全 文 ：通讯作者:赵婉 Tel:15399055091 E-mail:zhaowan15399055091@ 163． com
HPLC 法同时测定神农茶颗粒中的夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去
氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸
赵婉 刘娜 雷建林 (西安交通大学第二附属医院 西安 710004)
摘 要 目的:建立同时测定神农茶颗粒中夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯、4，5-二咖啡酰奎宁酸 4 个成分的高效液
相色谱测定方法。方法:采用 Hypersil C18色谱柱( 200 mm ×4． 6 mm，5 μm) ;以乙腈-0． 025 mol·L
－1磷酸溶液为流动相进行梯
度洗脱，体积流量: 1． 3 ml·min －1，检测波长: 270 nm( 夏佛塔苷和异夏佛塔苷) 、208 nm( 去氧地胆草内酯) 、327 nm( 4，5-二咖
啡酰奎宁酸) ，柱温为室温。结果:夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸分别在5． 850 ～ 117． 000，
4． 650 ～ 93． 000，4． 160 ～ 83． 200，5． 470 ～ 109． 400 μg·ml －1范围内线性良好，r 值均大于0． 999，平均加样回收率分别为
97． 70%、96． 87%、97． 53%、99． 29%，RSD分别为1． 40%、1． 13%、1． 69%、1． 01% ( n = 6) 。结论:该方法简便，结果准确，可用
于神农茶颗粒的含量测定。
关键词 神农茶颗粒;夏佛塔苷;异夏佛塔苷;去氧地胆草内酯; 4，5-二咖啡酰奎宁酸;广金钱草;地胆草
中图分类号:R927． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)05-0741-04
Simultaneous Determination of Schaftoside，Isoschaftoside，Deoxyelephantopin and 4，5-Dicaffeoylquinic
Acid in Shennongcha Granules by HPLC
Zhao Wan，Liu Na，Lei Jianlin (The Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University，Xi＇an 710004，China)
ABSTRACT Objective:To establish an HPLC method for determining four constituents (schaftoside，isoschaftoside，deoxyelephan-
topin and 4，5-dicaffeoylquinic acid)in Shennongcha granules． Methods:An HPLC method was performed on a Hypersil C18 column
(200 mm ×4． 6 mm，5 μm)with the mobile phase of acetonitrile as the phase A and 0． 025 mol·L －1 phosphoric acid solution as the
phase B with gradient elution． The flow rate was 1． 3 ml·min －1 ． The detection wavelength was set at 270 nm for schaftoside and isos-
chaftoside，208 nm for deoxyelephantopin and 327 nm for 4，5-dicaffeoylquinic acid． The column temperature was room temperature．
Results:The calibration curve was linear over the concentration range of 5． 850-117． 000 μg·ml －1 for schaftoside，4． 650-93． 000 μg
·ml －1 for isoschaftoside，4． 160-83． 200 μg·ml －1 for deoxyelephantopin and 5． 470-109． 400 μg·ml －1 for 4，5-dicaffeoylquinic
acid． The correlation coefficient of all curves was more than 0． 999． The average recoverywas 97． 70% (RSD = 1． 40%)，96． 87%
(RSD = 1． 13%)，97． 53%(RSD = 1． 69%)and 99． 29%(RSD = 1． 01%) (n = 6) ，respectively． Conclusion:The developed
HPLC method is simple，accurate，and can be used in the content determination of Shennongcha granules．
