全 文 ：2014 第十六卷 第十期 ★Vol.16 No.10
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕2233
HPLC 法测定臭蒿中东莨菪内酯的含量＊
刘小珍，童志平＊＊，谭 睿＊＊，万 军，谢 松
（西南交通大学生命科学与工程学院 成都 610031）
摘 要：目的：建立臭蒿中东莨菪内酯成分的 HPLC 定性定量分析方法。方法：色谱柱为 Agilent
TC-C18 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温 30℃，流动相为甲醇（A）-0.3% 磷酸溶液（B）梯度洗脱，流速
1.0 mL·min-1，检测波长 344 nm。结果：东莨菪内酯质量浓度与峰面积在测定范围内呈良好的线性关系
（r=0.999 9），重现性好，RSD 值为 1.51%；平均加样回收率为 101.42%。结论：本试验建立的 HPLC 方法稳
定可靠、简便易行，为臭蒿药材的质量评价和质量控制提供了理论依据。
关键词：臭蒿 东莨菪内酯 HPLC 色谱
doi: 10.11842/wst.2014.10.031 中图分类号：R282.16 文献标识码：A
收稿日期： 2013-11-07
修回日期： 2014-01-08
＊ 国家药典委员会基础项目（M4）：国家药品标准提高暨 2015 年版药典科研任务——牛尾蒿质量标准研究，负责人：谭睿。
＊＊ 通讯作者：童志平，副教授，主要研究方向：药物化学研究；谭睿，博士生导师，主要研究方向：民族药质量标准规范化和安全性研究。
臭蒿异名为牛尾蒿，系菊科植物臭蒿 Aremisia
hedinii Ostenf. et Paults. 的全草。分布于内蒙古、
甘肃、青海、新疆、四川、贵州、云南、西藏等地[1]。具
有清热解毒，利尿消肿的功效，主治胆囊炎、黄疸型
肝炎、痢疾等 [2]。国内对其化学成分的研究很少，虽
然李刚 [3]曾报道该植物含有植物蜡、甾醇和脂肪酸，
但是并没有找出与其药效相关的成分。本试验在
GC-MS 谱中发现其含有东莨菪内酯，且东莨菪内酯
具有平喘、利尿和抗炎的作用 [4]。本试验以东莨菪
内酯为该药材的指标成分，通过高效液相色谱法测
定臭蒿药材中东莨菪内酯的含量。
1 仪器与试剂
Waters 2695 高 效 液 相 色 谱 仪 配 备 2998 型
紫 外 检 测 器（美 国 Waters 公 司），精 密 天 平（德 国
sartorius 公司），KQ2200DB 超声波清洗仪（昆山市
超声仪器有限公司）。
东莨菪内酯（批号：110768-200504，中国药品
生 物 制 品 检 定 所），9 批 不 同 产 地 的 臭 蒿 药材 由 青
海药监局提供，经西南交通大学生物科学与工程学
院的宋良科副教授鉴定为菊科植物臭蒿 A. hedinii
Ostenf. et Paults。乙腈和甲醇均为色谱纯，磷酸为分
析纯（成都市科龙化工试剂厂），水为去离子重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色 谱 柱 为 TC-C18 柱（美 国 Agilent 公 司）（4.6
mm×250 mm，5 μm）；柱 温 30℃；流 动 相 为 甲 醇
（A）-0.3% 磷酸溶液（B）梯度洗脱，洗脱程序：0—
25 min，28%— 30%A；25— 30 min，30%— 40%A；
30— 40 min，40%— 48%A。流速 1.0 mL·min-1；检
测波长 344 nm；进样量为 10 μL。
2.2 供试品溶液制备
取本品 0.5 g（过三号筛），精密称定，置具塞锥
形瓶中，精密加入甲醇 25 mL，密塞，称定重量，放
置 1 h，时 时 振 摇，超 声 处 理（功 率 120 W，频 率 40
kHz）1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重
量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.3 对照品溶液制备
精密称取东莨菪内酯对照品 1.0 mg，甲醇溶解
并定容于 10 mL 容量瓶中，得浓度为 0.10 mg·mL-1
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
的对照品溶液。
2.4 标准曲线制备
精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 0.20、0.60、0.75、1.00、
1.50 mL，分别定容于 5 mL 容量瓶中，得浓度分别
为 0.004、0.012、0.015、0.020、0.030 mg·mL-1 的 东
莨菪内酯对照品溶液，依次进样 10 mL，结果见图 1，
回归方程为 y=6.587×107x+9 863.3，r=0.999 9，浓
度在 0.004— 0.030 mg·mL-1 范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精 密 吸 取“2.3”项 下 的 对 照 品 溶 液 1.20 mL，
定容于 5 mL 容量瓶中，得浓度为 0.024 mg·mL-1 的
对照品溶液，连续进样 6 次，测定峰面积，RSD 值为
1.07%，表明仪器的精密度良好。
2.6 重现性试验
取青海省八一路药材市场样品 6 份，按照“2.2”
项 下 制 备 方 法 制 样，进 样 量 10 mL，测 定 峰 面 积，
RSD 值为 1.51%，表明本试验方法重现性良好。
2.7 稳定性试验
取青海省八一路药材市场样品 1 份，按照“2.2”
项下制备方法制样后，分别于 0、2、4、8、16、24 h 进
样，测定峰面积，RSD 值为 0.73%，表明待测供试品
溶液在 24 h 内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验
精 密 称 取 0.25 g 样 品 6 份，置 100 mL 具 塞 锥
形瓶中，分别加入 2.1 mL 浓度为 0.10 mg·mL-1 的
对照品溶液，并加入甲醇 22.9 mL，按照“2.2”项下
制备方法制样，测定东莨菪内酯的含量，平均加样
回收率为 101.42%，RSD 值为 1.59%，表明本试验
方法准确性良好。
2.9 样品测定
取不同产地的 9 批样品，按照“2.2”项下制备
方法制样，测定东莨菪内酯的含量，结果见表 1，对
照品及供试品图谱见图 2。
3 讨论
3.1 提取条件选择
①提取方式：本实验对加热回流和超声提取 2
种提取方式进行了比较，结果发现加热回流 6 h 后
东莨菪内酯的含量为 0.770 0 mg·g-1。而超声提取
1 h 后东莨菪内酯的含量为 0.827 5 mg·g-1，所以选
图 2 东莨菪内酯对照品（A）和臭蒿样品（B）的 HPLC色谱图
