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独脚金配方颗粒、水煎剂、饮片特征图谱的比较研究



全 文 :Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2016 November,Vol. 27 No. 6
·指纹图谱研究·
收稿日期:2016-02-03
作者简介:周永妍,女,硕士,研究方向:药物分析。Email:zhongongyan33004@163.com。通信作者:姜国志,男,高级工程师,研究方向:药
品生产工艺、质量研究及产业化。Email:15931199089@163.com。
基金项目:国家中医药科学技术研究专项课题中药配方颗粒制备工艺及质量标准的研究(国中医药科2013ZX07)。
独脚金配方颗粒、水煎剂、饮片特征图谱的比较研究
周永妍 1,张岩岩 1,2,姜国志 1,2,孙胜斌 1,2,李军山 1,2,牛丽颖 2,3,4,陈 钟 1,2,3(1.神威药业集团有限公司,
河北 石家庄 051430;2.河北省中药配方颗粒工程技术研究中心,河北 石家庄 051430;3.河北省高校中药配
方颗粒应用技术研发中心,河北 石家庄 050091;4.河北中医学院,河北 石家庄 050091)
摘要:目的 比较独脚金配方颗粒、水煎剂、饮片的HPLC特征图谱,为其质量控制提供可靠的方法。方法
采用高效液相色谱法测定,InertsilODS-SP色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯
度洗脱;流速:1.0mL· in-1;柱温:35℃;检测波长:340nm。结果 初步建立了独脚金配方颗粒、水煎剂、
饮片的HPLC特征图谱。并采用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件》(2008版)进行数据处
理。确定了独脚金配方颗粒7个特征峰,鉴别了2个黄酮类特征峰(木犀草素、芹菜素),且均可在其水煎剂、
饮片中得到追溯。结论 采用HPLC法所建立的独脚金配方颗粒特征图谱,具有配方颗粒、水煎剂、饮片成分
的可追溯性,为全面控制独脚金配方颗粒的质量提供方法。
关键词:独脚金;配方颗粒;水煎剂;饮片;高效液相色谱法;特征图谱
中图分类号:R284.1文献标志码:A 文章编号:1003-9783(2016)06-0846-05
doi:10.19378/j. issn. 1003-9783. 2016. 06. 020
Comparative Study on Characteristic Chromatograms of Striga asiatica(L.) O.Ktze. Slice Pieces and Its
Formula Granules and Decoction
ZHOU Yongyan1,ZHANG Yanyan1,2,JIANG Guozhi1,2,SUN Shengbin1,2,LI Junshan1,2,NIU Liying2,3,4,CHEN
Zhong1,2,3(1. Shineway Pharmaceutical Group Co. Ltd.,Shijiazhuang 051430 Hebei,China;2. Hebei TCM Formula
Granule Engineering & Technology Research Center,Shijiazhuang 051430 Hebei,China;3. TCM Formula Granule
Research Center of Hebei Province University,Shijiazhuang 050091 Hebei,China;4. Hebei University of Chinese
Medicine,Shijiazhuang 050091 Hebei,China)
Abstract:Objective To establish the characteristic chromatograms ofStriga asiatica(L.)O.Ktze. slice pieces and its
formula granules and decoction by high performance liquid chromatography(HPLC),thus to supply a method for its
quality control.Methods The analysis was performed on a Inertsil ODS-SP column(4.6 mm×250 mm,5μm) with
a gradient mobile phase of acetonitrile-0.1 % phosphoric acid at a flow rate of 1.0 mL·min-1 The column temperature
was 35℃ and the detection wavelength was set at 340 nm.Similarity evaluation system for chromatographic fingerprint
of TCM(Version 2008)issued by Chinese Pharmacopoeia Commission was used for the data analysis.Results The
HPLC characteristic chromatograms ofStriga asiatica(L.)O.Ktze. formula granules consisted of 7 common peaks,and
two peaks were identified as luteolin and apigenin. The 7 common peaks could be trackable in the water decoction and
slice pieces.Conclusion The established characteristic chromatograms of formula granules are trackable inStriga
asiatica(L.)O.Ktze. slice pieces and its water decoction,which can be used for the quality control ofStriga asiatica
(L.)O.Ktze. formula granules.
Keywords: Striga asiatica (L.) O.Ktze.;formula granules;decoction;slice pieces;high performance liquid
chromatography;characteristic chromatograms
846· ·
中药新药与临床药理 2016年 11月第 27卷第 6期
独脚金为玄参科植物独脚金 Striga asiatica(L.)
