全 文 ：液相色谱法 ( H L PC) 。 该方法利用喜树碱在紫外光
照下的天然荧光 , 在毫微克水平即可进行分析 。 喜
树碱浓度依据 己知喜树碱标准品与未知样品斑点的
大小进行比较测定 。 为了检验 T L C 分离得到的样品
纯度 , 把 T L C 板上重复出现的 3 个喜树碱斑点剥下
合并 , 用氯仿溶解 , H PL C 测定保留时间为 4 . 1m in ,
与参照化合物及文献报道一致 。 H PL C 光谱法证明 ,
T L c 分离与 lA ph al m ag er 分析连用结果快速 、 量化
精确 。 此外 , 本技 术不需要大 量的样 品和 昂贵的
H P L C 装置 。 为了证明该方法对筛选叶片的潜在可能
性 , 用两种标准的打孔器从 5 种非同源细胞繁殖的
喜树的小叶 (长 1 0 e m ) 和大叶 ( 长 3 0 e m ) 中获取
样品 , 冻干后用二氯 甲烷提取 。 结果表明 , 小叶中
喜树碱的浓度高于大叶 ; 大叶样品确定出 2 号树喜
树碱产量较高 , 超过其它树的 4 倍 ( n留m g 干重 ) 。
小叶样品喜树碱含量较一致 ; 2 号树并未显示高含
量 。 采用痕量测定法有利于筛选大量样品 , 尤其是
不同类型样 品的筛选 , 需要连续的测定 。 为 了确定
高产量的喜树碱生产线 , 需要考虑组织的发育阶段
并进行连续的比较测定 。
( 龚苏晓摘译 江纪武校 )
03 1 块茎青牛胆中抑制 N O 生成成分的检测 〔英〕 /
Y b k o z a w a T… / B io l P h a r l l l B u l l 一2 0 0 1 , 2 4 ( 10 ) 一
1 15 3~ 1 15 6
防己科植物块茎青牛胆 ( 兀n o sP o ar tub e cr u al at )
分布于中国西南部至亚洲东南部 , 包括越南 、 泰国 、
马来西亚 、 印度尼西亚和印度 。 该植物作为民间药物
广泛用 于退热 、 缓解腹痛 、 止泻 、 解毒 、 驱虫及滋补 ,
而药理作用机理多数不明 。 研究发现块茎青牛胆水提
物抑制 N O 的生成 。 本次采用脂多糖 ( L P )S 激活巨
噬细胞的方法 , 对块茎青牛胆水提物中抑制 N O 生成
的活性成分进行了检测 。
块茎青牛胆干燥茎 ( kI g ) 粉碎 , 60 一 70 ℃水提
3 次 , 药渣于室温下用 甲醇再提取 3 次 。 水提液浓缩 ,
在 乙酸乙酷和水中分配 , 得到溶于 乙酸 乙酷的部分
和水层 ; 水层进一步经 iD ia on H P 一 2 0 5 5 柱分离 , 得
到 B 、 C 、 D 3 个部分 。 甲醇提取液浓缩 , 在乙酸乙
酷和水中分配 , 得到溶于乙酸乙酷的 E部分和水层 F
部分 。
采用 L P S 激活 巨噬细胞的方法 , 检查各部分对
N O 生成的抑制作用 。 结果表 明 , 不同剂量的块茎青
牛胆提取物对 N O 生成的抑制作用具有浓度依赖性 。
相对于整个提取物而言 C 和 F 部分活性较弱 , 而 E
部分活性较强 。 将 E 部分进一步经硅胶柱色谱分离 ,
得到 E 一 l一 E一5 5 个部分 。 其中 , E 一3 部分显示出很高
的抗 N O 活性 , 50协g/ m L 和 10 0林g/ m L 时 N O 生成量
的浓度分别为 9 . 08 pM 和 6 . 39 林M 。 将含有主要成分
的 E一 3 部分经葡聚糖凝胶 L H 一20 柱纯化 , 得到 N 一反 -
阿魏酞酪胺 ( 370 m g ) , 该成分显示出很强的抗 N O
活性 , 对 N O 生成的抑制作用 具有浓度依赖性 ,
50 拼岁m L 时的抑制作用 与 10 0林M 氨基呱的作用相
似 , 故该成分是块茎青牛胆中活性最强的成分 。
对诱导型 N O 合酶 ( iN O S ) 的抑制活性试验表