KEY WORDS Shennongcha granules;Schaftoside;Isoschaftoside;Deoxyelephantopin;4，5-Dicaffeoylquinic acid;Desmodii styra-
cifolii herba;Elephantopi herba
神农茶颗粒由广金钱草、地胆草、忍冬藤、金沙
藤、岗梅、布渣叶、水翁花、桑枝、滇竹叶、扭肚藤、狗
肝菜、鸭脚木皮等十二味中药材组成的复方制剂，具
有消暑清热，生津止渴的功效，是治疗伤风感冒的首
选药物之一，为黄棕色颗粒，味甜、微苦。原质量标
准对地胆草进行了定性鉴别研究［1］，但神农茶颗粒
中的定量测定研究目前未见报道，为了全面控制产
品的有效性和质量一致性，本文以广金钱草［2］中的
夏佛塔苷、异夏佛塔苷和地胆草［3］中的去氧地胆草
内酯、4，5-二咖啡酰奎宁酸作为指标性成分，采用多
波长 HPLC梯度洗脱法对 4 种成分同时定量测定，
以控制神农茶颗粒的产品质量，为完善该制剂质量
标准提供依据。
1 仪器与试药
安捷伦 1200 高效液相色谱仪(G1315B 可变波
长检测器)，Chemstation 色谱工作站;KQ-100E 超声
波清洗器(上海精密仪器仪表有限公司)。夏佛塔
苷对照品(批号:111912-201302，纯度:92． 5%)购自
中国食品药品检定研究院;异夏佛塔苷对照品(批
号:52012-29-0，纯度:98． 0%)、4，5-二咖啡酰奎宁酸
对照品(批号:32451-88-0，纯度:98． 0%)购自南京
森贝伽生物科技有限公司;去氧地胆草内酯对照品
(批号:29307-03-7，纯度:98． 0%)购自上海远慕生
物科技有限公司;神农茶颗粒(广州白云山汉方现
代药业有限公司生产，每袋装 10 g，批号见表 2);甲
醇、乙腈均为色谱纯;磷酸为分析纯。
147
中国药师 2015 年第 18 卷第 5 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 5
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
依利特 C18色谱柱(200 mm × 4． 6 mm，5 μm);
乙腈为流动相 A，0． 025 mol·L －1磷酸溶液为流动
相 B，梯度洗脱(0 ～ 11 min，20． 0% A;11 ～ 26 min，
20． 0%→29． 0% A;26 ～ 41 min，29． 0%→40． 0% A;
41 ～ 52 min，40． 0%→48． 0%A;52 ～ 60 min，48． 0%
→11． 0% A)［4 ～ 8］;检测波长(0 ～ 26 min，λ1 = 270
nm［9］;26 ～ 41 min，λ2 = 208 nm
［10］;41 ～ 60 min，λ3 =
327 nm［11］);体积流量为1． 3 ml·min －1;柱温为室
温;进样量:20 μl。此系统条件下所测组分与其他
组分分离效果良好，理论塔板数按夏佛塔苷计不得
低于 2 000，分离度均大于1． 5。
2． 2 溶液的制备
2． 2． 1 混合对照品溶液 精密称取 4 种对照品夏
佛塔苷11． 70 mg、异夏佛塔苷9． 30 mg、去氧地胆草
内酯8． 32 mg和 4，5-二咖啡酰奎宁酸10． 94 mg，分别
置于 20 ml量瓶中，加 80%甲醇溶解并稀释至刻度，
制成质量浓度分别为0． 585，0． 465，0． 416，0． 547 mg
·ml －1的对照品储备溶液。各精密吸取上述 4 种对
照品储备溶液1． 0，2． 0，2． 5，5． 0 ml置于同一个 50
ml量瓶中，加 80%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量
浓度分别为0． 011 7，0． 018 6，0． 020 8，0． 054 7 mg
·ml －1的混合对照品溶液。
2． 2． 2 供试品溶液 取本品适量，研细，取5． 0 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 80%甲醇 50
ml，称定重量，超声处理(100 W，40 kHz)40 min，放
冷，再称定重量，用 80%甲醇补足减失的重量，摇
匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2． 2． 3 阴性样品溶液 按神农茶颗粒处方比例和
制备工艺分别制成缺广金钱草的样品、缺地胆草的
样品，按照“2． 2． 2”项下供试品溶液的制备方法制
成缺广金钱草和缺地胆草阴性样品溶液。
2． 3 专属性试验
分别精密吸取 20 μl 的供试品溶液、混合对照
品溶液、缺广金钱草和缺地胆草阴性样品溶液，分别
注入液相色谱仪，记录色谱图。结果在与夏佛塔苷、
异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁
酸对照品色谱图相应的保留时间处，供试品溶液色
谱图中有各组分对应的吸收峰;而缺广金钱草阴性
样品溶液色谱图中未显示夏佛塔苷和异夏佛塔苷吸
收峰;地胆草阴性样品溶液色谱图中未显示去氧地
胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸吸收峰，色谱图见
图 1。
A．对照品 B．供试品 C．缺广金钱草阴性样品溶液
D．缺地胆草阴性样品溶液 1．夏佛塔苷 2．异夏佛塔苷
3．去氧地胆草内酯 4． 4，5-二咖啡酰奎宁酸