O.Ktze.的干燥全草,夏、秋二季采收、洗净、晒干。
又名独脚柑、疳积草、消米虫等,始载于《生草药性
备要》,具有清肝、健脾、消食的功效。临床上常用
于治疗小儿伤食疳积、黄肿、夜盲等[1]。独脚金配方
颗粒由符合炮制规范的独脚金饮片经提取浓缩工艺
制备而成。临床及药理研究[2]表明,中药配方颗粒和
传统汤剂有相同的疗效及药理作用,且有直接冲服、
服用量少、疗效确切、卫生安全等优点。独脚金药材
为非《中国药典》品种,只被个别省中药材标准[3-4]收
录。本研究参考相关文献方法[5-9],采用HPLC法建立
了独脚金配方颗粒的特征图谱,并考察配方颗粒和
水煎剂、饮片的相关性,旨在用于独脚金配方颗粒
生产过程各环节的质量控制,也可为中药配方颗粒
替代传统饮片的可行性研究提供参照。
1 材料
1.1 仪器及试剂 安捷伦1260高效液相色谱仪(美国
安捷伦公司);KH3200E型超声波清洗器(昆山禾创
超声仪器有限公司);AE240 电子分析天平(瑞士
Mettler-Toledo有限公司);RHP-200高速多功能粉碎
机(永康市荣浩工贸有限公司);药典检验筛(浙江上
虞市华丰五金仪器有限公司)。
乙腈(HPLC 级,批号:20150503)、磷酸(AR,
批号:20120229),天津市科密欧化学试剂有限公
司;95 %乙醇(AR,天津市申泰化学试剂有限公司,
批号:20150513)。对照品木犀草素 (批号:
111520-200504)、芹菜素(批号:111901-201102),
中国食品药品检定研究院;水为超纯水。
1.2 样品 10 批独脚金药材采自独脚金主产地和市
场购买,经原河北省药品检验研究院孙宝惠主任中
药师鉴定为玄参科植物独脚金 [Striga asiatica(L.)O.
Ktze.],样品来源:广西壮族自治区,编号:01-01,
01-02,01-03,01-04;广东省,编号:01-05,01-
06,01-07;海南省,编号:01-08,01-09,01-10;
10批独脚金水煎剂,编号:02-01~02-10,按照《医
疗机构中药煎药室管理规范》药材煎煮方法相关要
求制备;10批独脚金配方颗粒(每袋装0.5 g,每1 g
配方颗粒相当于饮片20g),神威药业集团有限公司,
批号分别为:14100901, 14100902,14100903,
14100904,14100905,15012211,15012212,150122
13,15012214,15012215。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 精密称取木犀草素、芹菜素
对照品适量,分别置50 mL量瓶中,加40 %乙醇至
刻度配制成质量浓度分别为25,50μg·mL-1的溶液,
作为对照品溶液。
2.2 供试品及阴性样品溶液的制备 独脚金饮片粉
碎,过3号筛;独脚金配方颗粒,研细。分别取独
脚金饮片细粉1 g、配方颗粒细粉约0.05 g(相当于饮
片1 g),精密称定,分别置具塞锥形瓶中,精密加
入40 %乙醇溶液25 mL,称定质量,超声(功率250
W,频率50 kHz)处理20 min,取出,放冷,再称定
质量,用40%乙醇溶液补足减失的质量,摇匀,滤
过,取续滤液作为饮片和配方颗粒的供试品溶液。
取辅料糊精0.05 g,同上法制得阴性样品溶液。
2.3 水煎剂溶液的制备 取独脚金饮片100 g,煎煮
3次,第1次加水高出药材3~4 cm,浸泡30 min后
煮沸,然后保持微沸30 min,过滤;第 2次煎煮加
水高出药材1~2 cm,煎煮30 min,过滤;第3次煎
煮加水高出药材1~2 cm,煎煮20 min,过滤,合并
3次滤液,旋转蒸发仪减压浓缩至干。取部分研细,
精密称取约0.5 g(相当于独脚金药材1 g),置具塞锥
形瓶中,精密加入40 %乙醇溶液25 mL,称定质量,
超声处理(功率250 W,频率50 kHz)20 min,取出,
放冷,再称定质量,用40 %乙醇溶液补足减失的质
量,摇匀,滤过,取续滤液,即为水煎剂溶液。
2.4 色谱条件 色谱柱为Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6
