全 文 ：金钮扣提取物体外抑菌活性的初步研究
冯承恩1，黄庆芳1，房志坚1* ，梅全喜2
(1．广东药学院中山校区实验中心，广东中山 528458;2．广州中医药大学附属中山中医院，广东中山 528400)
摘要 ［目的］研究金钮扣提取物的体外抑菌活性。［方法］采用药敏纸片扩散法及 2倍稀释法测定金钮扣提取物对金黄色葡萄球菌等
10种细菌的抑菌效果。［结果］①对金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌 6种供试菌有抑
制作用。②及③对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌 6种供试菌有较强
的抑制作用。②及④对白色葡萄球菌有较弱的抑菌作用。［结论］金钮扣不同提取物对供试菌抑菌效果不同;②的抑菌效果优于①;而
③及④是主要活性成分，具有抑菌作用。
关键词 金钮扣;水茄;抑菌作用;2倍稀释法;药敏纸片扩散法
中图分类号 R285． 5 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)02 －00723 －03
Preliminary Study on the Antibacterial Activity of RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI Extract in vitro
FENG Cheng-en et al (Test center，Zhongshan Campus，Guangdong Pharmaceutical College，Zhongshan，Guangdong 528458)
Abstract ［Objective］To study the antibacterial activity of RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI extract against tested strains in vitro． ［Meth-
od］The antibacterial activity of RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI extract against 10 kinds of bacteria such as Staphylococcus aureus was test-
ed by drug － sensitive disk diffusion method and tube double dilution method． ［Result］The water extract of RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI
presented the antibacterial activity against Staphylococcus aureus，Staphylococcus lemon，family Micrococcus，Bacillus subtilis，Shigella and
Staphylococcus albus． Ethanol extract and petroleum ether fraction had a strong inhibitory effect on methicillin － resistant Staphylococcus aureus，
Staphylococcus aureus，Staphylococcus lemon，Micrococcus，Bacillus subtilis and Shigella． Ethanol extract and chloroform part had a weak in-
hibitory effect on the Staphylococcus albus． ［Conclusion］Different extracts of RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI presented varying inhibitory
effect on tested strains． The antibacterial activity of ethanol extract was higher than that of water extract，but petroleum ether and chloroform were
the main active ingredients that had antibacterial effects．
Keywords RADIX ET CAULIS SOLANI TORVI;Dilution method;Drug － sensitive disk diffusion method
基金项目 中山市华南现代中药城 (健康医药产业基地)专项发展基
金 (2007J2007)。
