全 文 ：3 8 内蒙古中医药
R尸一日尸LC 法测定脑脊液中蛇床子素浓度
程淑意 ’ 罗晓莉 ` 陈云波 ’ 王 奇 ’
摘 要 :采用高效液相色谱法对脑脊液中蛇床子素的浓度进行测定 。 结果表明 :在所采用 的色谱条件和脑脊液处理方法下 , 蛇床子素在
,.0 02 -6 1.6 7卜岁耐范围内有很好的线性关系。 该方法灵敏度高 ,精密度和准确度好 , 为在脑脊液中研究蛇床子素提供了依据 。关键词 : RP e H P优法 ; 脑脊液 ;蛇床子素浓度
中图分类号 : R2 8 5 . 5 文献标识码 : B 文章编号 : lX() 6一09 7 9 ( 2 0 1 0 )1 2一 0038一0 1
蛇床子素又名甲基欧芹酚 ( os tho l e , os )t 是从伞形科植物蛇 1 . 8精密度和方法回收率试验 : 空白脑脊液中精密加人不同量蛇
床成熟果实蛇床子 ( urF ct us C in id )中提取的香豆素 ,其化学名称 床子素标准品 , 配成 .0 05 2袱 208 、 1 .6 67 卜咖 L 浓度水平的质量控为 7一甲氧基一 8一异戊烯基香豆素 ,分子量为 24 .2 9 。 本文建立了 制样品 (QC ) ,每浓度进行 5 样本分析 ,连续测定 3 天 , 并与标准曲
在脑脊液中检测蛇床子素浓度的方法 。 线同时进行 。 根据当日的标准曲线计算精密度和方法回收率 。
1 材料及方法
1
.
1试剂与试药 : 蛇床子素 (广州药物研究中心 , 批号 : 110 82 2 -
20 03 05 )
, 对经基苯甲酸 (国药集团化学试剂有限公司 , 批号 :
2T 0 70 12 5)
, 色谱级甲醇 、 乙睛 。 实验用水为三重蒸馏水 。
1
.
2 仪器 : w at esr 5 1 5 Hp L e p u m p , h p S E R I E S 1 100 U v 检测器 ;
K DC一220 H R 高速冷冻离心机 ; N一E V A P l l Z , O A一 SY S 氮吹仪。
1
.
3 色谱条件 : s y n e r邵 c 1 8 (2 5 0m m x 4 .6 nmr , 4林m , p h e nom
e
nex 公司 ) ,保护柱 : eS cu ir yt uG adr c a rt ir d ge iK t ;流动相 : 甲醇 :水 = 80 : 2仇流速 : .0 s m L角 in ;紫外检测波长 : 3 22n ;m 柱温 :室温 ;进样量 : 10 林oL
1
.
4 标准溶液的配置 : 蛇床子素溶液 : 精密称取蛇床子素 s gm , 放
人 25 而容量瓶中 ,用 N , N一二甲基甲酞胺 , 吐温一80 和生理盐水
的体积比为 1: 1 : 8 配制成浓度为 20 卜岁d 的标准品溶液 ;内标溶
液 :精密称取对经基苯甲酸 s m g , 加人蒸馏水 25 m L , 制成浓度为
20 卜群坛L 的溶液 ,再稀释成浓度为 1 , 25 卜咖L 的内标溶液。
1
.