注：1.东莨菪内酯。
y = 6.587×107 x + 9 863.3
r= 0.999 9
0
500 000
1 000 000
1 500 000
2 000 000
2 500 000
0 0.005 0.01 0.015 0.02 0.025 0.03 0.035
峰
面
积
图 1 东莨菪内酯对照品浓度和峰面积的线性关系
表 1 臭蒿样品中东莨菪内酯的含量（n=3）
样品
甘肃药
材市场
青海省
黄南州
青海省
藏医院
甘肃
青海省大地
药业有限公司
青海省金河藏药
药业有限公司
青海省八一路
药材市场
西藏
成都荷花池
药材市场
含量 /mg·g-1
0.753 1 0.855 1 0.773 6 0.814 4 0.798 5 0.683 8 0.849 0 0.744 2 0.729 4
0.754 6 0.854 6 0.773 5 0.814 7 0.797 8 0.678 4 0.852 1 0.743 8 0.732 9
平均含量 /mg·g-1 0.753 8 0.854 9 0.773 6 0.814 5 0.798 1 0.681 1 0.850 5 0.744 0 0.731 1
8.
89
8
12
.1
32
16
.6
81 19
.0
23
20
.5
61
35
.7
19
38
.2
87
39
.4
05
0 4 8 12 16 20
时间/min
24 28 32 36 40
B
7.
02
6
18
.9
58
时间/min
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40
A
1
1
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用超声提取。②提取溶剂：分别以 100% 甲醇、70%
甲醇、100% 乙醇、50% 乙醇、70% 乙醇作为提取溶
剂，结果表明，提取溶剂为 100% 甲醇时，样品中东
莨菪内酯的含量较高。③提取时间：依次考察了超
声提取 30、45、60 和 75 min 的提取效率，结果表明，
提取时间 60 和 75 min 时提取效率差别不大，超声
提取 60 min 时东莨菪内酯已基本提取完全。
3.2 流动相的选择
本实验曾以甲醇:0.3％磷酸溶液（30:70） [5]、甲
醇:水（32:68） [6]、甲 醇:水:冰 醋 酸（40:60:0.25） [7] 和
乙腈:1% 冰醋酸水溶液（15:85） [8] 为流动相等度洗
脱，但是均不能与异嗪皮啶很好地分离。在以乙腈:
甲醇:水:冰醋酸（13:1:86:1）[9] 为流动相等度洗脱时，
目标峰虽然能与下一个峰（异嗪皮啶）很好地分离，
但是对称因子只有 0.79。该试验采用梯度洗脱，流
动相为甲醇和 0.3% 磷酸溶液。东莨菪内酯的分离
度为 2.06，对称因子为 0.94，理论塔板数为 17 311。
3.3 结论
本实验利用 HPLC 方法对来自不同地区的臭蒿
药材进行了定量测定，结果表明含量在 0.681 1—
0.854 9 mg·g-1 之间，所以暂定臭蒿中东莨菪内酯
成分的含量不低于 0.68 mg·g-1。
参考文献
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5 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药科技出
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6 谭亮,张琦,贾英,等.高效液相色谱法同时测定旱芹中东莨菪内酯和
滨蒿内酯含量.中南药学,2010,8(7):503-506.
7 孙静芸,周羽琪,章建民,等.不同来源桑白皮东莨菪内酯含量测定.中
草药,2003,34(3):266-268.
8 刘伟,郭蕾,崔永霞,等.HPLC 测定不同产地野生与栽培地骨皮中总
东莨菪内酯.中国实验方剂学杂志,2011,17(11):73-75.
9 韩莹,李遇伯,崔兰冲,等.HPLC 法同时测定无梗五加果中东莨菪内
酯和异嗪皮啶的含量.沈阳药科大学学报,2006,23(9):573-575.
Determination of Scopoletin in Herba Artemisiae hedinii by HPLC
Liu Xiaozhen, Tong Zhiping, Tan Rui, Wan Jun, Xie Song
(School of Life Sciences and Engineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, China)
Abstract: In this paper, a qualitative and quantitative analysis method was established for the scopoletin in herba
Artemisiae hedinii hy HPLC. The chromatographic column was Agilent TC-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm); the tem-
perature of column was 30℃ , eluted with a mobile phase consisted of methanol and 0.3% phosphoric acid solution
and gradient elution at a flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 344 nm. The results showed that
the mass concentration and peak area of scopoletin had a good linear relationship within the range of measurement
(r=0.999 9). The reproducibility was good; and the RSD was 1.51%. The average sample recovery rate was 101.42%.
It was concluded that the established method was stable, reliable and simple. It provided theoretical evidences for
the quality evaluation and quality control of herba A. hedinii.
Keywords: Artemisiae hedinii, scopoletin, HPLC, chromatography
（责任编辑：张 曦，责任译审：王 晶）