作者简介 冯承恩(1978 － ) ，女，广东湛江人，实验师，硕士，从事药理
学研究，E-mail:cefeng2006@ 126． com。* 通讯作者，副教
授，硕士研究生导师，从事中药资源鉴定与中药质量标准的
研究，E-mail:jian139@ tom． com。
收稿日期 2011-09-30
金钮扣，别名一面针、山颠茄或者小登茄［1］，为茄科茄属
植物水茄(Solanum torvum Swartz)的干燥根和茎，以茎及根入
药，有活血、散瘀、消肿、通经、止咳、止痛功效，该药味辛、性
微量，有小毒［2］。近年来，金钮扣的研究主要集中在化学成
分上，而关于其抑菌作用的研究鲜有报道。试验对金钮扣提
取物进行抑制菌作用研究，并检测抑菌物质的最低抑菌浓
度，为临床应用及合理开发资源利用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。金钮扣，由广东益和堂生产提供，经田素
英副教授鉴别为水茄的干燥茎。
1． 1． 2 供试菌种。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin
resistance Staphyloccocus aureus)、金黄色葡萄球菌(Staphyloc-
cocus aureus)、柠檬色葡萄球菌(lemon Staphylococcus)、白色葡
萄球菌(Staphylococcus albus)、微球菌(Micrococcus)、枯草芽
孢杆菌(Bacillus subtilis)、痢疾杆菌(Shigella)、变形杆菌(pro-
teobacterial)、大肠杆菌(Escherichia coli)、伤寒杆菌(Salmonel-
la typhi ) ，均由广东药学院基础学院微生物学与免疫学试验
室提供。
1． 1． 3 主要仪器。水平层流超净工作台，购自上海博迅实
业有限公司医疗设备厂;ZD-85A气浴恒温振荡器，购自江苏
金坛市宏华仪器厂;HPX-9162MBE数显电热恒温培养箱，购
自上海博迅实业有限公司医疗设备厂;0 ～150 mm ×0． 02 mm
游标卡尺，购自安徽桐城量具厂。
1． 1． 4 主要试剂。营养琼脂培养基，购自北京海淀区微生
物培养制品厂，批号:20090108;乙醇、石油醚、氯仿和乙酸乙
酯等，均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 抑菌活性物质的制备方法。见图 1，临用前用无菌蒸
馏水将药敏纸片的各个部位的浓度稀释为 2． 820 g /ml，药液
的浓度稀释为 1． 714 g /ml，测定 MIC。
图 1 抑菌活性物质的制备方法
1． 2． 2 抗微生物活性试验。将供试菌种接种在 MH营养肉
汤培养基上，置气浴恒温振荡器 37 ℃培养 12 h，细菌平板菌
落计数法统计活菌菌落数后，用无菌生理盐水将菌悬液浓度
调节为 107 CFU /ml［3］。将(MH)固体琼脂培养基 15 ml溶化
后，倾注于培养皿上，待冷凝固后，加入供试菌悬液 0． 1 ml菌
悬液于 MH平板中央，均匀涂布。药敏纸片灭菌阴干后贴于
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(2):723 － 725，762 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.02.075
含菌培养基上，每皿放置 2片，各纸片间的距离均等，每一样
品重复 3次，同时用浸有溶剂的滤纸片做空白对照。将 37
℃倒置培养 24 h［4 －5］，用十字交叉法测量抑菌圈直径，重复 3
次取平均值。
1． 2． 3 药敏菌最低抑菌浓度(MIC)测定。在无菌条件下，取
10支无菌试管，第1支试管加入0． 5 ml MH肉汤及1． 5 ml各
提取物药液，其余各支试管加入 1 ml MH肉汤，混匀第 1 支
试管后按 2 倍稀释法稀释，使各管中的药液浓度分别为
1． 285 5、0． 642 8、0． 321 4、0． 160 7、0． 080 3、0． 040 2、0． 020 1、
0． 010 1 g /ml。9号管为肉汤无菌生长对照管，10 号管为细
菌生长对照管。除 9号管外，在其余试管中加入稀释好的试
验菌液各 50 μl，混合均匀，于 37 ℃培养 24 h。与对照相比，
观察是否有菌丝生长，如培养液出现膜状物或浑浊则标记为
“+”，表明测试菌的生长不能被抑制，无膜状物且澄清透明
则标记为“－”，表明测试菌的生长被抑制，最小抑菌浓度以
无菌丝生长的试管中药液浓度为 MIC［6］，重复 3次。
2 结果与分析
2． 1 金钮扣水和醇提物的抑菌作用 除变形杆菌、伤寒杆
菌、大肠杆菌原外，①和②对所有试验菌都显示抗菌活性。
②对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌抑菌作用最强，抑菌圈直
径分别为 10． 85 mm，其次是金黄色葡萄球菌和柠檬色葡萄
球菌，对微球菌、枯草芽孢杆菌有较强的抑菌活性;对痢疾杆
菌、白色葡萄球菌活性活性较弱(表 1、图 2)。
