全 文 ：珠子参多糖对 D -半乳糖致衰老小鼠学习记忆障碍的保护作用
胡 卫1 陈 涛1 王 泉 詹 玲 巩仔鹏 余雪琴 钱京萍1
(三峡大学医学院，湖北 宜昌 443002)
〔摘 要〕 目的 研究珠子参多糖对 D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠学习记忆能力的保护作用及其作用机制。方法 采用 D-gal 诱导小鼠衰老
模型，Morris水迷宫法测定衰老小鼠学习记忆能力，检测小鼠肝脏和脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及肝组织总抗氧化能
力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活性。结果 珠子参多糖(50、100 mg /kg)能明显缩短 Morris水迷宫实验逃避潜伏期和第 1 次到达原平台时间，增加
穿越原平台次数和逗留时间;能显著增加组织中 T-AOC、SOD、CAT活性并降低 MDA含量。结论 珠子参多糖可显著改善 D-gal 致衰老小鼠学习记
忆能力，其机制可能与其提高组织抗氧化和清除自由基能力有关。
〔关键词〕 珠子参;多糖;衰老;学习记忆;抗氧化
〔中图分类号〕 Ｒ285. 5 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2015)13-3522-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2015. 13. 014
基金项目:湖北省自然科学基金资助项目(No． 2006ABA200)
1 国家中医药管理局中药药理三级实验室
通讯作者:陈 涛(1962-)，男，博士，教授，硕士生导师，主要从事肿瘤
及老年性疾病基础与临床研究。
第一作者:胡 卫(1977-)，女，博士，副教授，硕士生导师，主要从事抗
肿瘤及抗衰老中药的筛选和机制研究。
珠 子 参 为 五 加 科 植 物 珠 子 参〔Panax japonicus
C. A. Mey. var. major(Buck. )C. Y. Wu et K. M. Feng〕或羽叶三
七〔Panax japonicus C. A. Mey. var bipinnatifidus (Seem. )
C. Y. Wu et K. M. Feng〕的干燥根茎，具有活血散瘀，补血止血，
消肿止痛之功〔1〕。现代药理学研究显示珠子参对血液及造血
系统、免疫系统、肿瘤、心血管系统等均有一定的作用〔2〕。目前
尚未见到珠子参抗衰老的相关报道，而同属人参、竹节参提取
物能直接清除自由基，提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢
酶(CAT)等抗氧化酶的活性及降低丙二醛(MDA)含量，发挥抗
衰老作用〔3，4〕。本研究观察珠子参多糖对 D-半乳糖(D-gal)致
衰老模型小鼠学习记忆能力的改善作用，从学习记忆能力、清
除氧自由基能力等方面探寻其可能机制。
1 材料与方法
1. 1 药品 珠子参购自宜昌市中医医院药房，经三峡大学湖
北省天然产物研究与利用重点实验室汪鋆植教授鉴定。香菇
菌多糖片(100 mg /片)为武汉迪奥药业有限公司产品，批号:
20110701。
1. 2 动物 SPF 昆明鼠，雌性，体重(20 ± 2)g，购自湖北省实
验动物中心，许可证号:SCXK(鄂)2008-0005。动物饲养于三
峡大学实验动物中心，室温(22 ± 2)℃，湿度(60 ± 5)%，喂标
准颗粒饲料，自由饮水和摄食。
1. 3 仪器与试剂 MT-200 Morris 水迷宫视频跟踪分析系统