图 1 HPLC色谱图
2． 4 线性关系考察
分别精密吸取各对照品储备溶液0． 1，0． 5，1． 0，
1． 5，2． 0 ml，分别置于 5 个 10 ml量瓶中，加 80%甲
醇稀释至刻度，摇匀，按“2． 1”项下色谱条件进行分
析测定，以峰面积(Y)与对照品质量浓度(X，μg·
ml －1)，绘制标准曲线，得到 4 种成分的回归方程、相
关系数，结果见表 1。
表 1 4 个成分的线性方程、相关系数及线性范围
所测成分
线性范围
(μg·ml －1) 线性方程 r
夏佛塔苷
5． 85 ～
117． 00
Y = 1． 921 6 × 104X +
2． 457 × 102 0． 9995
异夏佛塔苷
4． 65 ～
93． 00
Y = 2． 075 2 × 104X －
3． 674 × 102 0． 9993
去氧地胆草内酯
4． 16 ～
83． 20
Y = 5． 610 3 × 104X －
2． 942 × 102 0． 9997
4，5-
二咖啡酰奎宁酸
5． 47 ～
109． 40
Y = 9． 840 7 × 104X +
5． 011 × 102 0． 9999
结果表明:夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草
内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸在各自的线性范围内，
所测组分质量浓度与峰面积线性关系良好。
247
www． zgys． org 研究论文
2． 5 精密度试验
取混合对照品溶液连续进样 6 次，分别记录 4
种成分的峰面积，夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆
草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸的 RSD 分别为
1． 09%、1． 32%、0． 94%、0． 75%(n = 6)。表明仪器
精密度良好。
2． 6 重复性试验
称取同一批号供试品，按供试品溶液制备方法
制备 6 份供试品溶液，按照“2． 1”项下色谱条件依
法进样测定，计算各成分含量和 RSD，夏佛塔苷、异
夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸
的平均含量分别为 0． 123，0． 183，0． 218，0． 539 mg·
g － 1，其 RSD 分别为0． 98%、1． 57%、1． 21%、0． 68%
(n = 6)。表明本法测定重复性良好。
2． 7 稳定性试验
取同一供试品溶液分别于 0，2，4，6，8，12 h 进
样 20 μl进行分析，记录各组分峰面积值。夏佛塔
苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰
奎宁酸的 RSD 分别为 1． 03%、1． 37%、0． 76% 和
0． 81%(n = 6)，表明供试品溶液在 12 h基本稳定。
2． 8 加样回收率试验
取已知含量的同一批神农茶颗粒(夏佛塔苷为
0． 124 mg·g －1，异夏佛塔苷为0． 183 mg·g －1，去氧
地胆草内酯为0． 217 mg·g －1，4，5-二咖啡酰奎宁酸
为0． 539 mg·g －1)适量，研细，分别取2． 5 g，共 6
份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入混合对照
品溶液 25 ml、80%甲醇 25 ml，称定重量，超声处理
(100 W，40 kHz)40 min，放冷，再称定重量，用 80%
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为加
样供试品试液。按“2． 1”项下色谱条件进样测定，
计算各组分回收率，结果夏佛塔苷、异夏佛塔苷、去
氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡酰奎宁酸的平均回收
率分别为97． 70%(RSD = 1． 40%)、96． 87%(RSD =
1． 13%)、97． 53%(RSD = 1． 69%)、99． 29%(RSD =
1． 01%)(n = 6)。表明所测各组分回收率良好。
表 2 含量测定结果(mg·g －1，n =3)
批号 夏佛塔苷 异夏佛塔苷 去氧地胆草内酯
4，5-二咖
啡酰奎宁酸
1310065 0． 124 0． 183 0． 217 0． 539
1310028 0． 132 0． 197 0． 209 0． 516
1311012 0． 119 0． 186 0． 231 0． 542
1312026 0． 117 0． 162 0． 226 0． 561
1312070 0． 128 0． 192 0． 234 0． 573
1312084 0． 137 0． 185 0． 207 0． 510
1402019 0． 141 0． 198 0． 229 0． 549
1402059 0． 134 0． 201 0． 235 0． 547
1403017 0． 112 0． 165 0． 203 0． 505
1403057 0． 125 0． 189 0． 242 0． 586
2． 9 样品测定
取 10 个批号的样品，依据“2． 2． 2”项下供试品
制备方法，按“2． 1”项下色谱条件测定本品中夏佛
