全 文 ：·论　著 ·
用HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄
素和大黄酚的含量
纪松岗1 ,金柔男2 ,赵　亮2 ,张国庆2＊
(1.中国人民解放军海军 401 医院药剂科 , 青岛 266071;2.第二军医大学东方肝胆外科医院药材科 ,上海 200438)
[ 摘　要] 　目的:建立 H PLC 法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚含量的方法。方法:
采用 H PLC-二极管阵列检测器法(H PLC-DAD), 色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm),流动相:乙腈-
0.04%甲酸(60∶40), 流速:1.0 mL/ min ,检测波长:220 nm ,柱温:25 ℃,进样量:10 μL。结果:土木香内酯 、异土木香内酯 、
大黄素和大黄酚的线性范围分别是:2.46～ 98.4、2.48～ 99.2、2.56 ～ 102.4 和 2.58 ～ 103.2 μg/ mL ,色谱响应线性关系良好。
日内和日间 RSD均<2%;最低检测限分别为 1.75 、1.31 、0.50 和 0.49 μg/ mL。稳定性结果为峰面积的 RSD分别为 1.29%、
1.40%、1.30%和 0.45%,在 48 h 内稳定。加样回收率结果分别为 99.0%、100.6%、98.7%和 99.7%(n=6), RSD 分别为
1.03%、0.62%、1.36%和 0.26%。结论:本法快速 、简便 ,重现性好 , 精密度高 ,测定结果准确可靠 , 可作为该制剂的定量测
定方法。
[ 关键词] 　土木香内酯;异土木香内酯;大黄素;大黄酚;六味安消胶囊;含量测定;色谱法 , 高压液相
[ 中图分类号] 　R 927.2　　　[ 文献标识码] 　A　　　[ 文章编号] 　1671-2838(2008)06-0446-04
Simultaneous determination of alantolactone , isoalantolactone , emodin and chrysophanol in Liuweianxiao
capsules by HPLC method
JI Song-gang1 , JIN Rou-nan2 , ZH AO Liang2 , ZHANG Guo-qing 2＊(1.Depar tment o f Pha rmacy , Navy No.401 Hospital o f
PLA , Qingdao 266071 , China;2.Depar tment o f Pharmacy , Easte rn H epa tobiliary Surg ery Hospital , Second M ilitary M edical
Univer sity , Shanghai 200438 , China)
[ ABSTRACT] 　Objective:To e stablish a method fo r simultaneous determination o f alanto lactone , isoalanto lactone , emodin and
chrysophano l in Liuweianx iao capsule s by high pe rfo rmance liquid chromatog raphy-pho todiode array detecto r(HPLC-DAD)
me thod.Methods:An Ag ilent Eclipse P lus C18 column (250 mm×4.6 mm , 5 μm)w as used with the mobile phase o f acetoni-
trile-0.04% formic acid(60∶40)a t a flow ra te of 1.0 mL/ min.The detecting waveleng th w as 220 nm , the column temperature
was 25 ℃, and the injec tion volume w as 10μL.Results:The linea r range s of alanto lactone , iso alantolactone , emodin and chry-
sophanol w ere 2.46-98.4 , 2.48-99.2 , 2.56-102.4 and 2.58-103.2 μg/ mL , r espectively , w ith a g reat linear rela tionship.For
the 4 constituents , the r esults of intra- and inte r-day precision(RSD)a t low , middle and high concentrations w ere all less than
2%;the limits o f quantifica tion w ere 1.75 , 1.31 , 0.50 and 0.49 μg/m L , re spectively.The stability results in 48 h show ed that
the RSDs w ere 1.29%, 1.40%, 1.30% and 0.45%, respective ly.The mean recover y r ates w ere 99.0%, 100.6%, 98.7% and
99.7%(n=6), RSD w ere 1.03%, 0.62%, 1.36% and 0.26%, respectiv ely.Conclusion:This method is simple , rapid , repro-
ducible , precise , reliable and accurate.I t can be used fo r the quantifica tion of L iuweianxiao capsules.
[ KEY WORDS] 　alanto lactone;iso alanto lactone;emodin;chry sophano l;Liuw eianxiao capsules;content determina tion;ch roma-
to g raphy , high pressure liquid
[ Pha rm Care & Res , 2008 , 8(6):446-449]
[ 作者简介] 　纪松岗(1964-),男(汉族), 博士 ,主任药师.