(成都泰盟科技有限公司);752 紫外可见分光光度计(上海精
密科学仪器有限公司);光学显微镜(广州光学仪器厂);离心
机(北京医用离心机厂);D-gal(国药集团化学试剂有限公司，
批号:F20080429);MDA、SOD、总抗氧化能力(T-AOC)、CAT和
蛋白定量试剂盒(南京建成生物工程研究所);其余试剂均为市
售分析纯。
1. 4 衰老模型的建立 在借鉴秦红兵等〔5〕造模方法基础上，
进行必要的改进。实验小鼠颈背部皮下注射 D-gal 溶液
(150 mg /kg，使用前用生理盐水配成溶液)，空白对照组则皮下
给予相同体积的生理盐水，每日 1 次，连续 6 w。
1. 5 珠子参多糖的制备 珠子参根茎购买鉴定后，采用水提
醇沉法提取珠子参粗多糖〔6〕，提取后的粗多糖保持干燥，使用
前配置成 50、100 mg /kg 2 个剂量。
1. 6 动物分组及给药 将 50只小鼠采用完全随机设计分组法
分为 5组，即空白对照组(对照组)、D-gal 致衰老模型组(模型
组)、香菇多糖对照组(阳性组)、珠子参多糖低、高剂量组(珠子
参 DD组、珠子参 DG组)，每组 10只。珠子参多糖低、高剂量组
给药剂量分别为 50、100 mg /kg;阳性组香菇多糖给药剂量为
100 mg /kg;对照组和模型组灌胃给予同等体积蒸馏水，每日
1次。造模同时给药，连续 42 d，灌胃前 2 h小鼠禁水禁食。
1. 7 小鼠 Morris水迷宫测试学习记忆能力实验 Morris 水迷
宫是测量啮齿类动物空间学习记忆能力的经典方法〔7〕。仪器
主要由一直径为 120 cm、高 50 cm的圆形水池和一可移动位置
的平台组成，水池上空通过一摄像机与监视器和计算机连接。
水池里水温控制在(22 ± 0. 5)℃，平台、水、池壁均染成黑色以
隐蔽平台，水中不能明显见到安全平台。水池等分为 4 个象
限，将平台放在第三象限中间，在其他 3 个象限任选一点面向
水池池壁将小鼠放入水中。实验过程中水池及周围环境保持
不变。当设定的训练时间已到或小鼠已爬到平台，计算机停止
跟踪并记录下游泳轨迹和自动计算出小鼠在水池中所游过的
路程、时间及找到平台所需的时间(即潜伏期)等。试验第 6 周
测试，分别进行定位航行实验和空间搜索实验。
1. 7. 1 定位航行实验 用于测量小鼠对水迷宫学习和记忆的
能力。实验历时 5 d，每天分上、下午两段，每段训练 2 次，每次
2 min。每天训练时将小鼠面向池壁，分别从 4 个不同的入水点
放入水中，记录 2 min内寻找平台所需时间(逃避潜伏期)。若
小鼠入水后 2 min内未能找到平台，则将其置于平台上并停留
10 s再放入水中，引导学习记忆。
1. 7. 2 空间搜索实验 用于测量小鼠对平台空间位置记忆的
·2253· 中国老年学杂志 2015 年 7 月第 35 卷
能力。定位航行实验后第 2 天实验。实验时撤去平台，然后任
选一个入水点将小鼠面向池壁放入水中，记录每只小鼠在
2 min内第一次经过原平台的时间(潜伏期) ，每只小鼠在2 min
内经过平台的次数以及在原平台所在象限内逗留的时间。
1. 8 样本处理和指标检测 组织匀浆制备:学习记忆能力测
试实验结束 24 h后，将小鼠颈椎脱臼位处死，迅速取其肝脏和
脑组织，剔去结缔组织、称量、匀浆器研磨后加预冷的生理盐水
制备成 10%的组织匀浆。3 000 r /min离心 10 min，取其上清液
进行相关指标检测。分别测定肝组织和脑组织的 MDA含量和
SOD活性，以及肝组织 T-AOC、CAT活性。
1. 9 统计学方法 计量资料以 x ± s 表示，采用 SPSS13. 0 软
件，单因素方差分析进行多组间差异的比较。
2 结 果
2. 1 珠子参多糖对 D-gal 致衰老小鼠一般状态影响 对照组
