全 文 ：2 8 中目民族 医药杂志 20 1 0年 11 月第 11期
基于 H田C E 法土木香的指纹图谱研究
赵 军
(辽宁率新蒙医药研究所 ,辽宁 率新 12 扣以 )
摘 要 : 目的 : 建立土木香的高效毛细管电泳 (】JP C E )指纹图语分析方法为土木香质量评价提供依据。 方法 : 采用石英毛细
管柱 ( 内径 75 脚有效长度 , 山加 ) H代飞 工作条件 :分离电压 为 h ,柱温 25 ℃ ,紫外检洲 器 ( vIJ )检洲波长为 之讲画 ,缓冲溶液为
, 阮川d · L一 ’翎砂 一 l。汤 . 口已 . L一 ’ 翎酸 一 乙猜 (2 : 1 . 1) 混合溶液 (声二 8 . 6) 。 结果 :对 7种不 同产地的土木香进行 了分析 , 初步
建立 了以 7 个共有峰为特征指纹信息的 班℃E指纹图语 。 结论 : 班丫卫指纹图语法可用于土木香的质量评价。
关键词 : 土木香 ; 高效毛细管电泳法 ;指纹图语
中图分类号月飞四1 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : l仪巧 一朋 10( 为10) 1 1 - 仪反吕一 m
土木香系蒙族习用药材 , 为菊科植物土木香 吞山坛 位山` 定 ,置 匆口 L具塞锥形瓶中 ,加人甲醇 2阮。 L ,称定重量 ,放置
~
L
. 或总状土木香 加山
~
H以正 f . 的干燥根 。 含 过夜 ,超声引山苗n ,再称定重量 ,加甲醉补足减失的重量 , 滤
土木香内醋 、 异土木香内醋 、目一榄香烯 、 香橙烯 、 肉豆葱醚 、
二氢异土木香内醋等成分。 本文为了该药材的质量控制提
供有效的依据和方法 , 采用高效毛细管电泳法对土木香药
材指纹图谱的构建进行初步的探讨 ,并进一步研究提供资
料。
1 仪器与试药
。 伴1一 105 1刀 I~ 高效毛细管电泳仪 (俄国 b m玖 公
司 ) , AUY 120 电子天平 ( 日本岛津 ) I JV 一 2 5( )1代 紫外可见分
光光度计 ( 日本岛津 ) 。
翻砂 ,翻酸 , 乙睛 , 甲醇 , 氢氧化钠 , 盐酸 ,不同 7 个产地
土木香药材分别采集等地 , 经辽宁阜新蒙医药学研究所蒙
药教研室鉴定均为菊科植物土木香 加由 触肠矛谕叭 L . 或总
状土木香 加血
~
H以 )k f . 的干燥根 。
表 1 土木香样品产地
样品号 产 地
1 辽 宁省阜蒙县蒙医研究所
辽宁阜新蒙药厂
辽宁阜新仙鹤药业
内蒙古蒙药股份公司
内蒙古蒙药股份公司
内蒙古库伦蒙药厂
内蒙古鄂尔多斯蒙医研究所
方法与结果
供试品的制备 :精密称取样品粗品粉末 2 . 09 ,精密称
液 , 用微孔滤膜 (孔径为 .0 45 脚 )滤过 ,滤液作为供试品 。
.2 2 电泳条件 : 未涂石英毛细管柱 ( 内径 75脚 有效长度
旦k 功 ) ; 检侧波长 之讲曲 ; 压力进 样 叨。山肛 , 5 5 ; 分离 电压
加 h ;毛细管温度 25 ℃ ; 运行缓冲溶液 父血 l d · L 一 ’ 硼砂 -
10玉l . d · L 一 ’ 翻酸 一 乙腑 (2 : 1 . 1) 混合溶液 (声 = 8 . 6) ;毛细
管使用前依次重蒸水 、 0 . l m n d · L一 ’ N a 0 H一 ’ 溶液 、 重蒸水 、
运行缓冲溶液冲洗 3而n 。 上述试剂使用前均经微孔滤膜
(孔径为 0 . 45 脚)滤过。
2
.