塔苷、异夏佛塔苷、去氧地胆草内酯和 4，5-二咖啡
酰奎宁酸的含量，结果见表 2。
3 讨论
3． 1 在流动相的选择中，曾考察不同比例的乙腈-
水［6］、甲醇-0． 1% 乙酸溶液［2］、乙腈-0． 1% 磷酸溶
液［11］、乙腈-0． 025 mol·L －1磷酸溶液［9］为流动相梯
度洗脱，结果以乙腈-水不同比例梯度洗脱时，去氧地
胆草内酯峰型良好，但其他 3 个组分分离效果差;以
甲醇-0． 1%乙酸溶液不同比例梯度洗脱时，夏佛塔苷
和异夏佛塔苷峰型对称，但去氧地胆草内酯和 4，5-二
咖啡酰奎宁酸拖尾现象严重;以乙腈-0． 1%磷酸溶液
不同比例梯度洗脱时，夏佛塔苷和异夏佛塔苷分离效
果较差。而以乙腈-0． 025 mol·L －1磷酸溶液不同比
例为流动相梯度洗脱时，所测各组分峰型良好，各组
分均能达到基线分离，分离度均大于1． 5。
3． 2 为了尽可能提取所测的目标成分，考察了供试
品的制备方法，包括提取溶剂及比例(甲醇、80%甲
醇、60%甲醇及乙醇)、提取方法(超声提取、回流提取
及浸渍提取)、提取时间(20，40，60 min)，结果采用
80%甲醇超声处理 40 min样品基本可以提取完全。
3． 3 方中忍冬藤为忍冬科植物忍冬的干燥茎枝，本
文试验中所采用的忍冬藤原药材产地为陕西，试验
中曾对忍冬藤原药材中的 4，5-二咖啡酰奎宁酸进
行了测定研究，试验结果表明，本文试验所采用的陕
西产忍冬藤中未检出 4，5-二咖啡酰奎宁酸，与本文
正文“2． 3”项专属性考察中地胆草空白溶液检测结
果相吻合。考虑到不同产地忍冬藤原药材所含组分
有所差异，暂不将地胆草中所含 4，5-二咖啡酰奎宁
酸作为神农茶颗粒的质量控制指标。故根据所测各
组分平均值的 80%，暂定神农茶颗粒每克含广金钱
草以夏佛塔苷计不得低于0． 10 mg·g －1，以异夏佛
塔苷计不得低于0． 15 mg·g －1;每克含地胆草以去
氧地胆草内酯计不得低于0． 17 mg·g －1。
参 考 文 献
1 国家药品标准［S］． 中药成方制剂．第 11 册． 1998． 148
2 中国药典［S］． 2010 年版．一部． 41-42，附录 30，附录 36
3 中国药典［S］． 1977 年版．一部． 202
4 杨全，桑雪雨，唐晓敏，等．不同产地广金钱草夏佛塔苷含量比较
［J］．吉林农业大学学报，2013，35(3):308-311，323
5 陈丰连，张文进，徐鸿华．不同采收期及不同产地广金钱草地上部
分 HPLC 指纹图谱研究［J］． 中国实验方剂学杂志，2010，16
(14):96-98
6 吴春，肖嘉棠，吴霞，等． 地胆草指纹图谱研究和 3 种活性成分的
含量测定［J］．时珍国医国药，2013，24(7):1643-1645
347
中国药师 2015 年第 18 卷第 5 期 China Pharmacist 2015，Vol． 18 No． 5
通讯作者:辛华雯 Tel:(027)50772991 E-mail:
櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊櫊
huawenxin@ 163． com
7 周子力，肖锋，杨静，等． RP-HPLC 同时测定广金钱草中的 vice-
nin-1、夏佛塔苷和 vicenin-3［J］．华西药学杂志，2013，28(6):609-
611
8 马杰，童珂，罗晖明，等．高效液相色谱法测定复方石淋通胶囊中
夏佛塔苷的含量［J］．中南药学，2013，11(7):539-541
9 蒲晓辉，赵辉，袁琦，等． RP-HPLC法同时测定广金钱草中夏佛塔
苷和异夏佛塔苷［J］．中成药，2014，36(9):1909-1912
10 吴静，孙莉，汪剑飞，等．地胆草中去氧地胆草内酯的定性和定量
方法研究［J］．安徽医药，2014，18(10):1862-1865
11 邹昱蕾，耿家玲． HPLC法测定地胆草中 4，5-二咖啡酰奎宁酸的
含量［J］．中国药师，2014，17(2):312-314
(2014-11-26 收稿 2015-01-15 修回)
高效液相色谱-荧光法测定肾移植受者血浆中霉酚酸的浓度
钟建勋1，2 辛华雯1 李维亮1 熊磊1 (1．广州军区武汉总医院临床药理科 武汉 430070;2．湖北中医药大学)
摘 要 目的:建立以 HPLC荧光检测法测定人血浆中霉酚酸浓度的方法。方法:霉酚酸血浆样品经乙腈沉淀后取 20 μl直
接进样，色谱柱为 Hypersil BDS C18 ( 250 mm ×4． 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-甲醇-0． 2 mol·L
－1磷酸氢二钾缓冲溶液( pH =
9． 0) ( 18∶ 2∶ 80) ，柱温 25℃，流速为1． 0 ml·min －1，激发波长( Ex ) 为 342 nm，发射波长( Em ) 为 425 nm。结果:血浆内源性杂
质和合并用药对测定无干扰，霉酚酸检测浓度在0． 25 ～ 50． 00mg·L －1范围内线性关系良好( r = 0． 999 7) ，定量下限为0． 25 mg
·L －1 ;平均方法回收率为99． 12%，平均提取回收率为93． 27% ;日内 RSD小于 2%，日间 RSD小于 6%。10 例肾移植患者服用
霉酚酸酯的剂量为0． 5 ～ 1． 75 g·d －1，血浆中霉酚酸浓度范围为0． 43 ～ 21． 58 mg·L －1。结论:本法快速、灵敏、准确、方便，可
用于体内霉酚酸血药浓度分析及常规血药浓度监测。
关键词 高效液相色谱-荧光检测;肾移植;霉酚酸; 血药浓度