小鼠行动活跃，反应敏捷，毛色光滑，食量、饮水均正常;与之相
比，模型组小鼠毛发干枯、无光泽，行动迟缓、自主活动明显降
低，食量、饮水略有减少;阳性组和珠子参多糖组小鼠各状态均
有明显改善。
2. 2 珠子参多糖对 D-gal致衰老小鼠学习记忆能力的影响
2. 2. 1 定位航行实验 随着学习时间的延长，在 5 d 训练期
间，各组小鼠逃避潜伏期随着训练天数的增加而不断缩短，表
明各组小鼠通过训练对于寻找平台均有一定的学习记忆能力，
但表现出了一定的差别。训练的第 1 天，各组小鼠的平均逃避
潜伏期无统计学差异。从第 2 天开始，模型组的平均逃避潜伏
期虽有所降低，但与对照组相比明显延长(P ＜ 0. 05)。而珠子
参多糖组与模型组相比平均逃避潜伏期缩短，并且随着时间的
延长，差异的显著性越来越明显，尤以珠子参 DG 组更为显著
(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)。模型组潜伏期在 5 d 内下降速度较慢，
其进步不明显，说明造模小鼠记忆能力受到明显损害，而香菇
多糖、珠子参多糖对衰老小鼠的记忆能力有一定的保护作用。
见表 1。
2. 2. 2 空间搜索实验 与对照组相比，模型组小鼠第 1 次达到
原平台的潜伏期延长，在原平台所在象限内逗留时间缩短，穿越
原平台次数减少(P ＜0. 05，P ＜0. 01)。而香菇多糖与珠子参 DG
组均能缩短第 1 次到达原平台的潜伏期，延长在原平台所在象
限内逗留时间，增加穿越原平台次数(P ＜0. 05)。见表 1。
2. 3 珠子参多糖对 D-gal 致衰老小鼠肝、脑组织 SOD 活性和
MDA含量的影响 与对照组相比，模型组肝和脑组织 SOD 活
性明显降低，MDA含量明显升高(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01) ;与模型
组比较，而珠子参 DG、DD量组小鼠肝脏和脑组织 SOD 活性明
显升高，MDA含量明显降低(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)。见表 2。
2. 4 珠子参多糖对 D-gal致衰老小鼠肝组织 T-AOC、CAT活性
的影响 与对照组相比，模型组肝组织 CAT 活性明显降低
(P ＜ 0. 05) ;而珠子参 DG、DD 组小鼠肝组织 T-AOC 活性明显
升高(P ＜ 0. 05) ，见表 2。
表 1 珠子参多糖对 D-gal致衰老小鼠学习记忆能力的影响(x ± s，n =10)
组别
Morris水迷宫法:平均逃避潜伏期(s)
第 1 天 第 2 天 第 3 天 第 4 天 第 5 天
穿越原平台
次数(次)
原平台所在象限
内逗留时间(s)
第一次到达原
平台时间(s)
对照组 62. 6 ± 7. 3 44. 5 ± 9. 1 26. 8 ± 5. 4 22. 2 ± 5. 3 16. 1 ± 4. 5 8. 5 ± 1. 3 54. 5 ± 6. 1 14. 1 ± 4. 5
模型组 70. 5 ± 9. 5 64. 9 ± 10. 71) 50. 8 ± 9. 42) 41. 8 ± 5. 91) 32. 3 ± 4. 41) 3. 6 ± 0. 92) 34. 9 ± 3. 61) 24. 3 ± 4. 42)
阳性组 63. 0 ± 5. 6 47. 8 ± 6. 83) 31. 5 ± 4. 84) 24. 3 ± 5. 23) 17. 9 ± 3. 03) 6. 5 ± 1. 13) 42. 5 ± 5. 7 20. 0 ± 3. 0