E-mail:jisonggang@126.com
＊通讯作者 , E-mail:guoqing zhang91@126.com
　　六味安消散系蒙古族 、藏族民间验方 ,由土木
香 、大黄 、山奈 、诃子 、寒水石 、碱花六味中药组成 ,具
有和胃健脾 、消积导滞 、活血止痛之功效 ,用于脾胃
不和 、积滞内停所致的胃痛胀满 、消化不良 、便秘 、痛
经等症[ 1] 。土木香为方中君药 ,具有健脾和胃 ,调气
解郁 ,止痛安胎之功效[ 1] 。土木香内酯和异土木香
内酯为一对同分异构体 ,是土木香中主要活性成分 ,
具有显著的抗炎 、保肝活性[ 1] 。大黄为方中臣药 ,具
泻热通肠 、凉血解毒 、逐瘀通经之功效[ 1] 。大黄素 、
大黄酚为大黄中主要抗菌成分 ,含量较高[ 2] 。
六味安消胶囊为其剂型改革产品 ,《中华人民共
和国药典》2005年版对六味安消散采用 HPLC 法测
定 ,但样品前处理工艺复杂 ,需经多次回流和萃取 ,
操作繁琐耗时 ,结果不易重现[ 1] 。有文献报道利用
·446· 药学服务与研究　Pharm Care &Res　2008 Dec;8(6)纪松岗 ,等.用 HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚的含量
HPLC法测定六味安消胶囊中大黄素 、大黄酚的含
量[ 2-4] ,但仅对其中的臣药进行控制 ,不能完全反映
该制剂的质量。本研究采用 HPLC-二极管阵列检
测器法(HPLC-DAD法),样品经甲醇超声提取 ,可
同时测定君药土木香中土木香内酯和异土木香内
酯 ,以及臣药大黄中大黄素和大黄酚的含量 ,方法简
便 、快速 、准确 ,可用于六味安消胶囊的质量控制。
1　材料
1.1　仪器　Ag ilent1100 HPLC仪(在线脱气机 、四
元泵 、自动进样器 、二极管阵列检测器), Agi-
lent1100 LC/MSD 联用仪 , ChemS tation 色谱工作
站;AE240型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒公
司);超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
1.2　试剂和药品　对照品土木香内酯(批号 0760-
9501)、异土木香内酯(批号 761-9601)、大黄素(批
号 0756-200110)和大黄酚(批号 0796-200005)均购
自中国药品生物制品检定所;六味安消胶囊(贵州信
邦制药股份有限公司 , 0.5 g/粒 , 批号 20070503 、
20070601 、20070801);甲醇 (国药集团化学试剂有
限公司)为分析纯;乙腈 (Fisher 公司)和 96%甲酸
(Tedia 公司)为色谱纯;水为娃哈哈纯净水。
2　方法和结果
2.1　色谱条件　色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18
柱(250 mm×4.6 mm ,5 μm);流动相:乙腈-0.04 %
甲酸 (60 ∶40);流速:1.0 mL/min;检测波长:
220 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取对照品土木
香内酯 4.92 mg , 异土木香内酯 4.96 mg ,大黄素
5.12 mg ,分别置于 3 个 5 mL 容量瓶中 ,取对照品
大黄酚 10.32 mg 置于 100 mL 容量瓶中 ,分别加甲
醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓度分别为土木香内
酯 0.984 mg/mL ,异土木香内酯 0.992 mg/mL ,大
黄素1.024 mg/mL ,大黄酚103.2 μg/mL 的对照品
储备溶液。置于 4 ℃冰箱内保存 。
分别精密吸取土木香内酯 、异土木香内酯和大
黄素对照品储备液 0.50 mL ,大黄酚对照品储备液
5.00 mL 置于同一 10 mL 容量瓶中 ,用甲醇稀释至
刻度 ,摇匀 ,即得 4种成分的混合对照品溶液 1 ,4种
成分浓度分别为 49.2 、49.6 、51.2 、51.6 μg/mL 。置
于 4 ℃冰箱内保存 。
2.2.2　供试品溶液的制备　取干燥至恒重的六味
安消胶囊内容物约1 g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,
精密加入甲醇 25 mL ,密塞 ,称定重量 。超声处理
30 min ,放冷 。用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 用
0.22 μm微孔滤膜过滤 ,取续滤液 ,即得 。
2.2.3　空白溶液的制备　色谱进样瓶中仅加入溶
剂甲醇 ,用于检测试剂对待测物峰形的影响。
2.3　结果
2.3.1　系统适应性实验　按 2.2 项下方法分别制
备混合对照品溶液 1 、供试品溶液及空白溶液 ,在上