明 , 块茎青牛胆提取物对 iN O S 的抑制作用具有浓度
依赖性 , 块茎青牛胆提取物 5 0 、 一0 0 、 2 0 0林g/ m L 时
iN O S 活性分别为 86 % 、 72 % 和 6 % 。 在各部分中 ,
E 部分的抑制活性较高 , 从中分离的 E一 3 部分的抑制
活性最强 , 与其中含有 N 一反一阿魏酞酪胺有关 , 该成
分 50 拼留m L 时对 iN O S 的抑制作用亦 与 10 抖M 氨基
肌的作用相似 。 与氦基呱相 比 , N 一反一阿魏酞酩胺可
改善 L P S 条件下的细胞存活力 。
(龚苏晓摘译 江纪武校 )
03 2 较蓝中环加氧酶 2 抑制成分的鉴定和分离 〔英〕 /
D 田 IZ H… / P lan at M de 一 20() l , 6 7 ( 5 ) 并 11一 4 16
十字花科植物落蓝 ( sI a ist int c ot r ia ) 为传统染料
和药用植物 , 用于治疗创伤 、 溃疡 、 肿瘤 、 痔疮 、
蛇咬伤和各种炎性疾病 。 从该植物的不同部位中已
分离出约 10 种化合物 , 包括叫睬类生物碱 、 人工
靛青染料及其前体 、 葱衍生物 、 芥子油苔和其它有
机硫化合物 、 氨基酸 、 菇类 、 核普 、 普类 、 芳香脂
肪族梭酸和黄酮类 。 为了证实箱蓝作为抗炎药物的
可能性 , 本次制备了多种秘蓝提取物 , 用直接对抗
16 个炎性靶点进行了体外筛选 。
材料和方法 : ①干燥落蓝叶和根粉碎 , 等分样
品 , 在室温下用二氯 甲烷 ( E( :M ) 或乙醉提取 , 分
别得到干燥叶 D C M 及乙醇提取物 、 干燥根二氯 甲烷
及乙醇提取物 。 冷冻的新鲜叶及根解冻 , 等分样品 ,
用乙醇提取 , 得到新鲜叶及根的乙醇提取物 。 总共
得到 6 个亲脂和极性提取物 。 ②超临界流体萃取物
( SFE )
: 采用 肠~
703 和 703 M 组成的改性剂。 干
燥落蓝叶用 C q 提取 h7 (箱温 50 ℃ , 限温 150 ℃ , 30
大气压 ) , 然后用 C O : 和改性剂 (2 0% 乙醇 ) 在相
同的温度和压力下提取 , 减压挥干溶剂 。
对 16 个炎性靶点的体外筛选试验表明 , 干燥叶
E〔 M 提取物显示明显抑制环氧加酶 ( CO X )的活性 ,
优先选择性抑制 C o X 一 2 ( 5 0林留m L 时对 c o x 一2 和
CO X
一
1 的抑制分别为 10 %和 < 10% = 。 S F E 提取物
可成功再现 D C M 提取物的生物活性特征和 H P L C
指纹谱 , 两者对 C O X 一 2 的抑制活性分别为 8 . 1林留m L
和 1 . 2“ g /m L , 在最 高浓度时对 C O X 一 l 的抑制作用
均 < 10% 。 以 高 分 辨 率 活 性 为 引 导 , 采 用
L C
一
D A D
一
M S 技术联合微量生物分析法 , 确定出裕蓝
提取物中尤其对 C O X 一2 具有抑制活性的成分 。 提取
物上硅胶柱 , 用氯仿一甲醇梯度洗脱 , 各洗脱部分通
过 TL C 监控 , 上硅胶柱分离 , 用固相提取法提取 ,
制备型 H P L C 纯化 , 得到 己知叫睬哇 哇琳生物碱
t yr patn ht ir
n , 即叼l噪 [ 2 , l 一 b〕 哇哇琳一 6 , 12 一二酮 。 脂
多糖活化的单 M ac 6 细胞试验 中 , t卿at nt hir n 抑制
单 M a 。 6 细胞中 C O X 一2 的活性 , 作用呈浓度依赖方
式 , 其活性强度 ( IC幻二麟 n M ) 与合成的 C O X 一2 选择
性抑制剂尼美舒利 ( CI * 二 3货 IM )及 N s 3 98 (l c 、 二 nZ M )
类似 。 S F E 提取物和 t卿atP n t h r i n 在浓度 1 0 0林g/ m L