珠子参 DD组 64. 4 ± 7. 1 52. 0 ± 5. 3 37. 5 ± 4. 1 27. 5 ± 4. 3 21. 4 ± 3. 7 5. 3 ± 0. 8 45. 5 ± 4. 63 20. 4 ± 3. 7
珠子参 DG组 62. 7 ± 6. 6 46. 5 ± 8. 13) 30. 2 ± 5. 74) 25. 1 ± 5. 93) 18. 3 ± 3. 23) 7. 5 ± 1. 03) 38. 9. ± 3. 33) 18. 0 ± 2. 23)
与对照组比较:1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与模型组比较:3)P ＜ 0. 05，4)P ＜ 0. 01，下表同
表 2 珠子参多糖对 D-gal致衰老小鼠肝、脑组织 SOD活力和MDA含量、肝组织 T-AOC及 CAT活性的影响(x ± s，n =10)
组别
SOD活力(U /mgprot)
肝 脑
MDA含量(nmol /mgprot)
肝 脑
T-AOC(U /mgprot) CAT(U /mgprot)
对照组 100. 13 ± 10. 7 128. 09 ± 11. 8 1. 05 ± 0. 11 7. 06 ± 0. 09 1. 155 40. 79
模型组 78. 65 ± 8. 92) 118. 12 ± 10. 31) 1. 53 ± 0. 15 11. 51 ± 0. 581) 0. 814 22. 931)
阳性组 94. 87 ± 10. 53) 127. 09 ± 9. 8 0. 85 ± 0. 09 8. 09 ± 0. 34 1. 114 30. 68
珠子参 DD组 82. 98 ± 10. 0 130. 19 ± 9. 63) 0. 90 ± 0. 09 7. 36 ± 0. 193) 1. 4723) 28. 76
珠子参 DG组 95. 65 ± 12. 013) 126. 84 ± 9. 3 0. 67 ± 0. 054) 7. 66 ± 0. 213) 1. 3053) 28. 79
3 讨 论
D-gal衰老模型小鼠是研究药物抗衰老、改善学习记忆能力
的重要动物模型，因其具有造模时间短、操作简便、模型易于建
成、重复性好等特点，自 1991 年首次构建后便得到了广泛的运
用〔8〕。近年来，植物多糖的抗衰老作用引起越来越多的关注。
研究表明，红景天多糖、香菇多糖等均具有良好的抗氧化、改善
学习记忆的功能〔9 ～ 11〕。珠子参均为五加科人参属植物，含总皂
苷、多糖、挥发油和微量元素等多种成分，具有益气活血，补血
止血，消肿止痛之功。本课题组在前期珠子参抗肿瘤研究的过
程中发现，珠子参具有良好的诱导肿瘤细胞凋亡和延长荷瘤小
鼠生命、提高荷瘤小鼠免疫功能的功效〔12，13〕。传统衰老学说认
为:氧自由基与细胞凋亡和衰老密切相关，它通过参与细胞凋
亡对衰老进程产生影响，减少氧自由基的产生，有延缓衰老的
作用。因此我们进行了珠子参抗衰老的初步研究，并发现珠子
参多糖对 D-gal所致的衰老小鼠具有良好的抗氧化的作用，用
药组肝脏和脑组织中 SOD、T-AOC 活性较模型组有明显升高，
·3253·胡 卫等 珠子参多糖对 D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆障碍的保护作用 第 13 期
而 MDA含量显著降低;且 Morris 水迷宫实验显示实验组小鼠
学习记忆能力均有明显的提高;证实珠子参多糖具有确切的抗
衰老效果。后续拟进一步研究其对衰老小鼠线粒体端粒酶及
有关基因和蛋白表达的影响，以期更深入阐明其抗衰老的可能
机制。
4 参考文献
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时珍国医国药，2005;16(10) :封 3.
