全 文 ：利用不同型号大孔树脂对田基黄水提成分进行分离
王永刚 1, 2 ,苏薇薇2 ,梁少玲 2
(1.南方医科大学中医药学院 ,广东广州 510515;2.中山大学华南创新中药研究开发与技术服务中心 ,广
东广州 510275)
　　摘要　目的:比较不同型号大孔吸附树脂对田基黄水提成分的分离作用。方法:对不同型号的大孔吸附树脂
经过预处理后 , 加入田基黄水提取液 ,分别洗脱后进行成分测定 , 比较其分离效果。结果:从不同型号的大孔吸附
树脂对田基黄黄酮的比吸附量和比洗脱量来看 ,性能最好的前三种树脂型号为 D101、860021、DM130, 均属于弱极
性类型的大孔吸附树脂。结论:D101型号大孔吸附树脂对黄酮的吸附-洗脱能力最强 ,从有效成分的富集和工业生
产成本来考虑 , 可选择 D101作为富集田基黄总黄酮的树脂吸附类型。
关键词　田基黄;大孔树脂
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1537-03
基金项目:广东省关键领域重点突破项目(200649843001)作者简介:王永刚 ,博士研究生;Tel:020-84110808, E-mail:kforest@ 163.com。
　　田基黄为藤黄科植物地耳草 Hypericumjapomi-
cumThumb.的干燥全草 ,含黄酮类 、酚类等多种化
学成分 〔1〕。笔者采用不同型号大孔树脂对田基黄
水提成分进行了分离研究 ,现报道如下。
1 　仪器与试药
高效液相色谱仪:ASI-100自动进样器 、ATH-
585柱温箱 、P680四元梯度泵 、PDA-100检测器(美
国戴安 DIONEX公司);色谱柱:MerckLichrospher
Rp-18e(5 μm, 250 mm×4.0 mm)。
田基黄干燥药材:购于广州清平药材批发市场 ,
产地广西梧州 ,中山大学生命科学院彭维副研究员
鉴定为田基黄;DA201、DM301大孔吸附树脂(天津
市海光化工有限公司);HPD600、HPD700大孔吸附
树脂(沧州宝恩化工有限公司 );DM130、 860018、
860021大孔吸附树脂 (山东鲁抗医药集团有限公
司);D101、AB-8大孔吸附树脂(安徽三星树脂科技
有限公司)。槲皮素对照品:批号 10081-9905,供含
量测定 ,中国药品生物制品检定所;镁粉:广州试剂
厂 ,批号 20030510。除高效液相色谱所用试剂为色
谱纯 ,工艺考察所用 95%乙醇为食用级酒精外 ,其
余试剂均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　各型号大孔吸附树脂的预处理　分别取各种
型号新购大孔吸附树脂 10.0g,平行取两份 ,一份干
燥恒重 ,得干树脂质量 ,另一份加入 95%乙醇 50 ml
浸泡 12小时 ,弃去上层漂浮物与碎粒 ,湿法装柱(15
mm×300mm),用水反洗树脂柱 ,至洗液澄清为止 ,
令树脂自然沉降。
采用两倍柱体积 95%乙醇和水交替冲洗两次
后 ,继续用 95%乙醇洗脱 ,不时取流出液适量 ,测定
250 nm处吸光度 ,记录所需洗脱的乙醇量(L)及吸
光度值。最后树脂柱用水洗至流出液无醇味 ,备用。
处理结果及所需乙醇量的比较见表 1。
　　表 1 　各型号大孔吸附树脂的预处理量及合格情况
型号 DA201 HPD700 DM301 860018 D101 AB-8 HPD600 DM130 860021
L(ml) 100 650 200 100 100 700 200 300 100
吸光度 0.131 0.857 0.105 0.245 0.074 1.024 0.197 0.116 0.183
合格 + - + + + - + + +
　　注:以吸光度 <0.25为预处理合格 , “ +”表示合格 , “ -”表示不合格 , L为醇洗量
2.2 　各大孔吸附树脂的动态吸附-洗脱性能考察
2.2.1　田基黄水提液的制备:取田基黄干燥全草 ,
剪成约 1 ～ 2 cm小段 ,取 125.0 g,加水煎煮三次 ,每