mm×250 mm,5μm);以乙腈为流动相A,以0.1 %
磷酸水溶液为流动相B,梯度洗脱:0~45 min,15 %
~37.5 % A;柱温:35℃;流速:1 mL·min-1,检测
波长:340 nm,进样量:10μL。
2.5 方法学考察
2.5.1 系统适用性及专属性试验 取芹菜素对照品溶
液、配方颗粒溶液(批号:15012215)和阴性溶液依法
进样检测,考察实验方法的适用性及专属性。结果
表明,样品中各个峰分离较好,峰形对称,并且阴
性无干扰,该方法专属性良好,见图1。
2 .5.2 精密度试验 取独脚金配方颗粒(批号:
15012215)溶液,连续进样 6 次,考察仪器的精密
度。将所得色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统》(2008版),并以芹菜素为参照,计算主要色
谱峰相对保留时间的RSD。结果所得色谱图相似度
均为1。主要色谱峰相对保留时间的RSD在0~0.21%
之间,均<2 %。说明该仪器的精密度符合分析方法
的要求。
2.5.3 重复性试验 制备6份独脚金配方颗粒(批号:
15012215)溶液并进行检测,考察试验方法的重复
847· ·
Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2016 November,Vol. 27 No. 6
性。将所得色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评
价系统》(2008版),并以芹菜素为参照,计算主要色
谱峰相对保留时间的RSD。结果所得色谱图相似度
均大于 0.999。主要色谱峰相对保留时间的 RSD 在
0~0.41 %之间,均<2 %,说明该方法重复性良好。
2.5.4 稳定性试验 取独脚金配方颗粒溶液(批号:
15012215),分别在0,2,4,8,12,24 h检测,考
察供试品溶液的稳定性。将所得色谱图导入《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统》(2008版),并以芹菜素
为参照,计算主要色谱峰相对保留时间的RSD。结
果所得色谱图相似度均为1。主要色谱峰相对保留时
间的RSD在0~0.44 %之间,均<2 %,说明该样品
在24 h内稳定。
2.5.5 耐用性试验 取独脚金配方颗粒溶液(批号:
15012215),在原色谱条件基础上,对色谱柱(Accrom
XAqua C18、 Welch Ultimate XB-C18、 Phenomenex
Gemini C18、Inertsil ODS-SP、Accrom Unitary C18)、柱
温(25,30,35℃)、流速(0.8,1.0, 1. 2 mL·min-1)、
酸度(0.05 %、0.1 %、0.2 %磷酸)及流动相比例进行
了耐用性考察,结果发现色谱峰分离度受上述色谱
条件影响不大,耐用性较好。因此该色谱方法可作
为独脚金配方颗粒特征图谱的色谱条件。
2.6 特征图谱的采集及相关性研究
2.6.1 特征图谱的采集 按照2.2项下的供试品处理
方法及2.4项下的色谱条件分别对10批独脚金饮片、
10批水煎液、10批配方颗粒进行测定,得到各批次
样品的HPLC色谱图,见图3~图5。在30批样品图
谱中,芹菜素色谱峰的分离较好,峰面积大小适中,
在图谱中较稳定且为所有样品共有,因此确定芹菜
素为参比峰(S)。
2.6.2 独脚金饮片、水煎液、配方颗粒特征图谱的相
关性 由图2可见,独脚金配方颗粒(C)与水煎剂(B)
成分基本一致,而水煎液及配方颗粒 2 号峰消失,
增加1号峰,其中 3,4,5号峰相对峰面积明显增
加。7个主要成分3号~9号峰在饮片、水煎剂及配
方颗粒中均存在。该特征图谱数据表征独脚金配方
颗粒与水煎剂化学成分基本一致,这表明了该配方
颗粒药用物质基础与饮片、水煎剂保持基本一致。
图 2 独脚金饮片(A)、水煎剂(B)、配方颗粒(C)特征图谱
Figure 2 Characteristic pattern ofStriga asia ica(L.) O.Ktze.