〔2013-11-08 修回〕
(编辑 赵慧玲 /曹梦园)
不同月龄大鼠阴茎海绵体内硫化氢含量与勃起功能的相关性
迟宝进 杜从林 李淑奎 桂士良 白海涛1 罗振国 张天宇2
(佳木斯大学附属第一医院泌尿外科，黑龙江 佳木斯 154002)
〔摘 要〕 目的 探讨增龄过程中大鼠阴茎海绵体内硫化氢(H2S)含量的变化规律以及与阴茎勃起功能之间的关系。方法 2、8、16 及 24 月
龄雄性 Wistar大鼠各 10 只为 4 组，在同一实验室的相同环境下给予相同饲料喂养 4 w，用 100 μg /kg的阿朴吗啡(APO)在每只大鼠的颈项背部行皮
下注射后记录 60 min内勃起次数。APO试验后第 2 日在 0V和 5V、2ms、25 Hz的电刺激下分别测定每只大鼠的阴茎海绵体内压(ICP)/平均动脉压
(MAP)。测压前分别划破每只大鼠的眼眶后静脉进行采血，离心后采用分光光度法测定血浆 H2S浓度。测压后截取各组大鼠阴茎海绵体组织以测
定阴茎组织 H2S含量和生成率。结果 随着月龄的增加，各组大鼠阴茎勃起次数减少，0V和 5V电刺激下 ICP /MAP 的平均比值逐渐降低，血浆 H2S
浓度和阴茎海绵体内 H2S含量与生成率均逐渐降低;阴茎海绵体内 H2S含量和相应的 0V或 5V电刺激下 ICP /MAP值之间均呈正相关。结论 随
着月龄的增长，大鼠阴茎勃起功能逐渐减弱，与此同时，阴茎海绵体内 H2S的含量逐步降低，这说明增龄中勃起功能障碍发生的原因之一可能是阴茎
海绵体内源性 H2S含量降低。
〔关键词〕 增龄;硫化氢;勃起功能障碍;阴茎海绵体
〔中图分类号〕 Ｒ698 + . 1 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2015)13-3524-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2015. 13. 015
基金项目:黑龙江省卫生厅科研课题(2013-229) ;黑龙江省教育厅科学
技术项目(12521542) ;佳木斯大学校级自然科学类青年项目
(Sq2013-025)
1 麻城市人民医院泌尿外科 2 绥化市人民医院泌尿外科
通讯作者:张天宇(1972-) ，男，硕士，副主任医师，主要从事勃起功能障
碍及前列腺癌研究。
第一作者:迟宝进(1981-) ，男，硕士，主治医师，主要从事泌尿外科及勃
起功能障碍研究。
增龄已被公认为是勃起功能障碍(ED)的高危因素〔1〕。在
阴茎勃起方面以往主要关注于一氧化氮(NO)和氧化碳(CO) ，
随着对勃起生理机制的深入研究发现硫化氢(H2S)在勃起过
程中也起着重要的作用，H2S 可以促使阴茎勃起功能改善且可
增加阴茎海绵体内 NO合酶(NOS)含量〔2〕，另外 Srilethine 等〔3〕
研究发现 H2S类似于 NO及 CO具有舒张阴茎海绵体血管最终
促使阴茎勃起作用。目前研究大多是检测血液 H2S 含量与勃
起功能的关系，本实验旨在探讨大鼠增龄对阴茎海绵体内 H2S
含量影响及其与阴茎勃起功能的相关性。
1 材料与方法
1． 1 研究对象及分组 于佳木斯大学动物实验中心随机选取
2、8、16 及 24 月龄健康雄性 Wistar大鼠各 10 只，同一组大鼠体
重相近，相差 30 g以内;根据月龄分为 A、B、C、D组。依次对每
只老鼠用记号笔编号标记，四组置于同一实验室的相同环境
中，温度为(22 ± 2)℃，湿度为(65 ± 5)%，均给予相同的普通
饲料和饮水喂养 4 w。
1. 2 主要仪器及试剂 阿扑吗啡(APO)产自美国 Sigma 公
司，紫外分光光度计购自上海光学仪器厂，多导生理信号采集
处理系统产自成都泰盟科技有限公司。
1. 3 大鼠勃起次数测定 整个实验过程在安静环境中进行，
·4253· 中国老年学杂志 2015 年 7 月第 35 卷