和 10林M 时 , 对单 M ac 6 细胞和 R A W 264 . 7 细胞均
未显示细胞毒性 。
(龚苏晓摘译 江纪武校 )
仍3 连翘及车前子的指标成分与检识试验 〔日 〕 / 西部
三省…刀 N ia u ar IM 。五e i川器 . . 2X() l , 5 (5 ) 一 72 ~ 275
连翘具有消炎 、 利尿 、 排脓解毒等作用 , 为治
疗各种化脓症及皮肤病的主要生药 。 第 14 版 《日本
药典 》 记载连翘为连翘 ( oF sr t h ia s u sP e sn a) 及金钟
花 (尸 vi r i功 s s im a) 的果实 , 而 《中国药典》 中其基
原植物仅为 F s u sP e sn a 。 不同的基原植物其所含成分
也有差异 。 车前子有利尿 、 消炎 、 镇咳祛痰等作用 。
《 日本 药 典 》 中其 基 原 植物 为 车前 ( 尸如 n tag o
山 ia t ic a ) , 而 《中国药典 》 中为车前及平车前 (尸
`御 , ser sa ) 2 种 。 目前的 《日本药典 》 未记载对连翘
及车前子特有成分进行检识的方法 。 本次运用简单
的薄层层析法 ( T L C ) 对不 同基原的连翘及车前子
中成分进行检识 。
材料与方法 : ①样品 : 各地市场流通的 2 种基
原不同的连翘及连翘伪品 场少 `门记u m ko l侧斤h oe ~
e
的果实 , 车前子为市售品 。 ②方法 : 分别取生药粉
末 2 0 9 , 加甲醇 10m L , 水浴加温 3m i n , 冷却过滤 ,
滤液为样品 。 按 T L C 法取 1 0“ L 样品点在硅胶薄层板
上 , 连翘以乙酸乙醋一乙酸 -水 ( 7 : 2 : l) 为展开剂 ,
展开 1oc m 后薄层板自然干燥 , 喷以显色剂氯化铁溶
液 。 车前子以正丁醇-水一冰醋酸 ( 7 : 2 : l) 为展开剂 ,
干燥后喷显色剂 -P 茵香醛硫酸试剂 , 105 ℃加热 1Om in
后观察其斑点 。
结果与讨论 : 连翘果实的主要成分 fo sr yt hi as ide
在 R f .0 5 处有深蓝色斑点 金钟花果实的主要成分
ac et os id e 在 R f .o 5 处有深蓝色斑点 , 二者几乎相同 ,
难以区别 。 金钟花果实含有的棚皮昔在 R f .0 6 处有
淡蓝色斑点 , 因此以 fo sr yt hi as ide 与棚皮昔为指标成
分可以鉴别 。 基原植物为场夕e ir cu m ko 吸斤heo ue sn e
的伪品连翘未检测到 fo sr yt h ias ide 及 ac et os ids , 其主
要成分为懈皮昔 , 依此可以鉴别伪 品 。 车前子中含
有的 ac t co is d e 及去轻桅子昔酸各为 .0 6% , 以前者为
指标成分 , 用 T L C 法其呈色界限为 0 . 6拌留m L , 灵敏
度较高 。 在 日本如车前子中混入平 车前的种子时 ,
用 T L C 法因其斑点相同而不易区别 , 应参考生药外
形进行鉴别 。 如混入含有 lP an at g o s ids 的种子时 ,
lP an agt os 记e 与 ac et os id e 斑点的位置相同也难以区
别 , 此时应加入盐酸镁呈淡红至紫红色 , 根据黄酮
类的呈色反应进行检识 。
(杜 旭摘译 )
0 3 4 双黄连 中金银花标志化合物的鉴定 〔英 〕 /
N i s h ib e S… / N a ut ar l M e d ie i n e s 一 2 0 0 1 , 5 5 ( 6 ) 一 3 15
双黄连制剂由金银花 、 黄答和连翘组成 , 用于
治疗急慢性炎症以及 由抗生素耐药的微生物引起的
感染 。 另外 , 双黄连膏剂对特应性皮肤疾病也有治
疗作用 。 因此 , 分别对双黄连所含 生药进行了质量