次加 20倍量水 ,煎煮 1 h。滤过 ,合并滤液 ,减压浓
缩至小体积 ,加水稀释 ,并定容至 250 ml,摇匀 ,即
得 。
2.2.2　吸附 -洗脱性能考察:各取 25 ml田基黄水
提液(生药浓度 0.5g/ml),分别通过 7种不同型号
预处理过的大孔吸附树脂柱 ,以 5 ml/min的流速进
行吸附 ,残留液重复吸附两次(用盐酸-镁粉检测 ,残
留液保证吸附过量)。接着用水洗至无色 , 再用
60%乙醇洗至盐酸-镁粉反应呈阴性;依次接收残留
液 ,水洗脱液和醇洗脱液 ,分别减压浓缩至小体积 ,
加 50%甲醇定容至 25ml。
·1537·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2007.12.022
2.2.3　吸附及洗脱参数确定:精密称取于真空干
燥至恒重的槲皮素对照品配成 1 ml含槲皮素 0.2
mg的甲醇溶液 ,摇匀 ,作为对照品溶液 。取各洗脱
液酸水解后测定槲皮素含量 。流动相:甲醇∶磷酸
pH3.0(50∶50);流速:1.0 ml/min;检测波长:260
nm;进样量:20 μl。以测定水解后槲皮素的含量乘
上转换因子 1.51,作为各洗脱液中黄酮含量。结果
见表 2。
　　表 2 　7种不同型号大孔吸附树脂的吸附-洗脱性能比较
树脂型号 DA201 HPD600 DM301 860018 D101 DM130 860021
极性等级 强 强 中 中 弱 弱 弱
上柱量(mg) 177.38 177.38 177.38 177.38 177.38 177.38 177.38
残留量(mg) 3.55 15.45 139.79 0.82 10.10 45.36 11.68
水洗脱量(mg) 2.76 0.00 0.00 2.56 0.00 6.64 0.00
醇洗脱量(mg) 132.49 124.90 146.59 79.96 150.43 134.09 170.62
比上柱量(mg/g) 56.99 50.81 10.35 50.85 54.94 38.94 45.56
比吸附量(mg/g) 56.09 50.81 10.35 50.12 54.94 36.98 45.56
比洗脱量(mg/g) 43.44 39.19 40.36 23.03 49.40 39.55 46.91
图 1　田基黄指纹图谱
A.水提液　B.过 DA201液　C.过 HPD600液　D.过 M301液　E.过 860018液　F.过 D101液　G.过 DM130液
H.过 860021液
·1538· 中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月
2.3 　各大孔吸附树脂对田基黄成分的影响　采用
文献方法〔2〕分别对田基黄水提取液及各种型号树
脂的 60%乙醇洗脱液采用 HPLC进行指纹图谱考
察 。见图 1。
3 　讨论
大孔吸附树脂在使用前需预处理 。根据本研
究 ,大孔吸附树脂的预处理方法定为:树脂采用适量
95%乙醇浸泡 12h后 ,用 2倍树脂柱体积的 95%乙
醇和水交替冲洗 ,续用 3 ～ 4倍树脂柱体积的 95%
乙醇冲洗 ,最后用水洗至无醇味 ,即可 。
从不同型号的大孔吸附树脂对田基黄黄酮的比
吸附量和比洗脱量来看 ,性能最好的前三种树脂型
号为 D101、860021、DM130,均属于弱极性类型的大
孔吸附树脂 。D101型号大孔吸附树脂对黄酮的吸
附 -洗脱能力最强 ,从有效成分的富集和工业生产成
本来考虑 ,选择 D101作为富集田基黄黄酮的树脂
吸附类型 。
从田基黄水提液与树脂提取物的 HPLC指纹图
谱比较中可知 ,除了 860018型树脂外 ,其他树脂均
能很好地将田基黄指纹图谱中 45 min以前峰的化
学成分除净 ,且完全保留了 45 min后的成分 。
参 考 文 献
[ 1] 辛义周 , 张希成 ,唐文照 .地耳草的化学成分及药理作
用研究进展 .山东医药工业 , 2003, 22(2):28-29.
