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臭蒿药材薄层色谱鉴别的方法学研究



全 文 :— 17 —现代中药研究与实践2015年第29卷第2期Chin. Med. J. Res. Prac., 2015 Vol. 29 No.2
作者简介:万萌萌(1988-),女,在读硕士,研究方向:中药质量标准规范化和新制剂研发。E-mail :774235565@qq.com
通讯作者:谭 睿(1969-),女,博士,教授,研究方向:中药质量标准规范化和新制剂研发。E-mail :tanrui@swjtu.edu.cn
臭蒿药材薄层色谱鉴别的方法学研究
万萌萌,武尉杰,刘晓珍,谭 睿 *
(西南交通大学生命科学与工程学院,四川 成都 610031)
摘 要:目的 建立藏药臭蒿的质量控制方法。方法 本文初步建立了臭蒿药材的薄层色谱鉴别方法,
以东莨菪内酯为指标成分,以乙酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液 (17 :2 :1) 为展开剂,展开,取出,晾干后,置
紫外光灯 (365nm)下检视。结果 供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝色荧光主斑点。
结论 该方法操作简单,稳定性好。为臭蒿的质量标准建立提供一定的依据。
关键词:臭蒿;薄层色谱鉴别;东莨菪内酯
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2015)02-17-03
doi: 10.13728/j. 1673-6427. 2015. 02. 006
The methodology research of Artemisia hedinii Ostenf. with TLC
WANG Meng-meng, WU Wei-jie, LIU Xiao-zhen, TAN Rui*
(School of Life Sciences and Engineering, Southwest Jiaotong University, Chengdu 610031, China)
Abstract:Objective To establish a method for quality control of Tibetan virgate wormwood.Method This
paper first establishes the method of TLC identification of Artemisia hedinii Ostenf.Scopoletin is seen as the
reference component. Using the liqiuid consisted of ethyl acetate-methanol-concentrated ammonia solution(17:
2:1) as the developing solvent. After on, remove and dry.Then it can be examined under a uv lamp (365 nm).
Results It shows the same blue fluorescence spots in the corresponding position of the reference substance.
Conclusion This method is simple and steady. It provides a certain basis for the establishment of the quality
standards of the Artemisia hedinii Ostenf..
Key words: Artemisia hedinii Ostenf. ; TLC; scopoletin
臭蒿是常用的藏药之一,藏药名为桑资纳博,
系菊科植物臭蒿Artemisia hedinii Ostenf. 的干燥地上
部分。生于 2500-3600m 的山坡草地、路边和荒地,
分布于内蒙古、甘肃、青海、新疆、四川、贵州、云南、
西藏等地 [1],有清热凉血,退黄,消炎的功能,故主
治“赤巴”病,急性黄疸性肝炎,胆囊炎 [2]。
该药材在《藏药标准》的鉴别项中仅有显微鉴别
和理化鉴别,没有薄层色谱鉴别,本实验初步建立了
臭蒿药材薄层色谱鉴别的方法。
1 仪器与材料
硅胶 G板 50×200 mm(青岛海浪有限公司);
双槽展开缸;薄层色谱扫描仪;BS110S 电子天平;
HP-6890 气相色谱仪;HP -5973 N 质谱;HP-5 型毛
细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),甲醇(AR)。
东莨菪内酯(购自中国药品生物制品检定所,批