slice pieces,decoctions,and formula granules
2.6.3 共有峰的标定 分别建立独脚金配方颗粒、水
煎剂、饮片的HPLC特征图谱,见图 3~图5。通过
比对3者的特征图谱,选定均有的7个特征峰(1~7号
峰)作为共有峰,通过与对照品对照,鉴别了2个特
征峰,其中4号峰与木犀草素对照品保留时间及紫
外光谱一致,6号峰与芹菜素对照品保留时间及紫外
光谱一致,以芹菜素相应的峰为参照峰(S峰),计算
各特征峰相对于S峰的相对保留时间,其相对保留
时间应在规定值的±5 %之内。10批配方颗粒特征图
谱共有模式色谱图见图6,相对保留时间见表1,相
对峰面积见表 2。各峰重复性好、相对保留时间稳
定,可作为该产品特征图谱的共有峰,用于生产过
程各环节的质量控制。
2.6.4 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统软件》(2008 版),以生成的对照谱图为参
照,各批次供试品特征图谱与对照谱图进行比较,
分别计算10批独脚金饮片、10批水煎液、10 批配
方颗粒的相似度,结果见表 3。10批独脚金药材特
征图谱的相似度均在0.95以上,说明10批不同来源
的独脚金药材成分有良好的相似性;10批独脚金水
煎剂特征图谱及10批独脚金配方颗粒特征图谱的相
似度亦均在0.95以上。所标定7个共有特征峰,经
多批次产品验证,各峰均可在配方颗粒、水煎剂、
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
1. 芹菜素对照品;2. 配方颗粒;3. 阴性溶液
图 1 专属性试验色谱图
Figure 1 Chromatograms of specific test
1
2
3
A
B
C
1
2
3
4
5
6
7
8
9
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中药新药与临床药理 2016年 11月第 27卷第 6期
R. 独脚金饮片对照谱图
图 5 10批独脚金饮片的 HPLC特征图谱
Figure 5 HPLC characteristic pattern of 10 batches ofStriga
asiatica(L.)O.Ktze. slice pieces
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
图 6 独脚金配方颗粒 HPLC特征图谱共有模式
Figure 6 Common pattern of HPLC characteristic pattern ofStriga
asiatica(L.)O.Ktze. formula granules
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
图 3 10批独脚金配方颗粒的 HPLC特征图谱
Figure 3 HPLC characteristic pattern of 10 batches ofStriga
asiatica(L.)O.Ktze. formula granules
R. 独脚金水煎液对照谱图
图 4 10批独脚金水煎液的 HPLC特征图谱
Figure 4 HPLC characteristic pattern of 10 batches ofStriga
asiatica(L.)O.Ktze. decoction
t/min
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45







R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
表 1 10批独脚金配方颗粒共有峰相对保留时间
Table 1 Relative retention time of common peaks for 10 batches
ofStriga asiatica(L.)O.Ktze. formula granules
批号
14100901
14100902
14100903
14100904
14100905
15012211
15012212
15012213
15012214
15012215
平均值
RSD/%
1
.409
0.403
0.410
0. 11
0.409
0.409
0.404
0.404
0. 04
0.412
0.408
0.80
2
0.529
0.523
0.532
0.531
0.530
0.530
0.525
0.525
0.526
0.538
0.529
0.81
3
0.578
0.572
0.581
0.581
0.580
0.579
0.574
0.575
0.575
0.583
0.578
0.62
4
0.796
0.790
0.798
0.797
.796
0.796
0.793
0.794
0.793
0.796
0.795
0.29
5
0.833
.831
0.835
0.835
0.834
0.833
0.831
0.832
0.832
0.831
0.833
0.19
6(S)
1.000
.000
1.000
1.000
1.000
1.000
.000
1.000
1.000
.000
1.000
0
7
1.059
1.060
1.061
1.058
1.059
1.059
1.060
1.060
1.060
1.059
1.060
0.08
峰号
表 2 10批独脚金配方颗粒共有峰相对峰面积
Table 2 Relative peak areas of common peaks for 10 batches of
Striga asiatica(L.)O.Ktze. formula granules
批号
14100901
14100902
14100903
14100904
14100905
15012211
15012212
15012213
15012214
15012215
平均值
RSD/%
1
4.487
