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ＲP-HPLC法同时测定广金钱草中夏佛塔苷和异夏佛塔苷
蒲晓辉， 赵 辉， 袁 琦， 郭 猛， 陈永超， 贾 婉
(河南大学 药学院，河南 开封 475004)
收稿日期:2013-09-05
作者简介:蒲晓辉 (1980—)，男，博士，副教授，主要从事药物新剂型及质量分析的研究。Tel:(0378)3880680，E-mail:pgh425@
163． com
摘要:目的 用 ＲP-HPLC分离广金钱草中的夏佛塔苷和异夏佛塔苷，并对其进行定量测定。方法 色谱柱为依利特
C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 025 mol /L磷酸溶液 (三乙胺调 pH至 3. 02)(15 ∶ 85) ;柱温 30 ℃;
体积流量 0. 9 mL /min;检测波长 270 nm。结果 广金钱草中夏佛塔苷的线性方程为 Y = 2 × 106X － 153 980，进样量在
0. 158 ～ 0. 898 μg范围内线性关系良好 (r = 0. 999 7)，回收率为 100. 0%，ＲSD 为 0. 7%;异夏佛塔苷的线性方程为
Y = 3 × 106X － 86 359，进样量在 0. 076 ～ 0. 436 μg 范围内线性关系良好 (r = 0. 999 6)，回收率为 99. 9%，ＲSD 为
0. 6%。结论 增加异夏佛塔苷的色谱检测有利广金钱草及其制剂的质量控制。
关键词:广金钱草;夏佛塔苷;异夏佛塔苷;ＲP-HPLC
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)09-1909-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 09. 027
Simultaneous determination of schaftoside and isoschaftoside from Desmodium
styracifoolium (Osb．)merr by HPLC
PU Xiao-hui， ZHAO Hui， YUAN Qi， GUO Meng， CHEN Yong-chao， JIA Wan
(Pharmaceutical College of Henan University，Kaifeng 475004，China)
ABSTＲACT:AIM To establish a ＲP-HPLC method for separating and determining the contents of schaftoside
and isoschaftoside from Desmodium styracifoolium (Osb．)merr． METHODS The chromatographic analysis was
performed on C18column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)，the mobile phase was acetonitrile － 0. 025 mol /L phosphor-
ic acid solution (adjusted triethylamine to pH =3. 02) (15 ∶ 85)and the flow rate was 0. 9 mL /min． Column tem-
perature was maintained at 30 ℃ ． Detection wavelength was set at 270 nm． ＲESULTS The linear equation of
schaftoside was Y = 2 × 106X － 153 980 with a good linear relationship in the range of 0. 158 － 0. 898 μg (r =
0. 999 7)，the recovery rate was 100. 0%，and ＲSD was 0. 7% ． The linear equation of isoschaftoside was Y = 3 ×
106X － 86 359 with a good linear relationship in the range of 0. 076 － 0. 436 μg (r = 0. 999 6)，the recovery rate
was 99. 9%，and ＲSD was 0. 6% ． CONCLUSION Adding chromatographic inspection of isoschaftoside is fa-
vorable to the quality control of Desmodium styracifolium (Obs．)merr and its preparations．
