全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(6)∶700 ～ 702
2 讨论
由于酚酸类物质受热不稳定［6］，苍耳子在炒制
过程中酚酸类成分易发生分解、转化或破坏，如炒焦
样品中绿原酸和 1，5 －二咖啡酰奎宁酸的含量显著
降低，新绿原酸和隐绿原酸的含量却显著增加，总酚
酸的含量亦明显降低。苍耳子炒制后其 HPLC 图上
多处出现新的色谱峰，其 DAD 光谱与酚酸相同，说
明酚酸类成分发生了分解和转化(图 1)。文中结果
显示:苍耳子炒黄后 1，5 －二咖啡酰奎宁酸的含量
明显下降，新绿原酸和隐绿原酸的含量却明显增加，
其他成分变化不大，提示部分 1，5 －二咖啡酰奎宁
酸可能分解转化成新绿原酸和隐绿原酸。炒焦样品
中新绿原酸和隐绿原酸的含量进一步增加，绿原酸、
1，5 －和 4，5 － 二咖啡酰奎宁酸的含量显著下降。
炒炭样品中已检不出 1，5 －和 4，5 －二咖啡酰奎宁
酸，其余 4 种成分的含量也进一步下降，总酚酸的含
量明显降低，表明苍耳子炒制不宜过度，否则会严重
破坏其抗炎镇痛的酚酸和噻嗪双酮类成分。苍耳子
中火炒至黄褐色时，其急性毒性显著降低［7］，结合
文中结果，认为药典规定苍耳子炒至黄褐色是合理
的。
参考文献:
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收稿日期:2014 － 09 － 02
基金项目:国家科技支撑计划项目(2012BAI27B07) ;四川省科技厅应用基础项目(2013YJ0042) ;西南民族大学中央高校基本科研业务费专项
(2015NZYQM64)
作者简介:吕露阳，博士，讲师，从事民族药物品质评价的工作。Email:466472608@ qq． com
* 通信作者(Correspondent author) ，Email:499769896@ qq． com
高速逆流色谱法分离川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯
吕露阳，鲁建美，张志锋，张吉仲，刘 圆* ，刘 铎，罗亚兰
(西南民族大学民族医药研究院，四川 成都 610041)
摘要:目的 采用高速逆流色谱法分离纯化藏药川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯。方法 以石油醚 －乙醇 －水(5∶
7∶3)为两相溶剂系统，主机转速为 900 r·min －1，温度 25 ℃，检测波长 254 nm。结果 从 100 mg川木香粗提物中一次分离得
到了 20． 1 mg木香烃内酯、24． 5mg去氢木香内酯，纯度均 ＞ 98%。结论 所用方法可简便、快捷地分离纯化川木香中的木香
烃内酯和去氢木香内酯。
关键词:高速逆流色谱;分离;纯化;川木香;木香烃内酯;去氢木香内酯;超高效液相色谱;藏药
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1006 － 0103(2015)06 － 0700 － 03
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 06． 024
Separation of costunolide and dehydrocostus lactone from Vladimiria souliei by high － speed
counter － current chromatography
L Lu － yang，LU Jian － mei，ZHANG Zhi － feng，ZHANG Ji － zhong，LIU Yuan* ，LIU Duo，LUO Ya － lan
(Ethnic Medicine Institute，Southwest University for Nationalities，Chengdu，Sichuan，610041 P． Ｒ． China)
Abstract:OBJECTIVE To establish a high － speed counter － current chromatography(HSCCC)method for the isolation and purifi-
cation of costunolide and dehydrocostus lactone from Tibetan herb Vladimiria souliei． METHODS Two － phase solvent system
composed of petroleum ether － ethanol － water(5∶7∶3)was used． The revolution speed was 900 r·min －1 with the temperature of
25 ℃ and the detection wavelength of 254 nm． ＲESULTS Costunolide(20． 1 mg)and dehydrocostus lactone(24． 5 mg)were
obtained from 100 mg of the crude extracts in one － step separation． Their purities were higher than 98% ． CONCLUSION This
method is simple and rapid to isolate and purify two natural constituents from V． souliei．
Key words:HSCCC;Isolation;Purification;Vladimiria souliei;Costunolide;Dehydrocostus lactone;UPLC;Tibetan herb
CLC number:Ｒ917 Document code:A Article ID:1006 － 0103(2015)06 － 0700 － 03
高速逆流色谱法(HSCCC)是一种连续高效的
液 －液分配色谱分离技术，不需要任何固态的支撑
物或载体，利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管
内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，其中
一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的
过程中能保留大量的固定相，物质的分离依据其在
两相中分配系数的不同而实现，特别适合于天然产
物活性成分的分离［1］。川木香为菊科植物川木香
Vladimiria souliei (Franch．)Ling或灰毛川木香 Vlad-
imiria souliei (Franch．)Ling var． cinerea Ling的干燥
根，能行气止痛，为常用藏药［2］。现首次用 HSCCC
技术从川木香中分离得到高纯度的木香烃内酯和去