述色谱条件下分别进样 10 μL ,得相应的色谱图 ,见
图 1。土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚
均与其他组分分离完全 ,分离度 >1.5 ,分别在约
9.2 、14 、15 、17.6 min 处出现大黄素 、异土木香内
酯 、土木香内酯和大黄酚的色谱峰。理论塔板数以
大黄素峰计不低于1.5 ×104 ,以土木香内酯峰计不
低于2×104 。
图 1　六味安消胶囊的 HPLC谱图
Fig 1　HPLC photograms of Liuweianxiao capsules
A:空白溶液;B:对照品溶液;C:供试品溶液;1:大黄素;2:异土木香内酯;3:土木香内酯;4:大黄酚
2.3.2　线性关系考察 　精密吸取 1.00 mL 按
2.2.1项下方法配制的混合对照品溶液 1 , 置于
10 mL容量瓶中 ,加甲醇稀释定容至刻度 ,摇匀 ,即
得混合对照品溶液 2。取两种浓度的混合对照品溶
液 1 、2 ,在 2.1项色谱条件下分别进样 20 、10 、5 μL ,
以对照品溶液的浓度(X ,μg/mL)对峰面积(Y)进行
·447·药学服务与研究　Pharm Care &Res　2008 Dec;8(6)纪松岗 ,等.用 HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚的含量
线性回归处理。土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素
和大黄酚的回归方程分别是 Y =12.70 X +9.190
(r=1),Y =16.26 X +5.707(r =0.999 8), Y =
52.14 X -4.861(r =0.999 6), Y =57.12 X +
3.749(r =0.999 8);线性范围分别是 2.46 ～ 98.4 、
2.48 ～ 99.2 、2.56 ～ 102.4和 2.58 ～ 103.2 μg/mL。
2.3.3　精密度实验　按 2.2.1项下方法分别配制
低 、中 、高 3种浓度混合对照品溶液 ,在 2.1项色谱
条件下分别在 1 d内重复测定 3次 ,以及连续3 d每
天分别进样 ,根据所得峰面积分别考察日内和日间
精密度 ,结果表明本方法的精密度良好(见表 1)。
表 1　精密度实验结果
Table 1　The results of precision experiment
(n=3)
对照品名称 浓度(cB/μg·mL-1)
日内 RSD(%) 日间 RSD(%)
土木香内酯 4.92 1.42 1.58
24.6 1.69 1.02
98.4 1.10 0.33
异土木香内酯 5.02 1.05 0.44
24.8 1.20 1.61
99.2 1.31 0.42
大黄素 5.12 0.59 1.09
25.6 0.35 0.78
102.4 1.15 0.29
大黄酚 5.16 0.83 1.21
25.8 0.65 1.29
103.2 0.90 0.25
2.3.4　检测限考察　以甲醇分别稀释各对照品溶
液 ,按信噪比 S/N =3 ∶1 计 ,确定其最低检测限分
别为土木香内酯 1.75 μg/mL , 异土木香内酯
1.31 μg/ mL , 大黄 素 0.50 μg/mL 和大 黄 酚
0.49 μg/mL 。
2.3.5　稳定性实验　按 2.2.2项下方法制备六味
安消胶囊的供试品溶液 , 在 0 、2 、4 、8 、16 、24 、36 、
48 h分别测定 4种成分的峰面积 ,考察其含量的变
化。结果 4种成分峰面积的 RSD分别为土木香内
酯 1.29 %、异土木香内酯 1.40%、大黄素 1.30%和
大黄酚0.45%(n=8),表明供试品溶液在48 h内稳
定。
2.3.6　重复性实验　精密称取六味安消胶囊(批号
20070503)6份 ,按 2.2.2 项下方法操作 ,以各成分
峰面积的平均值代入相应线性方程计算 4种成分的
含量 ,结果六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内
酯 、大黄素和大黄酚的含量平均值分别为 0.42 、
0.40 、0.65和 0.48 mg/粒 ,其峰面积的 RSD分别为
1.63%、0.77%、0.42%和 0.53%(n=6)。
2.3.7　加样回收率实验　取已测含量的六味安消
胶囊内容物(批号 20070503)6份 ,每份 1 g ,精密称
定 ,分别精密加入与样品含量约 1∶1比例的 4种对
照品储备液适量 ,按 2.2.2项下方法操作 ,测定并计
算回收率 ,结果见表 2。
表 2　加样回收率实验结果
Table 2　The results of recovery experiment
(n=6)
成分 样品量(m/μg) 加入量(m/μg) 测量值(m/μg)平均回收率(%) RSD(%)
土木香内酯 835.12 1 279.20 2 101.43 99.0 1.03
