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正交试验优选线叶菊中东莨菪内酯的提取工艺



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正交试验优选线叶菊中东莨菪内酯的提取工艺
司海红 王 栋* 王 睿
(黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨 150040)
摘 要:目的:筛选线叶菊中东莨菪内酯的最佳提取工艺。方法:采用正交设计试验,以东莨菪内酯为指标,考察溶剂的浓度、溶剂用量
和提取时间 3种因素对提取结果的影响。结果:确定最佳提取工艺为:15倍量的 90%乙醇,提取 2次,每次 2 h。结论:该工艺简单、可行、提
取率高,可为中药线叶菊的开发利用提供参考。
关键词:线叶菊;东莨菪内酯;正交试验;HPLC
表1 因素水平表
图1 高效液相色谱图
A 对照品 B 供试品 * 东莨菪内酯
表2 正交试验结果
表3 方差分析结果
注:F 0.05(2,2)=19.00,F 0.01(2,2)=99.00
线叶菊(Filifolium sibiricum (L.) Kitam)是菊科线叶菊属植物,又名
兔毛蒿、西伯利亚艾菊、荆草等。具有清热解毒、调经止血、安神镇惊之
功效,常用于治疗传染病高热,心悸,月经不调,疔疮痈肿,及血瘀刺痛
等症状。但关于线叶菊中成分的定量研究报道很少,仅有紫外分光光度
法测定总黄酮含量[1]。近期研究表明,东莨菪内酯具有镇痛抗炎、平喘利
尿等作用,因此对线叶菊中东莨菪内酯进行含量测定,对其质量控制具
有重要意义。故本实验以东莨菪内酯为考察指标,采用正交设计试验,
对其进行含量测定及工艺筛选。
1 仪器与试药
日本岛津LC-2010C型高效液相色谱仪。岛津UV-1601PC型紫
外可见分光光度仪。旋转蒸发仪(上海申胜生物技术有限公司)。甲醇为
色谱纯。水为娃哈哈纯净水。东莨菪内酯对照品(中国药品生物制品检
定所,批号110768-200504)。线叶菊来源:黑龙江省大庆市林甸县草
原,经黑龙江中医药大学中药资源教研室王振月教授鉴定。
2 方法与结果
2.1 正交设计
前期试验表明,线叶菊在醇提等条件下能分离出东莨菪内酯,据此,
本实验选择乙醇浓度、乙醇用量及提取时间三因素,每个因素设立3个
水平,采用L9(34)正交试验设计表考察不同因素对东莨菪内酯提取率的
影响。因素水平见表1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取东莨菪内酯对照品5.30 mg,置50 ml容量瓶中,加甲醇
适量,超声使溶解,加甲醇定容至刻度,摇匀,得浓度为106 ?g/ml对照
品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取线叶菊药材粗粉(过40目筛),精密称取10.0 g,加入70%乙醇
200 ml,加热回流提取3次,每次1 h,合并滤液,并用70%乙醇洗涤滤
渣,减压回收乙醇,水液用石油醚萃取至石油醚层近无色,弃去石油醚
液,水液再用二氯甲烷萃取,直至薄层色谱对照品相应位置无蓝色荧光
斑点,合并二氯甲烷萃取液,加无水硫酸钠10 g,搅拌,滤过,滤液减压
回收至近干,加甲醇使溶解,转移至50 ml量瓶中,并稀释至刻度,摇
匀,0.45μm微孔滤膜过滤取续滤液,备用。
2.4 色谱条件
色谱柱:大连伊利特ODS2色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动
相:甲醇-水(体积比为35:65);检测波长345 nm;流速0.8 ml/min,柱
温30℃。进样量均为10μl。色谱见图1。
2.5 方法学考察
2.5.1 标准曲线的制备。精密吸取东莨菪内酯对照品溶液1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0、6.0 ml,以甲醇定容于10 ml容量瓶中,分别进样10μl,以
东莨菪内酯峰面积积分值(Y)为纵坐标,进样量(X)为横坐标,绘制标准曲