3 方法学考察
2
.
3
.
1 稳定性试验 :取同一批次供试品溶液 (样品 4) , 分别
在 0 , 4 , 8 , 16 , 24 , 36 h 测定指纹图谱 , 用 “ 中药指纹图谱相似
度计算软件 ”计算 ,结果相似度均大于 0 . 91 ,说明供试品在
测定的 36 h 内保持稳定 。
2
.
3
.
2 精密度实验 :取同一批次供试品溶液 (样品 4) , 连续
进样 5 次 ,测定指纹图谱 ,考查进样精密度 , 用 “ 中药指纹图
谱相似度计算软件 ”计算 ,结果相似度均大于 0 . 97 ,说明供
试品进样精密度良好 。
2
.
3
.
3 重现性实验 : 取样品 4 ,按供试品制备方法分别制
备 5 份供试品 ,测定指纹图谱 ,用 “ 中药指纹图谱相似度计
算软件 ”计算 ,结果相似度均大于 0 . 93 ,表明本法测定的重
现性较好。
以上结果表明指纹图谱中各色谱峰的相对迁移时间和
峰面积基本一致 ,相似度较高 ,符合指纹图谱研究的技术要
求 。
2
.
4 指纹图谱的建立 :将供试品溶液分别放人自动进样的
样品管中 ,按选定的测试条件 ,进行检测 。 同一上述实验条
DOI : 10. 16041 /j . cnki . cn15 -1175. 2010. 11. 025
为 10年 11月第 11期 中国民族 医落杂志 2 9
件下 ,侧定所有供试品 班吃万色谱图。 根据 7 个不同产地
供试品侧定结果所给出的峰数 、峰值 (积分值 )和峰位 (相对
迁移时间 )等相关参数 ,进行分析 、 比较 ,制定优化的指纹图
谱。 见图 1。
2
.
5 指纹图谱分析与评价
2
.
5
.
1 共有指纹峰标定经比较所有侧定和记录的毛细管
电泳图谱 ,选取其 中 7 个共有峰作为指纹 图谱 的特征峰 。
经土木香内醋对照品对照 5 号峰为土木香内醋的峰 ,故以
5 号峰为参照峰 , 分别计算 7 个不同产地样 品中共有峰的
相对迁移时间平均值 。 土木香毛细管电泳指纹图谱中 1 -
6号共有峰相对保留时间如表 2 。
表 3 不同产地土木香 曰陀 E 指纹图谱中共有峰的相对峰面积
相对保留时间
峰 l 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 ( s ) 峰 6
样品号
0
.
3 8 0
.
4X治 0 .仍 5 0 . 仪钟 1 . 叹况幻 0 . 艾沥
0
.
332 0
。 么刀 0 。 12 1 0 1仅 1 。 0以】 0 . 3 3 0
0
.
7 T 7 0 130 0
. 砚泛鸿 0 . 11 0 1 《口】 0 3 87
0
.肠 3 0 . 1 19 0 .仪召 0 . 1 15 1 . 仪幻 0 。 刀4
0 4 18 0
.田7 0 .以8 0 . 117 1 .仪幻 0 . 月肠
0
.
5 13 0
.价 1 O 位 0 0 . 价O 1 . (班幻 0 .乃 9
0
.
8邓 0 . 134 0 .的7 0 . 123 1 . (减幻 0 粼) 2
A 0
.
5 8 0
.