氢木香内酯，可为川木香的开发利用提供理论依据。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
TBE －300A高速逆流色谱仪(上海同田生物技
术有限公司) ;Acquity UPLC 色谱仪(美国 Waters)。
木香烃内酯(批号:111524 － 201107)、去氢木香内
酯(批号:111525 － 201008) (中国药品生物制品检
定所) ;川木香药材(市售) ;甲醇为色谱纯;水为纯
净水;其余试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 粗提物的制备 取 100 g 川木香药材(过 3
号筛) ，加 500 mL 石油醚，浸泡过夜，超声提取 30
min。同法提取 2 次，合并提取液，过滤，滤液旋转蒸
干，得 3． 8 g川木香粗提物。
1． 2． 2 色谱条件 采用 XtimateTM C18色谱柱(100
mm ×2． 1 mm，1． 8μm) ，流动相为甲醇 － 水(75∶
25) ，检测波长 254 nm，流速 0． 25 mL·min －1，柱温
35 ℃，进样量 2 μL。对上述粗提物进行 UPLC 分
析，得到 2 个明显的色谱峰，即木香烃内酯和去氢木
香内酯(图 1A)。
1． 2． 3 分配系数的测定与溶剂系统的筛选 称取
川木香粗提物约 20 mg，置具塞试管中，用预先达到
分配平衡的两相溶剂体系的下相将其完全溶解，在
0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8
A B C D
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t/min
图 1 川木香粗提物(A)、HSCCC组分Ⅰ(B)、HSCCC组分Ⅱ(C)和混合对照品(D)溶液的 UPLC图
Figure 1 UPLC chromatograms of the crude extracts from Vladimiria souliei solution(A)，HSCCC peak fraction Ⅰ solution(B)，HSCCC
peak fraction Ⅱ solution(C)and mixed control solution(D)
“1． 2． 2”项色谱条件下进样检测，记录峰面积(A1)。
再加入等体积的上相，剧烈振荡使其充分混合，待达
到分配平衡后，再取下相进样检测，记录峰面积
(A2) ，计算分配系数 K = (A1 － A2)/A2。按 0． 5 ＜
K ＜ 2． 0 的经验规则选择合适的两相溶剂系统［1］。
由表 1 可见:石油醚 －乙醇 －水(5∶7∶3)为最佳
溶剂系统。此溶剂系统毒性小，有合适的分配系数
与良好的分离度，并且在 15 s内能迅速分层。
1． 2． 4 高速逆流色谱法(HSCCC)的分离 在室温
下，按“1． 2． 3”项下筛选出的最佳溶剂系统，用石油
醚 －乙醇 －水(5∶7∶3)配制 HSCCC 分析所需溶
剂，置分液漏斗中，震荡，静置分层。取 100 mg 川木
香粗提物浸膏，加流动相 20 mL，使样品充分溶解。
将色谱柱由首端向尾端充满固定相(上相) ，主机正
转，转速为 900 r·min －1，再以 2 mL·min －1的流速泵
入流动相(下相) ，待流动相流出两相溶剂在柱中达
到平衡状态时，固定相的保留率为 78%。通过进样
阀注入样品，用紫外检测器在 254 nm 处检测，同时
107第 6 期 吕露阳，等。高速逆流色谱法分离川木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯
记录色谱图(图 2) ，收集峰Ⅰ和峰Ⅱ的流出液。
表 1 木香烃内酯(K1)和去氢木香内脂(K2)溶剂系统的K值的筛选
Table 1 K values of costunolide(K1)and dehydrocostuslactone
(K2)in the two － phase solvent systems
Solvents K1 K2 α
Light petroleum － methanol － water(5∶6． 5∶3． 5) 1． 34 2． 40 1． 79
Light petroleum － methanol － water(5∶6∶4) 2． 69 4． 08 1． 51
Light petroleum － ethanol － water(5∶5∶2． 5) 0． 72 1． 01 1． 4
Light petroleum － ethanol － water(5∶7∶3) 0． 69 1． 0 1． 46
Light petroleum － ethanol － water(5∶5∶5) 2． 4 3． 6 1． 51
α = K2 /K1
0 40 80 120 160
t/min
Ⅰ
Ⅱ
图 2 川木香粗提物的高速逆流色谱图
Figure 2 HSCCC chromatogram of the crude extracts from V．
souliei solution
1． 2． 5 产物的结构鉴定及纯度分析 取流分Ⅰ、
Ⅱ，减压回收溶剂、真空干燥后，分别得 20． 1、24． 5
mg 白色晶体。取少量晶体用甲醇溶解后，按
“1. 2. 2”项色谱条件分别进样，并与混合对照品进
行对比。结果表明:流分Ⅰ为木香烃内酯，Ⅱ为去氢
木香内酯(图 1B ～ D)。木香烃内酯、去氢木香内酯
的纯度分别为 98． 1%、98． 4%。
2 讨论
采用高速逆流色谱(HSCCC)法时，选择最佳的
溶剂体系是最关键的一步。相比传统分离木香烃内
酯和去氢木香内酯使用的甲醇、正己烷、乙酸乙酯等
有机溶剂［3 － 4］，文中采用毒性极小的石油醚和乙醇，
在 3 h内完成了分离，有机溶剂用量少，对环境的污
染小，也不会对操作人员的健康造成影响。曾考察
了进样浓度对 HSCCC分离的影响，结果显示:若进样
量太大，峰形展宽，会造成样品峰的重叠，影响分离效
果，还会使固定相过载;进样量太小则导致制备量有
限，需增加分离次数。一次进样量达 0． 5 g、进样浓度
为 25 mg·mL －1时，木香烃内酯和去氢木香内酯峰能
达到满意的分离度与样品纯度。还考察了不同主机
转速对木香烃内酯和去氢木香内酯分离效果的影响，
主机转速太高会影响仪器寿命，太低则固定相的保留
不理想。转速为 900 r·min －1时，固定相的保留率高
达 78%，载样量较大，故选择转速为 900 r·min －1。
参考文献:
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收稿日期:
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2014 － 11 － 20
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207 华 西 药 学 杂 志 第 30 卷