号:110768-200504),乙醇(AR.),9批不同产地的
臭蒿药材经西南交通大学生物科学与工程学院的宋
良科教授鉴定为臭蒿(Artemisia hedinii Ostenf.),样
品来源及编号见表 1。
表 1 臭蒿药材产地及编号
Tab. 1 The origin and number of the samples
编号 品种 产地
1 臭蒿 甘肃药材市场
2 臭蒿 青海省黄南州
3 臭蒿 青海省藏医院
4 臭蒿 甘肃
5 臭蒿 青海省大地药业有限公司
6 臭蒿 青海省金河藏药药业有限公司
7 臭蒿 青海省八一路药材市场
8 臭蒿 西藏
9 臭蒿 成都荷花池药材市场
2  方法与结果
2.1 指标成分的确定
采用程序升温法:初始温度 100℃ ,保持
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1min,以 10℃·min 升至 190℃,再以 3℃·min 升
至 250℃,再以 5℃·min 升至 300℃,保持 11 min。
进样口温度 270℃,接口温度 270 ℃。进样 2μl,不
分流。谱图见图 1,实验结果见表 2。
图 1 臭蒿的GC-MS谱图
Fig.1 GC-MS of the sample
表 2 臭蒿的GC-MS结果
Tab.2 The results of GC-MS
编号 保留时间 化学式 名称 含量
1 4.70 C6H8O4 2,3- 二氢 -3,5- 二羟基 -6- 甲基 -4H- 吡喃 -4- 酮 1.07%
2 4.81 C10H16O 樟脑 0.58%
3 6.81 C9H10O2 4- 乙烯基愈创木酚 0.89%
4 11.02 C15H26O β- 桉叶醇 2.26%
5 15.85 C10H8O4 东莨菪内酯 8.30%
6 18.28 C11H10O5 异嗪皮啶 1.06%
7 18.53 C20H40O 叶绿醇 1.87%
8 20.07 C15H18O3 蓍素 2.32%
9 27.06 C20H40 5- 二十烯 1.76%
10 31.71 C18H38O 石烯醇 4.85%
11 35.52 C24H50 二十四烷 5.17%
12 39.19 C29H50O2 维他命 E 0.53%
13 41.92 C29H50O β- 谷甾醇 1.77%
14 42.51 C30H50O β- 香树素 1.86%
15 43.31 C30H50O α- 香树脂醇 2.26%
由表 2 可知,臭蒿组分中东莨菪内酯的含量最
高,且东莨菪内酯的药理作用为抗炎,与臭蒿的主要
功效(清热凉血、退黄、消炎)相近,所以选择东莨
菪内酯为臭蒿药材的指标成分。
2.2 对照品溶液的制备
取 0.3 mg 东莨菪内酯对照品,加甲醇稀释至 10
ml,作为对照品溶液。
2.3 臭蒿薄层条件的建立
2.3.1 理化鉴别预试  称取 0.5 g 臭蒿粗粉,分别
加入 25 ml 水和无水乙醇,超声 30 min,过滤,取滤
液即得。胶头滴管吸取滤液滴在白色点滴板上,置于
紫外光灯(365 nm)下观察现象。
臭蒿的水提液在紫外光灯(365 nm)下显蓝白色,
乙醇提取液在紫外光灯(365 nm)下显浅紫色荧光。
2.3.2 提取方法的考察  将臭蒿 2号药材粉碎,过
三号筛,取药材粉末 0.2 g,加甲醇 10 ml,分别超声
提取 30 min 和加热回流 4 h,过滤,用甲醇定容至 10
ml,作为供试品溶液。照薄层色谱法试验,取不同提
取方法的供试品,点于同一硅胶 G薄层板上,以乙
酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液(17:2:1)为展开剂,展开,
取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品
色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝
色荧光主斑点。结果:超声和加热回流两种处理方法
的结果差别不大。因此,选用操作简单的超声处理为
供试品的提取方法。
2.3.3 展开剂选择  将臭蒿 2 号药材粉碎,过三
号筛,取药材粉末 0.2 g,加甲醇 10 ml,超声提取
30 min,过滤,用甲醇定容至 10 ml,作为供试品
溶液。照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液点于硅
胶 G 薄层板上,分别以乙酸乙酯 - 甲醇 - 浓氨试
液(17:2:1) [3],环己烷 - 三氯甲烷 - 乙酸乙酯 -
甲酸(6:10:7:1.2),三氯甲烷 - 甲醇(10 : 0.5) [4],
为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)
下检视。结果:药材在展开剂:环己烷 - 三氯甲烷 -