表 1 金钮扣水及醇提物的抑菌作用(n =3)
菌种编号
不同提取物抑菌圈直径∥mm
② ①
Ⅰ 10． 85 －
Ⅱ 9． 55 6． 13
Ⅲ 7． 56 6． 11
Ⅳ 7． 48 6． 29
Ⅴ 7． 53 6． 35
Ⅵ 6． 22 5． 89
Ⅶ 6． 34 5． 48
Ⅷ － －
Ⅸ － －
Ⅹ － －
注:“ － ”:无抑菌圈纸片直径:5 mm。Ⅰ．耐甲氧西林的金黄色葡萄球
菌;Ⅱ． 金黄色葡萄球菌;Ⅲ．柠檬色葡萄球菌;Ⅳ．微球菌;Ⅴ．枯草
芽孢杆菌;Ⅵ． 痢疾杆菌;Ⅶ． 白色葡萄球菌;Ⅷ． 变形杆菌;Ⅸ． 大
肠杆菌;Ⅹ． 伤寒杆菌(下同)。
注:A:② ;B:①;C:空白对照。
图 2 金钮扣水和醇提取物的抑菌作用
表 2 ②对药敏菌种的最低抑菌浓度(n =3)
菌种
浓度∥g /ml
1 2 3 4 5 6 7 8 9无菌 10无 药
1． 285 5 0． 642 8 0． 321 4 0． 160 7 0． 080 3 0． 040 2 0． 020 1 0． 010 0 0． 000 0 0． 000 0
Ⅰ － － － － + + + + + + + + + － + + +
Ⅱ － － － － + + + + + + + + + + + + － + + + +
Ⅲ － － － + + + + + + + + + + + + + + + + + + + － + + + + +
Ⅳ － － － － － + + + + + + － + + +
Ⅴ － － － + + + + + + + + + + + + + － + + +
Ⅵ － － － + + + + + + + + + + + + + + + + － + + + +
Ⅶ － － － － + + + + + + + + + + + + + + － + + + +
注:“ － ”:无菌生长，“ + ”:少许浑浊，“ + + ”:比较浑浊，“ + + + ”:很浑浊，“ + + + +”:非常浑浊;“+ + + + + ”:最浑浊(下同)。
2． 2 金钮扣不同提取物的抑菌作用 在不同浸提物中，③
对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色
葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌有抑制作用。④对白色
葡萄球菌抑菌直径为6． 18 mm。而⑤、⑥、⑦对7种供试菌无
抑制作用(表 3、图 3)。
2． 3 金钮扣不同提取物的药敏菌最低抑菌浓度(MIC) 在
6种药敏菌中，③对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和微球菌
最强，对金黄色色葡萄球菌也有较强的抑制活性，但对柠檬
色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌的抑制作用较弱。④
对白色葡萄球菌的 MIC 为 0． 080 3 mm，具体见表 4及 5。
427 安徽农业科学 2012 年
表 3 金钮扣不同提取物的抑菌作用(n =3)
菌种
不同浸提物抑菌圈直径∥mm
③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ②
Ⅰ 9． 98 － － － － 10． 51
Ⅱ 8． 13 － － － － 9． 97
Ⅲ 6． 86 － － － － 7． 84
Ⅳ 7． 03 － － － － 7． 21
Ⅴ 6． 89 － － － － 7． 66
Ⅵ 6． 16 － － － － 6． 06
Ⅶ 6． 18 － － － 10． 42
3 结论与讨论
由于抗生素的滥用，耐药性细菌引起的传染性疾病越来
越来严重。从传统中草药中筛选新的抗菌药物是药物研究
与开发的有效途径［7］。金钮扣是民间常用植物药，是中华字
号广东益和堂生产的传统名药“沙溪凉茶”的主要成分
之一［8］。
在金钮扣提取物对耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MR-
SA)等 10种微生物抗菌活性的研究中，②的抑菌作用优于
①。被抑制的细菌中既有革兰氏阳性菌(G +)又有革兰氏阴
性菌(G +) ，既有球菌又有杆菌，可见金钮扣为广谱的抑菌药
材。②对 G +菌的抑制效果比 G +菌的抑制效果好。原因考
虑为金钮扣中抑菌成分可以透过 G +菌细胞壁中肽聚糖层，
进入细菌体内产生作用，而对 G －菌的细胞壁的类脂质没有
破坏作用，无法进入细菌内部。
注:A:② ;C:空白对照组;D:③;E:④;F:⑤;G:⑥;H:⑦。
图 3 不同浸提物对 7种供试菌的抑菌作用
表 4 ③对药敏菌种的最低抑菌浓度(n =3)
菌种
浓度∥g /ml
1 2 3 4 5 6 7 8 9无菌 10无 药
1． 285 5 0． 642 8 0． 321 4 0． 160 7 0． 080 3 0． 040 2 0． 020 1 0． 010 0 0． 000 0 0． 000 0
Ⅰ － － － － － + + + + + + － + + +