1 17 0
. 《义召 16 . 5 2 1 1 . 仪刃 0 . 35 1
图 1 土木香的 印兀 E 优化指纹图谱
表 2 不同产地土木香的指纹图谱中共有峰的相对保留时间
祥 相对保留时间
品一号 峰 l 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 ( s ) 峰 61 0 . 日)2 0 . 7 12 0 . 7 34 0 . 7 1 1 . 侧】) 1 . m o0 . 62 10 . 6 10 0 . 7 180 . 7菊 0 7 56 0 . 7 87 1 .仪刃 1 .伪80 .刀 8 0 . 别) 4 1 . (拭幻 1 .仿 9 图 2 土木香 刊气 E 指纹谱共有模式图表 4 不同产地土木香的 比犯 E 图谱相似度分析结果 ( 1 号样品为参照 )样品号 相似度 (参照 ) 相似度 (对照 )0 . 57 0 . 6 9 8 0 . 72 1 0 . 7 5 3 1 . 以X】 1 . 砚男4 1 .侧】) 0 . 卯20 . 63() .0 7 4() 0 . 7公 0 . 7兜 1 . 以篮】 1 . 《巧8 0 . 98 3 0 . 9 870 .印 5 0 . 7价 0 . 7 5 0 .刀 4 1 . 《兀幻 1 . 07 1 0 . 96 1 0 . 97 90 . 586 0 . 70 1 0 . 725 0 . 75 8 1 . 砚】洲) 1 .叨 2 0 .哭7 0 . 98 60 . 6 刃 0 . 7 17 0 . 747 0 .刀 7 1 . 仪幻 l . 7Q 2 0 . 9 8 1 0 . 98 8
2
.
5
.
2 共有指纹峰面积比以 6 号峰 (土木香内酪峰 )为参
照峰 ,计算 7批样品共有峰的相对峰面积 。 结果见表 3o
2
.
5
.
3 相似度评价将测试数据导人国家药典委员会 “ 中药
指纹图谱相似度评价系统归 I碎A ) ”软件 , 经校正 , 将色谱峰
自动匹配 , 然后生成对照图谱 ,进行色谱峰差异性评价和整
体相似性评价 。 通过中药指纹图谱相似度计算软件得出土
木香扣陀 E指纹谱共有模式 (R 图 2) ;与共有模式比较 , 7 个
不同产地土木香的相似度分析结果如表 4o
0
.
9 8 1 0
.
9以)
7 0
.
97 2 0
.
9 8 1
3 讨 论
3
.
1 不同提取方法的考察取同样量的土木香样品 ,依次回
流提取法 、 超声波提取法和浸渍法提取并制成供试品溶液 ,
进行 1」1犯 E 分析 ,结果表明 , 以出峰数 目为考察指标 ,浸渍
12h 后超声提取法效果较佳 , 故本实验选用浸渍后超声波
3 0 中目民族医药杂 志 20 10年 11月第 11期
法制备供试品溶液 。
3
.
2 电泳条件的选择
3
.
2
.
1 本实验在缓冲溶液的配方上作了较多尝试 , 通过不
断调整配方 内各组分 的浓度和 pH 值 , 最后确定 50 n nU o l .
L
一 ’硼砂 一 l o
lnmo
l
.
L
一 ’硼酸 一 乙睛 (2 : 1 . 1) 棍合溶液 (声 =
8
.
6) 为最佳选择 , 出峰数目最多 。
Ab.
20氏0 3 00 0
W a 丫晓哈 h【n m J
图 3 土木香的提取物 VU 扫描图
4朋 0
3
.
2
.
2 检测波长的确立 : 采用紫外可见分光光度计 ,对供
试品溶液进行 2X() 一 粼】)unr 波长方位内进行扫描 ,并记录光
谱图 (图 3 ) ,结果在 25 4 nm 处 ,有吸收峰 ,故选择 25 4 nm 为检
测波长 。
3
.
2
.
3 柱温的影响考察了 巧 , 20 , 25 , 30 , 35 ℃时对分离的
影响 ,发现随着柱温的降低 ,分析时间延长 。 而温度过高
时 , 分离度反而降低 ,综合考虑以上情况 , 最后选择分离温
度 25 ℃ 。
3
.
2
.
4 电压的影响考察了不同电压 12 , 巧 , so Vk 对分离度
的影响 ,发现随着分离电压的增加 , 使得迁移时间缩短 , 柱
效提高 ; 电压过高柱效反而降低 ,不利于组分分离 ,综合考
虑 ,选择分离电压 20 kV 。
3
.
3 相似度分析结果表明 ,不同 7 个产地土木香药材虽然
在化学成分组成上有较好的相似性 ,但在组成成分的量上
确有较大差异 。
3
.
