全 文 ：陈莉莉 , 等 :高效液相色谱法测定中药材漏芦中的蜕皮街酮
高效液相色谱法测定中药材漏芦中的蜕皮凿酮
陈莉莉 吴红权 帅 琴
(中国地质大学材料科学与化学工程学院 , 武汉 43 0 74 )
摘要 采用 Sh i m 一 P a e k C L C 一 O D S 色谱柱 ( 150 m m x 4 . 6 m m i . d . ) , 以甲醇 一 水 ( 40 : 6() ) 为流动相 , 用高效液相
色谱法在 24 8 n m 波长处测 定 了中药材漏芦中的蜕皮苗酮 。 该 法能很好地分离漏芦中的蜕皮 苗酮 ,蜕皮 苗酮 的线性
范围为 0 . 5 一 1 o m留 L , 相关系数 r 二 0 . 9 98 ,检出限为 0 . 05 2 m岁L , 平均回收率为 98 . 7 % 。 该 法提取分离蜕皮 苗酮
效果好 ,分析快速 , 结果准确 。
关键词 高效液相色谱法 测 定 漏芦 蜕皮苗酮
中药材漏芦为菊科多年生草本植物 , 临床上具
有清热解毒 、消痈肿 、下乳汁之功效 。 漏芦中含有街
酮类化合物 ,其中蜕皮街酮具有的药理活性与漏芦
的功效十分吻合川 。 目前人们对漏芦中活性成分
的研究还只是停留在对少量化合物的基础研究阶
段 〔’ 一 ` 〕 ,利用现代分析测试技术对其活性成分进行
分离分析的研究报道甚少 〔’ 〕 。 笔者探讨了漏芦中
蜕皮街酮的提取条件 , 建立了测定漏芦中蜕皮街酮
含量的高效液相色谱法 。
1 实验部分
1
.
1 主要仪器与试剂
高效液相色谱仪 : Lc 一 or A D 型 , 附带 s P D -
I OAV 型紫外 一 可见分光光度检测器 , C T O 一 10 A C
型柱温箱 , 日本岛津公司 ;
色谱数据处理机 : C 一 6R A 型 , 日本岛津公司 ;
中药材漏芦 :湖北省中医院 ;
蜕皮幽酮对照品 :北京医科大学 ;
蜕皮街酮对照品溶液 :准确称取 5 m g 蜕皮街酮
对照品于 5 m L 具塞刻度管中 ,用 甲醇溶解并稀释至
所需浓度 ;
氧化铝 :分析纯 ,粒度为 74 一 149 林m , 市售 , 于
20 ℃活化 Z h ;
甲醇 、 乙醇 :分析纯 ,市售 ;
水为二次蒸馏水 。
1
.
2 色谱条件
色谱柱 : S h i m 一 p a e k C L C 一 O DS 柱 ( 1 5 0 m m x
4
.
6 m m 1
.
d
.
) : 保护柱 : G 一 O D S 柱 ( 10 m m x 4 . 0
m m .1 d
.
) ;柱温 : 4 0℃ ;流动相 : 甲醇 一 水 (体积比为
4 0 : 6 0 )
, 流速为 1 . 0 m U m i n ;检测波长 : 2 4 8 n m ;记
录纸速度 : s m耐而 n 。
1
.
3 实验方法
样品溶液的制备及预分离 将中药材漏芦于
60 ℃干燥 4 h , 粉碎后过 17 卜m 筛 。 准确称取 2 9
漏芦粉末样品于 10 m L 圆底烧瓶中 ,加人 20 m L 甲
醇 , 于 65 ℃ 回流 Z h , 回流期间适当补充甲醇 。 过
滤 ,得提取液 。 重复提取一次 ,合并两次提取液 。 冷
却后用甲醇洗涤滤渣数次 ,滤液并人提取液中 ,得样
品溶液 。
蜕皮街酮的分离及测定 准确吸取一定量的样
品溶液于小烧杯中 ,蒸发至接近干燥 ,加人 0 . 5 9 氧
化铝 ,搅拌均匀 ,于 65 ℃挥发尽溶剂 ,装人一根预先
装填好的氧化铝柱 ( 10 m m x 8 m m 1. d . )的顶部 ,
用氯仿 一 甲醇 (体积比为 4 : l) 淋洗 , 收集淋洗液 50
m L
, 在 65 ℃挥发尽溶剂 , 准确加人 5 m L 甲醇 ,溶解
残留物 ,在 1 . 2 色谱条件下测定 。
2 结果与讨论
2
.
1 液相 色谱图
在实验条件下 ,对样品溶液和蜕皮留酮对照品
溶液进行测定 , 色谱图分别如图 1 、 图 2 所示 。
b a
0 4 8 12 16
t / m i
n
a一蜕皮田酮 ; b一未知物
图 1 漏芦样品溶液的液相色谱图
2
.