3.513
3.625
2.977
4.059
5.002
3.597
2.985
3.662
3.795
3.770
16.52
2
8.148
7.035
6.721
3.255
7.363
7.958
5.997
3.273
4.954
.035
5.974
9.99
3
3.044
2.581
2.032
1.766
2.194
3.015
1.826
1.736
2.286
2.997
2.348
22.53
4
0.412
0.409
0.394
0.308
0.376
0.414
0.301
0.296
0.348
0.356
0.361
13.01
5
0.622
0.542
0.395
0.488
0.605
0.629
0.519
0.483
0.411
0.506
0.520
5.70
6(S)
1.000
1.000
1.000
1.000
1.000
1.000
.000
1.000
.000
1.000
1.000
7
0.166
0.283
0.162
0.171
0.320
0.413
0.108
0.113
0.179
0.205
0.212
45.90
峰号



④ ⑤ ⑥ ⑦
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1


③ ④



R
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1



④⑤


木犀草素
芹菜素
849· ·
Traditional Chinese Drug Research & Clinical Pharmacology,2016 November,Vol. 27 No. 6
饮片特征图谱中得到追踪,表明了独脚金配方颗粒
与独脚金水煎剂、独脚金饮片在化学成分上的一致
性,从而说明产品生产工艺较稳定。
3 讨论
中药配方颗粒是以符合炮制规范的中药饮片为
原料,经现代工业提取、浓缩、干燥、制粒而成的
中药系列产品,作为新的饮片形式替代中药饮片供
临床辨证论治、随证加减、配方使用[10]。配方颗粒没
有了传统饮片赖以判别优劣的外形、气味等性状特
征,为保证具有传统饮片水煎剂的效能,完善的质
量标准显得尤为重要。由于饮片水煎剂含有多种组
分,在不同的处方治疗不同的病症中所起作用的组
分可能不同,因此,配方颗粒的质量标准需要反映
其整体质量[11]。中药特征图谱是中药整体性的化学表
征,是进行中药质量控制的重要方法[12]。
3.1 供试品溶液制备方法选择 黄酮类成分是独脚金
的主要化学成分,也是特征性成分[13-14]。为最大程度
地提取该类成分,实验中对提取溶剂(不同浓渡的乙
醇)、提取方式(超声、回流)、提取时间(10,
15,20,30 min)进行了考察。结果表明采用本研究
的提取方法,独脚金配方颗粒的色谱峰的数目基本
一致,在40 %乙醇超声20 min时4~7号4个较小峰
响应值最大,故最终确定了供试品溶液的制备方法。
3.2 色谱条件选择 通过全波长扫描各色谱峰的最大
吸收波长在(340±10)nm,故选择340 nm为检测波
长。实验中分别考察了乙腈 -0.1 %甲酸水、乙腈 -
水、乙腈-0.1%磷酸水和乙腈-0.4%磷酸系统,通过
比较发现,酸的种类及浓度不影响色谱峰分离效果,
故本实验最终选择乙腈-0.1 %磷酸水系统。同时进行
了耐用性考察,结果发现色谱峰分离度耐用性较好。
3.3 相关性分析 由于配方颗粒是传统水煎剂的改进
剂型,因此以药材(饮片)、水煎剂、配方颗粒的相
关性为基础的特征图谱研究可以准确地表达其特征
的追溯性[15]。本研究表明,所拟定的独脚金配方颗粒
特征图谱与独脚金饮片、水煎剂特征图谱相似性高、
化学成分基本一致,能够准确地反映药材、水煎剂
和配方颗粒之间的化学成分的可追溯性。从所得特
征图谱的分析结果来看,10个批次的配方颗粒共有
的色谱峰有 7 个,相对保留时间分别为:0.408(峰
1)、0.529(峰2)、0.578(峰3)、0.795(峰4)、0.833(峰
5)、1.00(峰6)、1.060(峰7),其中峰4为木犀草素,
峰 6 为芹菜素,所得共有峰的相对保留时间稳定。
形成的独脚金配方颗粒的特征图谱可用于独脚金配
方颗粒的质量控制,也可用于生产过程各环节的质
量控制。
参考文献:
[1] 江苏新医学院. 中药大辞典(下册)[M]. 上海:上海科学技术出版
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(编辑:梁进权)
表 3 独脚金饮片、水煎剂及配方颗粒的相似度数据
Table 3 Results of similarities of HPLC characteristic
chromatogram of 10 batches ofStriga asiatica(L.)O.Ktze. slice
pieces,decoction,and formula granules
饮片编号
01-01
01-02
01-03
01-04
01-05
01-06
01-07
01-08
01-09
01-10
相似度
0.983
0.952
0.989
0.993
0.989
0.993
0.994
0.975
0.993
0.977
水煎剂编号
02-01
02-02
02-03
02-04
02-05
02-06
02-07
02-08
02-09
02-10
相似度
0.966
0.968
0.964
0.964
0.965
0.964
0.974
0.974
0.964
0.977
配方颗粒批号
14100901
14100902
14100903
14100904
14100905
15012211
15012212
15012213
15012214
15012215
相似度
.999
.965
.985
.994
.993
0.971
0.999
0.956
0.994
0.958
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