Ⅱ － － － － + + + + + + + + － + + + +
Ⅲ － － － + + + + + + + + + + + + + + + － + + + + +
Ⅳ － － － － － + + + + + + － + + +
Ⅴ － － － + + + + + + + + + － + + +
Ⅵ － － － + + + + + + + + + + + + － + + + +
表 5 ④对药敏菌种的最低抑菌浓度(n =3)
菌种
浓度∥g /ml
1 2 3 4 5 6 7 8 9无菌 10无 药
1． 285 5 0． 642 8 0． 321 4 0． 160 7 0． 080 3 0． 040 2 0． 020 1 0． 010 0 0． 000 0 0． 000 0
Ⅶ － － － － － + + + + + + － + + +
另外，试验还对②做进一步的抑菌成分研究，发现③及
④对供试菌有抑制作用。该课题组前期在金钮扣化学成分
研究中发现，③中含有 6个不同结构的三萜化合物［9］。刘高
强提到三萜类物质具有抗菌作用［10］，在该课题的石油醚提
取物中分离得到的三萜类化合物可能是重要的抑菌成分，故
应在药理方面对其进行进一步研究研究，为开发新的抗菌药
物奠定了科学基础。
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(下转第 762页)
52740卷 2期 冯承恩等 金钮扣提取物体外抑菌活性的初步研究
－浓度 25%盐酸(4∶ 1，V /V)混合液，水浴回流 30 min，冷却
后，用无水甲醇定容至 100 ml，经 0． 45 μm滤膜过滤，作为供
试品溶液。
1． 2． 5 系统适应性试验。取槲皮素、山柰酚和异鼠李素对
照品溶液。进样 10 μl，进行色谱分析，确定槲皮素、山柰酚
与异鼠李素的保留时间。
1． 2． 6 方法学考察。①线性关系的考察。取槲皮素标准贮
备液，配制槲皮素浓度分别为 0． 125、0． 250、0． 500、1． 000、
1． 500、2． 000和 3． 000 μg /ml的溶液，进样 10 μl，每个浓度重复
3次，记录色谱图。以峰面积(Y)对进样浓度(X)进行线性回
归，计算回归方程。②精密度试验。取浓度为 0． 5 μg /ml的槲
皮素溶液，按照“1．2． 2”中色谱条件，重复测定 5次，计算峰面
积的 RSD。③加样回收率试验。取已测得槲皮素含量的柳叶
粉末 0． 500 g共 6份，准确加入一定量的槲皮素，按照“1． 2． 4”
项中所述条件制备供试品溶液，按“1． 2． 2”项条件进行色谱分
析。计算槲皮素的平均回收率和 RSD (n =5)。
1． 2． 7 柳叶中槲皮素的含量测定。精密量取供试品溶液适
量，用无水甲醇稀释，使其峰面积在标准曲线的线性范围内，
按照“1． 2． 2”项条件进行色谱分析，记录色谱图。将槲皮素
的峰面积代入回归方程计算柳叶中槲皮素的含量。
2 结果与分析
2． 1 系统适应性试验 由图 1 ～ 2可知，供试品色谱于对照
品色谱在相同时间上有对应的吸收峰，因此初步确定柳叶的
供试品溶液中有槲皮素存在。
图 1 槲皮素对照品的 HPLC色谱图
2． 2 方法学考察 ①线性关系的考察。计算得槲皮素的回
归方程为 Y =26 321． 68X －366． 2，R =0． 999 8，表明槲皮素在
0． 125 ～3． 000 μg /ml 浓度范围内线性关系良好。②精密度
试验。计算得 RSD 为 0． 84%，表明该方法精密度良好。③
加样回收率试验。结果显示，槲皮素的平均回收率为
96． 2%，RSD为 1． 31% (n =5) ，表明该方法准确、可靠，可用
于柳叶中槲皮素的含量测定。
2． 3 柳叶中槲皮素的含量测定 柳叶中槲皮素的含量在
0． 36% ～0． 74%，高于银杏叶中槲皮素的含量。而且，相同
城市不同地点的柳叶中槲皮素的含量差别较大，这可能与柳
树的生长地点与树龄有关，其规律有待进一步研究。
图 2 柳叶提取水解后的 HPLC色谱图
3 结论与讨论
冯冠英等应用比色法考察了柳叶中邻苯二酚含量与采
摘时间的关系［4］。比色法专属性不强，准确性差，而且测定
的邻苯二酚不是抗氧化作用的主要活性成分，其含量低。因
此，测定邻苯二酚不能体现柳叶的内在质量。槲皮素及其苷
是植物界分布最广且最具生物活性的黄酮类化合物，其清除
自由基活性作用、体内外抑制亚硝胺合成的作用、对香烟烟
雾提取物诱导的人支气管上皮细胞死亡的抑制作用和对小
鼠记忆障碍保护作用的研究越来越受到重视［5 －7］。
自然界槲皮素绝大部分以苷的方式存在，其中以槲皮素
的芸香糖苷(芦丁)存在最多。关于柳叶中槲皮素以何种形
式的苷存在的研究鲜有报道。试验结果表明，柳叶提取物水
解中的槲皮素分离效果良好，含量高于银杏叶中的，但目前
柳叶中黄酮成分的研究还没有引起人们足够的关注。柳叶
中除含有槲皮素外，还含有一定量的山柰酚与异鼠李素，因
在 260 nm灵敏度低，试验不作报道。
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