线。回归方程为:Y = 4332977.36 X - 40674.60,R2=0.9999,东莨菪内
酯在0.106~ .636 ?g范围内线性关系良好。
2.5.2 精密度试验。吸取同一对照品溶液连续进样6次,进样量为
3μl,测定东莨菪内酯的峰面积的积分值,结果RSD值为0.80%,表明
本仪器精密度良好。
2.5.3 稳定性试验。取上述样品溶液,分别于0、4、8、16、32、48 h进
样,其峰面积RSD值为0.58%,表明该样品在48 h内是稳定的。
2.5.4 重复性试验。取同一批线叶菊粗粉10.0 g,精密称定6份,按
“2.2.2”项下的方法制备供试品溶液,分别进样10μL,计算东莨菪内酯
含量,RSD值为1.31%,表明重现性良好。
2.5.5 加样回收率试验。精密称取已知含量(东莨菪内酯0.190
mg/g)的线叶菊粗粉6份,每份5.0 g,分别精密加入东莨菪内酯对照品
1.0 mg,制备供试液,分别测定含量,计算回收率,结果平均回收率为
99.75%,RSD值为1.84%,表明回收率良好。
2.6 正交试验结果
作者简介:司海红(1986-),女,在读研究生,研究方向:中药复方药效物质基础研究。
通讯作者:王栋,教授,博士研究生导师。
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科教文化
精密称取线叶菊粗粉10.0 g,按L9(34)试验条件制
备9组样品溶液,依次测定其中东莨菪内酯含量,结果见表2。方差分析
见表3。
上表直观分析:乙醇浓度和提取时间对提取效果有显著性影响,各
因素对试验影响主次为C(提取时间)>A(乙醇浓度)>B(溶剂用量)。因B不
具显著性,为了节省溶剂选择B2更合适。确定最佳工艺为A3B2C3,即
90%乙醇,15倍量,回流提取2 h。后期实验确定提取次数为2次,能够
提取完全。
2.7 验证试验
按最佳工艺制备3批样品溶液,测定东莨菪内酯平均含量为0.214
mg/g,RSD值为1.43%,表明该工艺科学、稳定、可行。
3 讨论
3.1按文献报告,东莨菪内酯的液相检测,流动相多采用不同比例
的甲醇-冰醋酸水溶液以防拖尾,为此本实验考察了甲醇-水流动相,
发现并未出现拖尾现象,且分离度和峰形均较好,故采用出峰时间较适
宜的甲醇-水比例(35:65)等度洗脱,同时也减少了缓冲盐对色谱柱的
损耗。
3.2基于90%乙醇为最佳提取浓度,又比较了不同溶剂(90%乙醇、
甲醇、乙酸乙酯)的提取效果,结果为90%乙醇略优于甲醇优于乙酸乙
酯。对于东莨菪内酯的提取,2010版药典中丁公藤药材[2]采用氯仿萃取,
考虑到氯仿的毒性,本课题试采用二氯甲烷萃取,利用薄层色谱和液相
色谱检测水层均无东莨菪内酯,说明萃取较完全,故采用二氯甲烷作萃
取溶剂适宜。
参考文献
[1] 杨卿,李杰,朱庆玲.线叶菊总黄酮方法学研究[J].长治医学院学报,
2009,(12):415-417.
[2] 中国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010:3.
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加强中职学生德育教育的几点思考
丁晓丹
(辽宁省本溪市机电工程学校,辽宁 本溪 117000)
中等职业学校的学生德育教育工作,是办好职业教育的基础性
工作,也是向社会输送品学兼优人才不可或缺的重要组成部分。
2010年5月13日国家教育部《关于印发〈中等职业学校管理规程〉
的通知》中已经把中职学校的德育教育作为一个重要内容和一个独
立章节写入《规程》,指出“学校应当将德育工作放在首位,遵循学生
身心发展规律,增强德育工作的针对性、实效性、时代性和吸引力,
把社会主义核心价值体系融入职业教育人才培养全过程,将德育全
方位融入学校各方面工作”,体现了党和政府对中职学校德育教育
的高度重视和对中职学生的关怀爱护,放松或忽视了此项工作,小
则影响一代中职学生的前途命运,大则影响整个社会的安全稳定、
和谐发展。因此,加强中职学生德育教育工作,不仅十分必要,而且
迫在眉睫。
1中职学生的思想行为特点分析