异土木香内酯 796.41 813.44 1 614.33 100.6 0.62
大黄素 1 308.12 1 556.48 2 844.38 98.7 1.36
大黄酚 949.75 1 104.24 2 050.37 99.7 0.26
2.3.8　样品测定　取 3 个批号干燥至恒重的六味
安消胶囊内容物各 3 份 , 每份 1 g , 精密称定 , 按
2.2.2项下方法操作制备供试品溶液 ,在 2.1项色
谱条件下进行测定 ,每批平行测定 3份 ,计算样品中
4种成分的含量 ,结果见表 3。
表 3　样品含量测定结果
Table 3　The results of determination of contents in samples
(n=3)
批号
土木香内酯
含量(mg/粒)
RSD(%)
异土木香内酯
含量(mg/粒)
RSD(%)
大黄素
含量(mg/粒)
RSD(%)
大黄酚
含量(mg/粒)
RSD(%)
20070503 0.39 0.98 0.39 1.07 0.59 1.78 0.43 1.16
20070601 0.38 1.27 0.38 1.61 0.60 1.07 0.45 0.45
20070801 0.35 1.24 0.35 1.14 0.49 1.48 0.45 0.62
3　讨　论
3.1　前处理条件考察
3.1.1　提取方法考察　本研究参考《中华人民共和
国药典》2005年版一部中六味安消散样品前处理方
法和相关文献[ 2-7] ,分别考察了 3种提取方式:加热
回流 、超声水解后溶剂萃取和直接超声法 。结果表
明 ,加热回流和直接超声法提取的大黄素和大黄酚
含量接近 ,而采用超声水解后溶剂萃取法测得的大
黄素和大黄酚含量较低 ,并且加热回流和超声水解
后溶剂萃取法提取出的土木香内酯和异土木香内酯
含量很少。苏子仁等[ 8] 报道大黄素在提取时 ,因多
·448· ISSN 1671-2838　Pharm Care &Res　药学服务与研究　2008 Dec;8(6)www .pcarjournal.net.cn　E-mai l PharmCR@yahoo.com.cn　Phn/ Fax 86-21-65519829　　　　　　　　　　
次回流 ,萃取转移 ,在蒸发 、干燥过程中 ,含量会逐步
降低 。直接超声提取法能够达到较高的提取效率 ,
且操作简便 、耗时短 ,故采用直接超声提取法 。
3.1.2　提取时间考察　实验中采用甲醇超声处理 ,
考察了不同超声时间 15 、30 、45 、60 min所提取的 4
种成分的含量 ,结果以超声 30 min 提取较完全 ,之
后随超声时间延长 ,大黄素和大黄酚含量变化不大 ,
而土木香内酯和异土木香内酯含量反而有所下降 ,
故最终确定超声处理 30 min。
3.2　色谱条件考察
3.2.1　波长的选择 　采用 DAD 在 190 ～ 400 nm
全波长扫描 ,结果大黄素和大黄酚的最佳吸收波长
分别为 220和 223 nm ,土木香内酯和异土木香内酯
的最佳吸收波长分别为 193和 196 nm ,而在220 nm
处均有吸收且共同吸收最大 ,同时可排除杂质对待
测物的干扰 ,故选择 220 nm 为检测波长。
3.2.2　流动相的考察　对不同比例的甲醇-水和乙
腈-水体系选择比较 ,结果发现甲醇-水体系对同分
异构体土木香内酯和异土木香内酯的分离效果较
差。因大黄蒽醌类衍生物为具紫外强吸收的脂溶
性 、弱酸性物质 ,采用反相离子抑制技术 ,于流动相
中添加少量酸 ,可抑制各组分的解离 ,使色谱峰达基
线分离且峰形对称。在权衡分离度 、分析时间 、拖尾
因子等因素后 ,确定最佳流动相为乙腈-0.04%甲酸
(60∶40)。
3.2.3　色谱峰干扰性考察　按 2.2.2项下方法操
作制备样品溶液 ,在 2.1 项色谱条件下通过 DAD
峰纯度检查 ,以及利用 Agi lent1100 LC/MSD 联用
仪分析 ,在质谱全扫描模式下 ,提取色谱峰离子 ,通
过棒图检测 ,结果发现两种方法的待测峰处均无干
扰性成分 ,对测定结果无影响 。
4　结　论
　　采用 HPLC-DAD同时测定六味安消胶囊中 4
种成分含量未见文献报道 ,本方法既比分开测定缩
短了分析时间 ,提高了工作效率 ,而且节约了流动
相。土木香和大黄分别为方中君药和臣药 ,以土木
香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚为代表的方
中活性成分综合体现了本制剂的整体质量 ,能够为
六味安消胶囊的质量评价提供准确依据 。
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[ 收稿日期] 　2008-07-22 [ 修回日期] 　2008-10-13
[ 本文编辑] 　周　琎　　姚春芳
·449·药学服务与研究　Pharm Care &Res　2008 Dec;8(6)纪松岗 ,等.用 HPLC法同时测定六味安消胶囊中土木香内酯 、异土木香内酯 、大黄素和大黄酚的含量