鼠脑组织过
氧化脂质的含量。
Table 3　The effects of the alcohol extract of Rhaponticum unif lorum(L.)DC.(AER)on generation of lipid peroxi-
dation(LPO)in senescent mice induced by 50 g L D-galactose
Group
Dose
Drug [ g·(kg·d)-1] D-galactose(mL·mouse-1) No
LPO(nm·g-1 wet brain)
( x±sd)
Control — — 11 0.045 8±0.011 8
Model — 0.5 16 0.067 7±0.021 0■■
Naofukang 0.2 0.5 13 0.061 8±0.021 0
AER 3.125 0.5 12 0.046 8±0.028 35 ＊
1.56 0.5 14 0.030 4±0.010 6＊＊
0.78 0.5 10 0.038 3±0.016 9＊＊
0.39 0.5 13 0.079 0±0.045 0
　　■■P<0.01 compared with control group;＊P <0.05 , ＊＊ P<0.01 compared with modelcontrol group
129第 2 期 邹莉波等:祁州漏芦乙醇提取物对 D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响　　　
3.3　对 50 g L D-半乳糖致衰老小鼠脑组织脂褐
质生成的影响
如表 4所示 ,模型组小鼠脑组织脂褐质含量
较空白对照组显著增加 ,漏芦乙醇提取物剂量依
赖性地减少 D-半乳糖致衰老小鼠脑组织脂褐质
的含量。
Table 4　The effects of the alcohol extract of Rhaponticum unif lorum(L.)DC.(AER)on generation of lipofuscin
(LPF)in senescent mice induced by 50 g L D-galactose
Group
Dose
Drug [ g·(kg·d)-1] D-galactose(mL·mouse-1) No
LPF(μg·g -1 wet brain)
( x±sd)
Control — — 11 0.0201±1.72×10-3
Model — 0.5 17 0.0230±2.70×10-3■■
Naofukang 0.2 0.5 13 0.0230±9.50×10-3
AER 3.125 0.5 13 0.0124±2.21×10-3＊＊
1.56 0.5 13 0.0201±5.45×10-3＊
0.78 0.5 15 0.0235±8.92×10-3
0.39 0.5 13 0.0217±2.61×10-3
　　■■P<0.01 compared with control group;＊P <0.05 , ＊＊ P<0.01 compared withmodel control group
4　讨论
随着人口的老龄化老年性痴呆的发病率呈上
升趋势 ,记忆障碍是其主要表现之一 。人到老年
也会产生记忆力减退。有文献报道 , D-半乳糖可
造成亚急性衰老模型 ,表现为记忆障碍 、SOD活
性降低 、脂褐质含量增多[ 4] 。本实验结果与文献
相符。另有文献报道 ,脂质过氧化与衰老密切相
关[ 8] ,脂质过氧化所造成的损害包括学习记忆障
碍 ,而漏芦能抑制脂质过氧化 ,这可能与改善亚急
性衰老模型小鼠的记忆障碍有关。我们过去的研
究曾证明漏芦能够改善东莨菪碱所致的记忆障
碍 ,增强中枢 M 受体兴奋剂氧化震颤素的作用 ,
抑制脑组织中胆碱酯酶的活性 ,提示其改善记忆
作用与增强中枢胆碱能神经系统功能有关。此
外 ,其对缺血缺氧状态下的脑细胞具有保护作用。
由此提示 ,漏芦改善记忆的作用是通过多种机制
实现的。
参考文献:
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[ 4 ] 傅乃武 ,黄磊 , 燕利学 , 等.漏芦对抗血卟啉衍生物
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[ 6 ] 邹莉波 ,于庆海 ,李莹.祁州漏芦乙醇提取物抗炎作
用的实验研究 [ J] .中药药理与临床 , 1993 ,(6):30
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[ M] .北京:人民卫生出版社 , 1979.268-268.
130 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 20卷
Effects of the alcohol extract of Rhaponticum uni-
f lorum(L.)DC.on learning and memory in the se-
nescent mice induced by D-galactose
ZOU Li-bo1 , DU Li-yang2 , DONG Ai-mei1 , LI Xian1
(1.School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 　110016 , China;　2.The
First Clinical College , China Medical University , Shenyang　110001 , China)
Abstract:Objective To study the ef fects of the alcohol ex tract of Rhaponticum uni f lorum(L .)DC.(AER)
on learning and memory in the senescent mice induced by D-galactose and the ef fects on the lipoperoxides
and lipofuscin content in the brain.Methods In order to study these effects , we used the methods of one tri-
al passive avoidance response (step down test and step through test)and the methods of biochemist ry .Re-
sults These results show that the AER might reduce the times of errors and prolong the latency of errors in
senescent mice induced by D-galactose in the step down test and step through test , which are dose depen-
dent.It can also markedly reduce the lipoperoxides and lipofuscin content in the brains of the senescent
mice.Conclusions These results indicate that the AER has the effects of antisenescence and improving intel-
ligence.The ef fect might be related wi th it s activi ty of inhibiting the peroxidation of free radicals and reduc-
ing the fo rmation of lipoperoxides and lipofuscin content in the brain.
Key words:Rhaponticum uni f lorum(L.)DC.alcohol ext ract;learning and memory;D-galactose;senes-
cence
(上接第 122页)
Studies on the quality evaluation of the fruits , skin
and their extracts of Silybum marianum (L.)
Gaertn.
YUAN Dan
1 , ZHANG Guo-feng2 , WANG Rui-jie2
(1.School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical Universi ty , Shenyang 　
110016 , China;　2.Shenyang Dongyu Industrial Technology Inst itute , Shenyang 　110004 , China)
Abstract:Objective To establish the general evaluation of the quality of Silybum marianum (L.)Gaertn.
and its ex tracts f rom its f ruits , skin and ex tracts.Methods The contents of silymarin were detected at
287 nm by the UV method.In the analysis of silybin by the HPLC method , using the ODS reversed-phase
column of Hypersil C18(4.6 mm×250 mm , 5μm), the mobile phase w as a combination of methanol , aceto-
nitrile and ammonium dihydrophosphate in the volume ration of 24∶24∶50 at the pH value of 5 at the flow-
rate of 1.0 mL min , and the eluate w as monito red with UV absorption at 287 nm.Results The linear ranges
of silymarin are 8.04 ～ 40.2 μmol L with the r=1.000 and the recovery is 98.5%in the UV determina-
tion ,while those of the silybin are 0.276 ～ 1.38μg w ith the r=0.999 7 and the recovery is 97.3% in the
HPLC determinat ion.The contents of silymarin and silybin in the f ruits or peel of Si lybum marianum
(L.)Gaertn.collected in Suihua ,Heilong jiang Province , are 3.88% and 1.32% or 8.01% and 2.77%, re-
spectively.Although the contents of silymarin in the three commercial samples of its ext racts are all more
than 80%, but there are clear dif ferences in the silybin contents.Conclusions The combination of both
methods may be helpful to the quality control of S ilybum marianum (L.)Gaertn.and its ex tracts.
Key words:silymarin;silybin;Si lybum marianum (L .)Gaertn.;Si lybum marianum (L .)Gaertn.ex-
tracts ;HPLC;UV
131第 2 期 邹莉波等:祁州漏芦乙醇提取物对 D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响