中图分类号:R969． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)05-0744-04
Determination of Plasma Concentration of Mycophenolic Acid in Renal Transplantation Patients by HPLC-
fluoremetry
Zhong Jianxun1，2，Xin Huawen1，Li Weiliang1，Xiong Lei1(1． Department of Clinical Pharmacology，Wuhan General Hospital of Guang-
zhou Military Command，Wuhan 430070，China;2． Hubei University of Traditional Chinese Medicine)
ABSTRACT Objective:To establish an HPLC-fluoremetry method for determination of the plasma concentration of mycophenolic
acid (MPA)in renal transplantation patients． Methods:The sample was subjected to precipitate proteins using acetonitrile，and the
supernatant (20 μl)was used for the sample injection and determination on a Hypersil BDS C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)column
with temperature at 25℃ ． The mobile phase consisted of acetonitrile-methanol-0． 2 mol·L －1 dipotassium hydrogen phosphate buffer
(pH = 9． 0)(18∶ 2∶ 80)with the flow rate of 1． 0 ml·min －1 ． The excitation wavelength (Ex)was 342 nm and the emission wave-
length (Em)was 425 nm． Results:The endogenous plasma impurities and drug combinations had no interference with the determina-
tion． The calibration curve was linear over the range of 0． 25-50． 00 mg·L －1(r = 0． 999 7)，and the lower limit of quantification was
0． 25 mg·L －1 ． The mean methodological recovery was 99． 12% and the mean extraction recovery was 93． 27%，the intra-day RSD
was less than 2% and the inter-day RSD was less than 6% ． Totally 10 cases of renal transplantation patients were with mycophenolate
mofetil at the dose of 0． 5-1． 75 g·d －1，and MPA in plasma was within the range of 0． 43-21． 58 mg·L －1 ． Conclusion:The method
is rapid，sensitive，accurate and convenient，which can be used in the quantitative determination of plasma concentration of MPA in re-
nal transplantation patients．
KEY WORDS HPLC-fluoremetry;Renal transplantation;Mycophenolic acid;Plasma concentration
吗替麦考酚酯(mycophenolate mofetil，MMF)是
一种新型的免疫抑制药，口服后在体内代谢为活性
产物霉酚酸(mycophenolic acid，MPA)，能有效地防
止同种异体实体器官移植后的排斥反应［1］。MPA
可抑制 T、B 淋巴细胞中嘌呤的合成来减少免疫活
性淋巴细胞进而抑制排斥反应［2］。MPA 在不同个
体间药代动力学差异大，且在治疗中常常合用其他
药物，因此临床血药浓度监测很有必要。现有报道
大部分采用高效液相色谱-紫外检测器法测定其浓
度［3，4］，少量报道采用高效液相色谱-质谱联用检测
其浓度［5］。本实验参考国内外文献，建立高效液相
色谱-荧光检测器法测定人血浆中霉酚酸浓度。
1 仪器与试药
1． 1 仪器
Agilent 1100 高效液相色谱仪(包括 G1311A型
四元泵，DG230-4 在线脱气机，G1313A 型自动进样
447
www． zgys． org 研究论文