KEY WOＲDS:Desmodium styracifoolium (Osb．)merr;schaftoside;isoschaftoside;HPLC
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2014
Vol． 36 No． 9
广金钱草为豆科植物广金钱草 Desmodium
styracifoolium (Osb．)merr 的干燥地上部分，以
“马蹄草”始载于 《岭南采药录》［1］。具有利湿退
黄、利尿通淋、清热祛湿、排石之功效，用于黄疸
尿赤、热淋、石淋、尿路感染等病症［2-3］。 《中国
药典》及《中药大辞典》中记载广金钱草主要含
有生物碱、黄酮、酚类、鞣质等成分［4-5］。其中夏
佛塔苷及其同分异构体———异夏佛塔苷，为广金钱
草中的芹菜素黄酮碳苷类成分，是其抗炎、清热祛
湿，利尿通淋等作用的重要活性成分［6］，本实验
采用 ＲP-HPLC法对广金钱草中的夏佛塔苷和异夏
佛塔苷进行分离和定量测定，为广金钱草及其制剂
的质量控制方法研究提供参考。
1 仪器、试剂和试药
1. 1 仪器 美国Waters e 2695 Separations Module、
Waters 2498 UV /Visible Detector、Empower 色谱工
作站;依利特 C18色谱柱 (250 mm × 4. 6 mm，5
μm);AS3120 超声波清洗器 (天津奥特赛恩仪器
有限公司);GM-0. 33A 隔膜真空泵 (天津市津腾
实验设备有限公司)。
1. 2 试剂和试药 夏佛塔苷和异夏佛塔苷对照品
为自行提取精制，并进行 IＲ，1H-NMＲ，13 C-NMＲ 鉴
定结构，高效液相法测定纯度大于 99. 2%［7］;乙
腈、甲醇 (色谱纯，天津四友精细化学品有限公
司);磷酸 (分析纯，天津市福晨化学试剂厂);
三乙胺 (分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公
司);纯净水 (新乡娃哈哈食品有限公司);广金
钱草药材购自开封市协和医药连锁有限公司，由河
南大学药学院中药教研室李钦教授鉴定均为豆科山
蚂蝗属植物广金钱草 Desmodium styracifoolium
(Osb．) merr 的干燥地上部分 (批号分别为
120907、121007、121023)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm);流动相为乙腈-0. 025 mol /L磷酸溶液 (三乙
胺调 pH至 3. 02)(15 ∶ 85) ;柱温 30 ℃;体积流
量 0. 9 mL /min;检测波长 270 nm;进样量 10 μL。
由色谱图可知，夏佛塔苷和异夏佛塔苷的色谱峰分
离度良好，见图 1。
2. 2 供试品溶液的制备 取本品粗粉约 0. 6 g，精
密称定，置于 100 mL 具塞锥形瓶中，加入 20 mL
甲醇，称定质量后，超声处理 40 min，放冷，再称
定质量，用甲醇补足失质量，摇匀，过滤，取续滤
液，即得。
A． 对照品 B． 空白溶剂 C． 广金钱草样品
1． 夏佛塔苷 2． 异夏佛塔苷
A． reference substances B． blank solvent C． sample
1． schaftoside 2． isoschaftoside
图 1 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms
2. 3 对照品溶液的制备 取夏佛塔苷和异夏佛塔
苷对照品适量，精密称定，分别置于 25 mL的量瓶
中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为贮备
液。再精密吸取 2 mL的夏佛塔苷贮备液和 1 mL的
异夏佛塔苷贮备液置于同一 5 mL 的量瓶中，加甲
醇稀释并定容至刻度，即得 0. 052 8 mg /mL的夏佛
塔苷和 0. 025 6 mg /mL 的异夏佛塔苷混合对照
品溶液。
2. 4 标准曲线制备 将进样量设置为 3、5、7、
10、13、15、17 μL，按照 “2. 1”项下色谱条件
测定色谱峰面积，分别以夏佛塔苷和异夏佛塔苷对
照品溶液的进样量 X (μg)对峰面积的积分值 Y
进行线性回归，得夏佛塔苷的回归方程为 Y = 2 ×
106X － 153 980，r = 0. 999 7，夏佛塔苷的进样质量
在 0. 158 ～ 0. 898 μg 内线性关系良好;异夏佛塔苷
的回归方程为 Y = 3 × 106X － 86 359，r = 0. 999 6，
异夏佛塔苷的进样质量在 0. 076 ～ 0. 436 μg 内线性
关系良好。
2. 5 精密度试验 取同一供试品试液，同法连续
进样 5 次，按照 “2. 2”项下色谱条件测定夏佛塔
苷和异夏佛塔苷的色谱峰峰面积，计算夏佛塔苷
ＲSD为 0. 8%，异夏佛塔苷 ＲSD为 1. 1%。
2. 6 重复性试验 按照 “2. 2”项下供试品溶液
的制备方法称取批号为 120907 的样品 6 份进行供
