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平卧菊三七提取及抗菌作用的研究



全 文 :食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY提取物与应用
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2014年 第39卷 第4期
收稿日期:2013-10-11
基金项目:国家自然科学基金项目(31160320)。
作者简介:郑国栋(1969—),男,福建长乐人,博士,副教授,研究方向为天然产物提取分离和功能食品。
郑国栋,帅丽乔娃,黎冬明,朱玉婷
(江西农业大学江西省天然产物与功能食品重点实验室,南昌 330045)
摘要:用70%乙醇提取平卧菊三七,浓缩后分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯进行萃取。水相
(萃余相)过HPD600大孔树脂后,用HPLC分离。分离得到不同提取物进行3种细菌和2种真菌的
抑菌试验。结果表明,各萃取物对真菌抑制效果不显著,但乙酸乙酯和水相对细菌有明显抑
制作用,其中水相效果最好,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为22.9 mm。水相中分离的4种组
分均有较好的抑菌效果,其中F1对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达24.7 mm。
关键词:平卧菊三七;提取物;抑菌作用
中图分类号:R 284.2 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2014)04-0218-04
Extraction and antibacterial effects of Gynura procumbens leaves
ZHENG Guo-dong, SHUAI Li-qiaowa, LI Dong-ming, ZHU Yu-ting
(Jiangxi Key Laboratory of Natural Product and Functional Food, Jiangxi Agricultural
University, Nanchang 330045)
Abstract: 70% ethanol extracts from Gynura procumbens were extracted by petroleum ether, chloroform,
ethyl acetate. The water extract (raffi nate phase) was farther isolated by HPD600 macroporous resin and
HPLC. The crude extracts were tested antibacterial effects for three species of bacteria and two species
平卧菊三七提取及抗菌作用的研究
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DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2014.04.048
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FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 提取物与应用
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2014年 第39卷 第4期
平卧菊三七[Gynura procumbens (Lour.) Merr.]
为菊科三七属,多年生草本植物,在东南亚很早
就作为食品食用,在我国2012年5月平卧菊三七被
国家卫生部指定为新资源食品。研究表明,平卧
菊三七有许多生理作用,如降糖[1-2]、降压[3-5]、降
脂[6]等。其主要活性成分有绿原酸、黄酮类、生物
碱、萜烯类、香豆素类、挥发油等[7-9]。该植物于
21世纪初由印尼引进,在江西省都昌县等地成功
进行无性繁殖并大面积推广,产量大,成本低,
有很好开发潜力。本文对平卧菊三七叶提取纯化
及抑菌作用进行了比较,为提高引进新植物的开
发与利用提供理论和试验依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
平卧菊三七叶:江西农业大学中药园,烘干
粉碎后过筛40目,装袋备用;琼脂粉、牛肉膏:
北京奥博星生物技术责任有限公司;蛋白胨:天
津英博生化试剂有限公司;HPD600大孔树脂:沧
州宝恩吸附材料科技有限公司;氯化钠、乙醇、
石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、氢氧化钠等:
分析纯。
大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌
(Staphylococuus aureus)、沙门氏菌(Salmonella)、
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、黑曲霉
(Aspergillus niger):江西农业大学食品科学与工程
学院微生物实验室。
1.2 仪器与设备
1525型高效液相色谱仪:美国Waters公司;
Q型超纯水机:美国Millipore公司;FD-1型冷冻干
燥机:北京博医康技术公司;超声波清洗器:昆
山市超声仪器有限公司;旋转蒸发仪:上海亚荣
生化仪器厂;BYY-200药品冷藏箱、LDZX-40B自
动式电热压力蒸汽灭菌锅、HHB111-600电热恒温
干燥培养箱:上海申安医疗器械厂。
1.3 试验方法
1.3.1 平卧菊三七提取物分离纯化 工艺流程图如
图1所示。
图1 平卧菊三七提取工艺流程图
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of fungi. The results showed that the extracts no signifi cant effect on fungi, but ethyl acetate extract and
water extract had relatively antibacterial effects, and water extracts was best, diameter of antibacterial
was 22.9 mm on Staphylococcus aureus. The four components from water extracts separation had
antibacterial effect, and antibacterial diameter of F1 was 24.7 mm on Staphylococcus aureus.