中职生是一个相对特殊的学习群体,在思想观念、心理素质、自
我约束能力等方面,有着其明显特征。充分认识和把握这些特征,对
于开展好中职生德育教育,增强教育针对性、有效性和时效性有着
重要意义。主要表现在:
一是学业竞争能力相对较弱。中职学生生源中相当一部分在应
届初高中生中学习成绩不高,对参加高考走独木桥感到渺茫,提前
学些技能提早就业成为他们和家长的希望曙光和有利选择。
二是自卑自贱心理相对较重。由于学习成绩的差距和社会上的
偏见,使他们与走进高级中学甚至普通高中的同龄学生相比,在心
理上产生学不如人甚至低人一等、抬不起头的感觉。
三是重技轻德思想相对明显。部分同学进取意识淡漠,人生观、
价值观不确定、不牢固,荣誉感、廉耻感降低,认为在学校只要能把
所学技能掌握个差不多,将来有个岗位、有碗饭吃,对父母有个交待
就行了,至于别的什么只要不出事儿都无所谓了等等,很容易放松
自己的思想道德水准。
四是自我约束意识相对不强。由于他们正处于人生可塑期、逆
反心理较重的生理期,对于家庭、社会负面影响缺乏足够的判别、抵
御能力,很容易产生良莠不分、正恶颠倒、盲目效仿甚至激情违法犯
罪行为,给个人前程及社会稳定带来严重影响。
综合中职生上述思想行为特点,及时有效开展以德育教育为重
点和首位的管理教育,导正中职生人生航向,引导他们摒弃各种不
良思想、心理和行为,才能真正实现中职学校的办学宗旨,为国家和
社会输送德才兼备有用人才。
2加强中职学生德育教育的主要途径
一是端正招生中的宣传导向。有的学校为抢生源,完成招生任
务,不惜开展虚假宣传,骗取学生和家长信任。而入学后的情况却与
招生宣传严重不符,很容易在学生和家长心理上造成上当受骗感
觉,给学校管理教育埋下祸根隐患。所以,招生中要切实树立为学
生、为学生家庭、为社会服务的办学意识,坚持以人为本,实事求是,
不误人子弟,不弄虚作假。
二是净化学校人文环境。要着力加强学校风气建设,校领导、每
一位老师都要真正模范带头,为人师表,自觉抵制社会不良风气的
影响,要求学生做的,自己首先坚决做到;要求学生不去做的,自己
首先坚决不去做。要让学生在日常点滴的言传身教中,自觉接受正
风的熏陶,催生学生思想行为上做好人、走正道、争先进的自觉性。
三是加强入学教育。中职生和其他同龄在校学生一样,具有很
强的可塑性。良好扎实的入学教育不但可以帮助学生在中职教育的
起点上,就牢固树立和端正远大理想,树立起正确的人生观、价值
观,导正人生航向,更有益于激发广大中职学生学习的积极性和源
动力,帮助他们自觉端正勤奋向上的学习态度,纠正与其年龄、职业
不相适应的不良意识和行为。
四是要开展好经常性的德育教育活动。要加大对德育师资力量
的培养,以良好的师资队伍带动德育教育;要开展理论与实践相结
合的灵活多样的教育模式,让学生在思想上打烙印、受启迪;要大力
选树、培养、宣传、重奖身边看得见、摸得着的道德模范人物,让中职
学生在思想上把学雷锋、学郭明义活动拉近、化小、变实,做到学有
榜样,干有目标,形成氛围、形成风气;要建立德育考评、监督和表彰
机制,做到人人参与、人人监督、人人争先。
五是要注重把法纪教育纳入德育教育范畴。要把以校规、《刑
法》等为主的法纪教育活动,纳入管理教育、德育教育内容,通过表
奖守纪和处理违纪正反两方面典型、请司法专业人员进校园宣讲、
走出去组织参观监狱倾听罪犯忏悔、观看警示教育片、开展法律竞
赛、案例分析、法庭进校园等等手段渠道,强化广大中职学生铸牢思
想道德防线和法规意识,争做遵纪守法好学生,为人生发展奠定坚
实基础。
六是注重心理教育疏导与德育教育有机结合。及时开展有针对
性的心理教育和个性化的心理疏导,可以使部分有心理障碍或心理
疾病的学生,得到有效心理安抚、治疗和控制,并且为他们创造平等
时间空间环境,避免因心理问题引发和演变为思想意识及涉法问
题,把不安全隐患消灭在萌芽状态。要有意识地培养心理咨询师,建
立校园心理咨询站,购置心理咨询触摸屏,打造为有心理问题同学
保密的良好环境。
摘 要:结合实际工作,谈谈加强中职学生德育教育的几点思考。
关键词:中职学生;德育教育;途径
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