试品溶液制备，按照上述色谱条件分别测定 6 份样
品中夏佛塔苷和异夏佛塔苷的峰面积，计算夏佛塔
苷的重复性 ＲSD 为 0. 7%，异夏佛塔苷的重复性
ＲSD为 0. 8%。
2. 7 加样回收率试验 取 9 份批号为 120907 的广
金钱草粗粉约 0. 5 g，精密称定，分别置于 50 mL
具塞锥形瓶中，并分别加入 0. 052 8 mg /mL的夏佛
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塔苷对照品溶液 4. 0、5. 1、6. 1 mL 和 0. 051 3
mg /mL的异夏佛塔苷对照品溶液 4. 8、6. 0、7. 2
mL，并加入甲醇至 20 mL，制备成高、中、低 3 个
质量浓度的回收率样品，每个质量浓度平行操作 3
份;再按“2. 2”项下操作，计算其回收率。结果
见表 1。
表 1 回收率试验
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests
成分
称样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
(ＲSD/%)
夏佛塔苷 0. 498 0. 267 0. 211 0. 479 100. 47
0. 503 0. 268 0. 211 0. 481 100. 95
0. 500 0. 271 0. 211 0. 483 100. 47
0. 495 0. 269 0. 269 0. 536 99. 26
0. 502 0. 265 0. 269 0. 535 100. 37 100. 0
0. 498 0. 268 0. 269 0. 538 100. 37 (0. 7)
0. 497 0. 273 0. 322 0. 595 100. 00
0. 505 0. 269 0. 322 0. 587 98. 76
0. 500 0. 272 0. 322 0. 593 99. 69
异夏佛塔苷 0. 498 0. 308 0. 246 0. 553 99. 59
0. 503 0. 311 0. 246 0. 559 100. 81
0. 500 0. 309 0. 246 0. 556 100. 41
0. 495 0. 306 0. 308 0. 612 99. 35
0. 502 0. 310 0. 308 0. 619 100. 32 99. 9
0. 498 0. 308 0. 308 0. 615 99. 68 (0. 6)
0. 497 0. 307 0. 369 0. 675 99. 73
0. 505 0. 312 0. 369 0. 677 98. 92
0. 500 0. 309 0. 369 0. 679 100. 27
2. 8 稳定性试验 取供试品溶液，按照 “2. 1”
项下的色谱条件在提取后 2、4、6、8、10 h 分别
测定夏佛塔苷和异夏佛塔苷的峰面积。结果表明，
供试品溶液制备后 10 h 内测定，色谱峰面积均无
明显变化，其中夏佛塔苷的稳定性 ＲSD 为 0. 4%，
异夏佛塔苷的稳定性 ＲSD为 1. 1%。
2. 9 样品测定 按 “2. 2”项下方法制备供试液
后，进样，测定夏佛塔苷和异夏佛塔苷的峰面积，
带入标准曲线，计算即得，结果见表 2。
表 2 样品测定结果
Tab. 2 Content determination
样品批次
夏佛塔苷 /(mg·g － 1)
1 2 3 平均
异夏佛塔苷 /(mg·g － 1)
1 2 3 平均
120907 0. 532 0. 534 0. 533 0. 533 0. 615 0. 616 0. 617 0. 616
121007 0. 527 0. 525 0. 525 0. 526 0. 620 0. 618 0. 617 0. 618
121023 0. 538 0. 538 0. 537 0. 538 0. 620 0. 619 0. 620 0. 620
3 讨论
3. 1 样品处理方法的选择过程中，试用了水煎醇
沉法［8］、超声提取法［9］和微波提取法，根据回收
率试验结果可知，水煎醇沉法所得回收率最低，微
波提取法所得回收率居中，而超声提取法所得回收
率最高，故本实验选择了超声提取法来处理样品。
3. 2 在流动相筛选过程中，试用过流动相甲醇-
0. 1%磷酸水［10］，还分别尝试了乙腈-0. 025 mol /L
磷酸溶液 (三乙胺调 pH 至 3. 02)为 12 ∶ 88、
15 ∶ 85、16 ∶ 84、18 ∶ 82 等几个流动相配比［11］。
由各自的色谱图分析可知，前者峰形较差，而后者
流动相的配比为 15 ∶ 85 时，夏佛塔苷与异夏佛塔
苷的分离度较好，峰形也较好，因此选择此比例为
夏佛塔苷与异夏佛塔苷测定时流动相的配比。
3. 3 通过对文献进行综合分析可知，目前广金钱
草及其制剂的质量控制主要是以夏佛塔苷为指标成
分，尚未见有以其他成分为指标来控制其质量的报
道［12-17］。而其同分异构体———异夏佛塔苷，也是
其抗炎、清热祛湿，利尿通淋等作用的重要活性成