Key words: Gynura procumbens; extracts; antibacterial effects
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1.3.2 平卧菊三七的水相组分分离纯化 水相浓
缩后,用HPD600大孔树脂吸附,再用乙醇梯度洗
脱,30%和50%乙醇洗脱液中浓缩后,用HPLC分
离得到F1~F4这4种不同组分。
1.3.3 抑菌试验 将灭菌好的琼脂培养基冷却到约
50 ℃后,接入10%的菌悬液(含菌量为107~109 cfu/
mL),混合均匀。将15 mL含有指示菌的培养基倒
入培养皿,一个培养皿放3个牛津杯,加入待测样
品浓度均为10 mg/mL(空白组用无菌水)。将培养皿
放在37 ℃恒温培养箱中培养24 h后,用十字交叉
法测量抑菌圈直径。每个样品做3个重复。所有操
注:A为30%酒精洗脱液,B为50%酒精洗脱液;1、2、3、4表示4种
不同组分。
图2 乙醇洗脱液HPLC分析






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#
表1 平卧菊三七不同萃取相的抑菌效果
供试样 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 大肠杆菌 酿酒酵母 黑曲霉
空白组 - - - - -
石油醚相 13.3±0.1 13.7±0.1 - - -
氯仿相 12.8±0.1 - 13.2±0.2 - -
乙酸乙酯相 21.5±0.1 15.2±0.1 15.9±0.1 13.1±0.1 12.1±0.2
水相 22.9±0.2 16.7±0.2 17.8±0.1 12.6±0.2 -
注:-.抑菌圈直径﹤12 mm。
表2 水相不同组分的抑菌效果
供试样 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 大肠杆菌 酿酒酵母 黑曲霉
空白组 - - - - -
F1 24.7±0.2 15.8±0.1 18.9±0.1 13.2±0.2 -
F2 18.7±0.1 15.3±0.2 15.1±0.1 14.6±0.2 -
F3 21.3±0.2 17.1±0.1 16.2±0.2 - -
F4 19.3±0.3 16.3±0.1 13.0±0.1 13.0±0.2 -
  注:-:抑菌圈直径﹤12 mm。
2.2 平卧菊三七萃余相的分离纯化
由于水相有较好的抑菌作用,我们对水相提
取物进行进一步纯化。提取物通过HPD600大孔树
吸附后,用10%、30%、50%、70%、90%的乙醇
浓度洗脱。10%、70%、90%乙醇洗脱的HPLC图
无明显的峰,而30%和50%乙醇洗脱分别有一个
和3个明显的峰出现(见图2),其他浓度无明显峰出
现。收集4个峰成分,浓缩干燥,得到F1~F4这4种
组分用于下面的抑菌试验。
2.3 水相分离得到4种组分的抑菌效果
从表2中得知,水相中分离出4种组分对细菌
均有抑制作用,其中F1对金黄色葡萄球菌和大肠
杆菌的抑菌圈直径分别达到24.7、18.9 mm,其
抑制效果最好,F2对酵母菌有一定抑制作用,但
4种组分对黑曲霉无抑制效果。水相中多酚类和
绿原酸等化合物有抑菌作用[10]。Iskander等人[11]
的研究发现平卧菊三七粉末有消炎功效,可能与
乙酸乙酯相和水相组分有关。表2中所体现出F1组
作均在超净工作台上完成。
2 结果与分析
2.1 平卧菊三七不同萃取物抑菌效果
表1是不同萃取物的抑菌作用。由表1可知,
乙酸乙酯和水相的萃取物对金黄色葡萄球菌、沙
门氏菌和大肠杆菌生长有较强抑制作用,特别是
水相萃取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达到
22.9 mm。石油醚和氯仿的萃取物抑菌效果不明
显。所有萃取物对酿酒酵母和黑曲霉的抑菌效果
均不明显。
分有很强抑菌作用,分析得知F1组分主要成分为
绿原酸[9]。
3 小结
平卧菊三七叶70%乙醇提取物中水相和乙酸
乙酯相对细菌有较强的抑制作用,特别是水相的
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抑菌效果最好,但对黑曲霉和酿酒酵母的抑制效
果不明显。进而从水相中分离出4种组分均有较强
的抑菌效果。今后需进一步对水相和乙酸乙酯相
成分进行分离纯化,探讨平卧菊三七的何种成分
有抑菌作用及其作用机制,为平卧菊三七的开发
与利用提供理论基础。
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