乙酸乙酯 - 甲酸(6 :10 :7 :1.2)和三氯甲烷 -
甲醇(10 : 0.5) 中的特征斑点比较少,且成点性不
好;而在展开剂:乙酸乙酯 - 甲醇 - 浓氨试液(17:
2 :1)的分离效果好,特征斑点多且成点性好,因
此确定乙酸乙酯 - 甲醇 - 浓氨试液(17 :2 :1)为
展开剂。
2.3.4 预平衡和预饱和方式的考察  照薄层色谱
法,吸取上述已制备的供试品溶液 ,点于硅胶 G薄
层板上,以乙酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液(17 :2 :1)
为展开剂,不进行预平衡和预饱和操作,展开,取出,
晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:两者的
分离度都较好,无需进行预平衡和预饱和操作。
2.3.5 展开温度的考察  照薄层色谱法,吸取上述
已制备的供试品溶液 ,点于硅胶 G薄层板上,以乙
酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液(17 :2 :1) 为展开剂,在
温度分别为 4℃,30℃,40℃时展开,取出,晾干,
置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:温度对分离效
果无显著影响。因此认为温度对其没有影响,在通常
条件下操作即可。
2.3.6  展开湿度的考察  照薄层色谱法,吸取上
述已制备的供试品溶液 ,点于硅胶 G薄层板上,以
乙酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液(17 :2 :1) 为展开剂,
在湿度分别为 35%,45%,55%,65%,75%时展开,
取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:
湿度对分离效果无显著影响。因此认为湿度对其没有
影响,在通常条件下操作即可。
2.3.7 展开距离的考察  照薄层色谱法,吸取上述
已制备的供试品溶液 ,点于硅胶 G薄层板上,以乙
酸乙酯 -甲醇 -浓氨试液(17:2:1) 为展开剂,展开,
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展开距离分别为 8,11,15 cm,取出,晾干,置紫
外光灯(365 nm)下检视。结果 : 展开距离为 8 cm时
已能较好的分离,所以确定展开距离在8 cm以上即可。
2.3.8 不同薄层板的考察  照薄层色谱法,吸取上
述已制备的供试品溶液 ,分别点于预制硅胶 G薄层
板和实验室自制硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-
浓氨试液(17:2:1) 为展开剂,展开,取出,晾干,
置紫外光灯(365 nm)下检视。结果:预制板和本实
验自制的硅胶 G薄层板,对供试品溶液均能起到很
好的分离效果。
2.4 臭蒿药材的薄层鉴别
按照以上色谱条件,将 9批样品的供试品溶液及
对照品溶液点于同一薄层板上,展开,晾干,置紫
外光灯(365 nm)下检视,薄层色谱图见图 2。结果 :
9 批样品在与对照品色谱斑点相应的位置上均显相同
颜色的斑点。结果表明 : 建立的方法分离度高,重现
性好,简便,可用于臭蒿的质量控制。
3 讨论
目前为止,国内对臭蒿的化学成分研究很少,李
刚 [5] 在对臭蒿杀虫成分的分离鉴定中检测出了 64 种
化合物,其中有 34 种植物蜡,28 种有机化合物,主
要成分都是醇、酮、或者是酯,2种极性成分的脂肪
酸,都与臭蒿的主要功效不一致。且关于臭蒿药材的
薄层色谱研究还未见报道。本实验初次以东莨宕内酯
为臭蒿药材薄层色谱鉴别的指标成分,并对其色谱条
件进行探讨,发现 9批药材在与对照品色谱特征斑点
相应的位置上均显相同颜色的斑点,特征斑点明显且
分离度好,希望为臭蒿的质量标准建立提供依据。
图 2 样品薄层色谱
Fig.2 TLC of the samples
1-9 :1-9 批样品;10 :东莨菪内酯对照品
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收稿日期:2014-07-03
本实验对粗茎秦艽中无机元素的含量测定,不仅
为中药材质量控制提供了一定的理论依据,也为进一
步研究无机元素与中药药效之间的关系,合理开发利
用粗茎秦艽资源提供了科学依据。同时,本实验采用
火焰原子吸收光谱法测定粗茎秦艽中 4种无机元素,
具有准确度高、选择性好等特点,是测定秦艽中无机
元素的可靠方法。
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收稿日期:2014-06-27
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