[ 2] Li-weiYang, Ding-hongWu, XiTang, etal.Fingerprint
qualitycontrolofTianjihuangbyhigh-performanceliquid
chromatography-photodiodearraydetection. Journalof
ChromatographyA, 2005, 1070(1-2):35-42.
(2007-06-05收稿)
乙酸对顺反式对羟基肉桂酸 HPLC分析的影响
周惠燕 1 ,李士敏 2
(1.浙江医药高等专科学校药学系 ,浙江宁波 315100;2.浙江大学分析测试中心 ,浙江杭州 310029)
　　摘要　目的:研究流动相中添加乙酸对顺反式对羟基肉桂酸 HPLC分离的影响。方法:以不同比例的水-甲醇-
乙酸为流动相进行 HPLC分析顺反式对羟基肉桂酸。结果:以不同比例的水-甲醇-乙酸为流动相 , 顺反式对羟基肉
桂酸的 HPLC行为有变化。结论:流动相中添加乙酸影响这两个化合物的保留时间 、分离度和峰型。
关键词　顺式对羟基肉桂酸;反式对羟基肉桂酸;HPLC;乙酸
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)12-1539-03
作者简介:周惠燕 ,女 ,硕士;Tel:0574-88222793, E-mail:hzhxiaohui@hotmail.com。
　　水-甲醇 -乙酸是高效液相中分析酚酸性化合物
的常用流动相系统 , 本文用该流动相系统进行
HPLC分析顺式对羟基肉桂酸和反式对羟基肉桂
酸 ,研究了该流动相中水 、甲醇 、乙酸的比例对这两
个化合物 HPLC行为的影响。
1 　仪器及材料
岛津高效液相色谱仪:ShimadzuLC-6Apump,
SPD-10AVPUV-VISdetector,大连物化所 C18色谱柱
(0.5cm×25 cm, 15 ～ 25 μm),杭州英谱工作站;色
谱纯甲醇;三蒸水;分析纯乙酸;自制顺反式对羟基
肉桂酸 。
2 　实验方法
2.1 　供试液的配制　称取一定量的顺式对羟基肉
桂酸和反式对羟基肉桂酸 ,同置于一容量瓶中加甲
醇溶解至刻度 ,备用。
2.2 　流动相的配制　配制系列不同比例的甲醇-
水流动相各 200 ml,配制系列不同比例的甲醇 -水 -
乙酸流动相各 200ml,备用 。
2.3　色谱条件　色谱柱:大连物化所 C18色谱柱
(0.5 cm×25cm, 15 ～ 25 μm);流动相:按 2.2项配
置的流动相;流速:1ml/min;柱温:25℃;检测波长:
254 nm。
2.4　色谱图的记录　按 2.3项的色谱条件 ,取供
试液 ,以不同的流动相进行 HPLC分析并记录色谱
图。
3　实验结果
3.1　以水 -甲醇为流动相　分别以水-甲醇(80∶
20)和水-甲醇(83∶17)为流动相按前述方法进行实
验 ,见图 1。峰型出现扩散和拖尾 ,流动相中甲醇的
比例减小 ,水的比例加大 ,顺式对羟基肉桂酸和反式
对羟基肉桂酸的保留时间都加大 ,分离度增大。 A
中顺反式对羟基肉桂酸的分离度是 1.8,保留时间
·1539·中药材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 12期 2007年 12月