分，所以仅仅以单一成分夏佛塔苷来控制广金钱草
及其制剂的质量有些显得偏颇，因此本实验研究了
同时分离、测定夏佛塔苷及异夏佛塔苷的 HPLC
法，为更全面的控制其质量奠定一定的基础。
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珍珠粉的近红外光谱定性鉴别方法
张 轩1， 胡 超1， 闫 妍1， 杨海峰1， 白 桦1， 席广成1* ， 廖 杰2
(1． 中国检验检疫科学研究院 工业与消费品安全研究所，北京 100123;2． 浙江长生鸟珍珠生物科技有限
公司，浙江 诸暨 311800)
收稿日期:2014-06-05
基金项目:质检公益性科研专项 (2012104013-10)
作者简介:张 轩 (1985—)，男，硕士，助理工程师，从事消费品安全研究。Tel:(010)85783201，E-mail:zhangx@ caiq． gov． cn
* 通信作者:席广成 (1978—)，男，博士，副研究员。Tel:(010)85773355-2264，E-mail:xiguangcheng@ caiq． gov． cn
摘要:目的 采用近红外光谱方法定性鉴别珍珠粉真伪。方法 利用近红外漫反射光谱技术结合相似度匹配和判别分
析贝壳粉，牡蛎粉、石决明粉、滑石粉，纳米碳酸钙和珍珠粉定性鉴别。结果 珍珠粉相似度匹配值为 93 ～ 97 ，贝
壳粉为 77 ～ 87，其余粉小于 50。结论 设定 90 作为珍珠粉的相似度匹配阈值可以定性鉴别真伪珍珠粉。
关键词:珍珠粉;贝壳粉;近红外光谱;相似度匹配;判别分析
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2014)09-1912-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 09. 028
Qualitative identification of peal powder using near-infrared spectroscopy
ZHANG Xuan1， HU Chao1， YAN Yan1， YANG Hai-feng1， BAI Hua1， XI Guang-cheng1* ， LIAO Jie2
(1． Chinese Academy of Inspection and Quarantine，Institute of Industrial Product Inspection，Beijing 100123，China;2． Zhejiang Fenix Pearl Bio-tech
Co．，Ltd，Zhuji 311800，China)
ABSTＲACT:AIM To qualitatively identify the authenticity of pearl powder by near-infrared spectroscopy．
METHODS Near-infrared diffuse reflectance spectroscopy in combination with similarity match and discriminant
analysis was used to distinguish peal powder with the powders of shell，oyster，abalone，talc and nano calcium car-
bonate． ＲESULTS Similarity match value was in the range of 93 to 97 for pearl powder，of 77 to 87 for shell
powder，and of less than 50 for the rest powders． CONCLUSION This research provides a threshold of 90 for
the identification of the authenticity of pearl powder．
KEY WOＲDS:peal powder;shell powder;near-infrared spectroscopy;similarity match;discriminant analysis
近年来作为名贵中药材的珍珠粉［1］在医药、
保健品、化妆品等行业备受青睐，上市产品愈加丰
富、应用领域不断拓宽、经济价值日益增长，然而
假冒伪劣珍珠粉也应运而生。珍珠母贝壳和珍珠同
根同源，珍珠母贝壳粉即贝壳粉的微观形貌和化学
组成与珍珠粉相似［2］，时常被用来冒充珍珠粉流
入市场，甚至其他外观类似的白色粉末，如石决明
粉、滑石粉、碳酸钙粉等也被用来冒充珍珠粉，这
些假冒珍珠粉扰乱珍珠粉市场秩序、影响消费者身
心健康并阻碍了珍珠粉产业的健康发展。
现有研究采用热分析法、X射线衍射法、红外
光谱法等分析珍珠粉和贝壳粉的有机质含量和晶体
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