2 流动相
用不同配比的甲醇 一 水作流动相进行分离试
验 ,试验发现 , 当流动相中甲醇的体积分数从 0 . 60
逐 渐减小至 0 . 30 时 ,蜕皮 菌酮的保留时 间不断增
收稿 日期 : 2X() 1一 1 1一 09
化学分析计量 2) ( X 2年 , 第 1 1 卷 , 第 3 期
2
.
5 回收试验
准确吸取 10 m L 4 . 94 m留L 样品溶液 3 份 , 分
别精密加人不等量的蜕皮街酮对照品 ,测定蜕皮街
酮的含量 ,计算回收率和精密度 ,结果见表 1 。
表 1 加标回收试验结果 《n 二 3)
t / m i
n
~ 蜕皮街酮
图 2 蜕皮幽酮对照品的液相色谱图
加 ,相应的容量因子 k `从 0 . 67 增加到 7 . 5 。 选择体
积比为 4 0 : 60 的甲醇 一 水溶液作流动相 ,蜕皮街酮
的保留时间 t R 二 8 . 52 m in ,色谱峰峰形良好 。
2
.
3 线性方程
取蜕皮街酮对照品溶液 ,依次进样 2 、 5 、 10 、 15 、
20 林L ,记录色谱图 , 以色谱峰峰高 Y对浓度 X ( m岁
)L 进行回归 ,得回归方程为 : Y 二 3 . 1 8 + 3 87 . 39 x ,
相关系数 r 二 0 . 9 9 9 8 ,线性范围为 0 . 5 一 10 0 m g/ L 。
以 3 倍信噪比计算 ,检出限为 0 . 0 52 m岁 L 。
2
.
4 提取方法
称取同一批漏芦样品 2 9 ,分别采用下列方法进
行处理 :
溶剂回流提取 分别用水 、 甲醇 、 95 % 的乙醇为
溶剂 ,每种溶剂分别回流提取 2 、 4 、 6 ;h
超声提取 以甲醇为溶剂 ,分别超声提取 巧 、
3 0
、
4 5
、
6 0 m i n ;
冷浸提取 以 甲醇为溶剂 , 分别冷浸 12 、 24 、
3 6
、
4 8
、
7 2 h
。
提取液经过滤后浓缩 , 用甲醇定容至 50 m L 。
上述提取液经预处理后 ,按 1 . 2 色谱条件进行
测定 ,结果表明 ,超声提取法操作简便 , 提取时间短 ,
但蜕皮街酮提取率较低 ;冷浸提取法设备简单 ,成本
低 ,但提取不完全 , 时间长 ,效率低 ;而甲醇回流提取
法对蜕皮街酮的提取最完全 ,且所需设备简单 。 因
此 ,选用甲醇回流提取法对漏芦样品进行提取 。
本底值 / 加人量 / 测得量 / 回收率 / % R S D / %
m g
·
L
一 l m g
·
L
一 1 m g
·
L
一 l
4
.
9 4 3
.
5 0 8
.
6 0 10 5 1
.
06
4
.
9 4 7
.
0 1 1
.
38 9 2
.
0 0
.
8 6
4
.
94 10
.
5 0 15
.
35 9 9
.
1 0
.
9 3
2
.
6 样品测定
利用 甲醇回流提取法制备样品溶液 , 以标准加
入法测定不同批次的祈州漏芦中蜕皮菌酮 的含量 ,
测定结果见表 2 。 由表 2 可知 , 外标法与标准加人
法得到的结果具有良好的一致性 。
表 2 样品测定结果
样品 购人时间 来源 含量 / %
外标法 标准加人法
1# 19 9 7 年 4 月 湖北省中医院 0 . 06 3 0 . 06 8
2 # 19 9 7 年 5 月 湖北省中医院 0 . 0 7 8 0 . 07 0
3# 19 9 7 年 5 月 湖北省中医研究所 0 . 0 5 9 0 . 0 6 0
4 # 19 9 7 年 6 月 湖北省中医院 0 . 11 5 0 . 1 10
3 结论
采用甲醇回流提取法 , 以甲醇 一 水为流动相 ,有
效地分离并测定了漏芦中活性成分蜕皮街酮 的含
量 ,为漏芦的开发利用提供了依据 。
参 考 文 献
1 徐南杰 , 等 . 蜕皮幽酮的药理作用研究进展 . 沈阳药科大学学报 ,
19 9 7
,
14 ( 4 )
: 30()
2 曹燕丽 , 等 . 漏芦的研究概况 . 北京中医学院学报 , 19 93 , 16 ( 5 ) :
5 6
3 刘明生 ,等 . 祈州漏芦挥发油的研究 . 中国药物化学杂志 , 19 9 3 , 3
( 3 )
: 19 7
4 果德安 , 等 . 祈州漏芦脂溶性化学成分研究 . 中草药 , 1992 , 23
( 4 )
: 17 8
5 G u o D A
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Se p a rat i
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