4 本实验对土木香 1开℃ E 指纹图谱的构建进行了初步
探讨 , 可为土木香的品质评价 、 质控标准制定 、 GAP 实施和
发展道地药材生产提供资料 。
20 10 年 7 月 4 日收稿
破血石 (其其 日甘 一 24 )的显微和 T LC 鉴别研究
马 磊 王晓娟
(锡盟药检所 , 内蒙古 锡林浩特 02 6以刀 )
关键词 :朱木扎 一 巧 ;显微鉴别 f ll刃 法 ;大黄 ; 丁香 ;土木香 ; 干夹杂
中图分类号 : 咫 9 1 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : l侧拓 一 6 8 10( 20 10) 1 1 一 加30 一 03
蒙成药破血石 (其其 日甘 一 24 )为锡林郭勒盟正蓝旗蒙 一 2X() 71 ;3 土木香内醋对照品 ,批号 l a7 印 一 2以犯04 ;异土木
医院的经验方 ,是由沙棘 、 诃子 、 桅子 、 土木香 、 寒水石 (缎 ) 、 香内酚对照品 , 批号 07 61 一 2X( 刀0 3 ; 干姜对照 药材 , 批号
紫草 、 茜草 、 苏木等 24 味药材组成的复方制剂 。 该药活血 、 12仪科2 一 2田 505 。 硅胶 G 、 H · 薄层色谱用 )青岛海洋化工厂
化痕 。 用于肝血热盛 , 胸肋刺痛 ,血痕 。 方中大多数药味的 生产 。 硅胶 G 薄层板 , 天津思利达科技有 限公司 , 批号 :
显微特征都 比较明显 ,故建立显微鉴别 。 由于紫檀香 、 红 081 2 6 。 试剂均为 AR 。
花 、 桅子 、茜草 、 苏木 、 土木香 、羡黎 、 诃子均为处方中的主要 2 试验方法与结果
成分 , 因此对本制剂中的紫檀香 、 红花 、桅子 、茜草 、苏木 、 土 2 . 1 显微鉴别 : 取本品置显微镜下观察 :草酸钙簇晶直径
木香 、 羡蔡 、诃子进行了 n 尤 鉴别方法的研究 。 该方法可 5 一 40 哪 ;具缘纹孔导管多见 ;纤维梭形 ,顶端钝圆 ,壁较厚 ;
行二重现性好 。 油管破碎 ,含黄色油装物 ; 菊糖众多 ,无色 , 成不规则碎块
1 仪器与材料 状 ;种皮表皮细胞棕色 ,长方形 ,壁较厚 ;草酸钙针晶束长 2
1
.
1 仪器 :生物显微镜 : O LYM田 I JS CXZ I sF 型 。 暗箱式三用 一 10四1 ;外胚乳细胞充满淀粉粒 ; 花粉粒类圆形 、 椭圆形或
紫外分析仪 : 确T H 一 20 3B 型 。 天平 : 又几 2 0A ( d = 0 . l m g ) ; 橄榄形 ;石细胞成群或单个散在 ,成类圆形 、 长卵形 , 孔沟细
B巴 n (D d 二 0 . ol mg ) 。 样品 : 由东乌珠穆沁旗蒙医院提供 , 密清晰 。 (①大黄的簇晶和具缘纹孔导管 。 ②土木香菊糖。
阴性对照样品为自制 。 对照品 : 中国药品生物制品检定所 ③丁香的纤维和油管 。 ④玉竹针 晶 。 ⑤草果种皮表皮细
提供。 大黄对照药材 ,批号 124 9 一 03 01 ;大黄酚对照品 ,批 胞 。 ⑥白豆范外胚乳细胞 。 ⑦红花花粉粒 。 ⑧诃子石细
号 n 0’7 96 一 2X( 拓巧 ;大黄素对照品 ,批号 n 07 56 一 2X() 1 仇丁 胞。 )
香对照药材批号 103 7 一 2X( n 眨 ; 丁香酚对照品 ,批号 n 07 4 9 2 . 2 处方中大黄的鉴别 : 大黄为本处方中的主要药味之