5 脑脊液样品处理 :健康新西兰兔 (体重 Zk g 左右 ,雌雄不限 , 由
广东省动物实验中心提供 ,合格证号 : 0 54 04 8 。 )4 只 ,用药前禁食
12 h
,单剂量灌服蛇床子水煎剂 7 天 (0 . 18 尹 g ) , 于末次给药后 60
m in 经枕骨大孔抽取 .0 5d 脑脊液 。 取 2 0 林L , 加内标溶液
100林 L , 摇匀 , 加乙睛 4 0 0卜L , 涡旋 s m in , 100o0 r八I l in 离心 1 5m in ,
吸取有机相 , 40 ℃水浴下用氮气流吹干 , 残留物用 10 协L 流动相
复溶 , 5 00 r加 in 离心 l腼in , 取 10 卜 L 上清液进样分析 。
1.6 样品测定 :取待测脑脊液样本 .0 2 inl ,按 “ 1 . 5 ” 项方法处理 ,进样
检测 。
L 7 标准溶液的制备 : 将蛇床子素标准液分别加人于空白脑脊液
中配制成浓度为 0 . 02 6 、 0 .0 5 2 、 0 . 104 、 0 . 20 5 、 0 . 4 17 、 0 . 533 、 1. 66 7林gl
m L 的系列溶液 。 按 “ 1 . 5 ” 项下方法提取后进样 , 以蛇床子素和内
标峰面积比对蛇床子素脑脊液浓度作回归方程 。
* 广州中医药大学 D ME 中心 ( 51 04 0 5 )
20 10 年 4 月 10 日收稿
1
.
9 提取回收率 :分别配置三个质量控制样品 (Q c ) ,每浓度进行 3
样本分析 ,连续测定 5 天 , 另配制相同浓度的蛇床子素甲醇溶液 ,
按 “ 1 . 5 ”项下操作并进行 H PL C分析 ,计算提取回收率。
2 结 果
2
.
1标准曲线和回归方程 : 脑脊液样品标准曲线为 : y =l . 56 0 4 x -
.0 065
7
,
=r .09 98 967
, 在血药浓度为 .0 02 6一 1. 6 7协以n d 范围内线性
关系良好 ,最低定量限 ( L O Q )为 .0 026 卜g /i刀 L ,再以信噪比 (洲 >3 )分别测得最低检测限 ( L O D )为 .0 007 卜的】L 。
.2 2 稳定性 : 结果表明经处理后的样品在处理后一周之内稳定 ,
R SD% < 15%
。
.2 3 补肾益智方脑脊液样品含量测定取末次给药后 60 而n 脑脊液
样品 2 0 协L ,按 “ 1 . 5 ” 项下方法操作 ,吸取 10 林 L进样 , 以随行的标准曲线计算药物浓度。 结果见表 1。
表 1 蛇床子素含量测定
药物浓度 (毛 S ; n 二 5 ) RS D (% )
蛇床子素含量 0 . 0 5 0 6士 0 . 002 3. 9 5
3 讨 论
蛇床子的中枢神经系统调节作用使其在临床上应用广泛 ,但
对其能否透过血脑屏障方面的相关研究报道较少 。 本文运用高效
液相色谱法检测到蛇床子素这一低分子脂溶性物质能透过 B B B ,
对蛇床子在脑内及体内药物代谢动力学相关研究提供了依据 。 至
于脑脊液中药物浓度需达到多少才对神经系统有效 ,是否可以通
过控制释放速度延长脑脊液中药物浓度存在的时间有待进一步
研究 。
参考文献
11]X u SB
.
E fe
e t s of o s t h o l e o n th e d e e t or 一 phy
s io l o颐c al ac t i vi yt of
is ol at
e
d
e
acr h i
a e m u s e le of 洲 n e a p i g .团 J z h o n g s han U垃 v ( 中山 大
学学报 ) , 1 990 , 29 ( 2 ) : 一35 .
银篙合剂对大鼠棉球肉芽肿的影响
赵 华 ’ 李新莉 ’
摘 要 : 目的 :评价银篙合剂时大鼠棉球肉芽肿 的预防作用 。 方法 :采用对照试验和 s p s o n . 5简体中文版软件对数据进行分析和组间 t检
验的方法。 结果 :对照组相比 , 银篙合剂 24 .4 8 、 .12 24 和 6 . 1 2 9生药瓜g三剂童组动物肉芽肿湿重数值均显著减小 , P< .0 ol 或P< .0 05 ;银篙合
剂 1.2 24 和 6 . 1飞生药八g剂量组干重数值亦明显减小 , P< 0 .o l 。 结论 :银篙合剂对大鼠棉球肉芽肿有明显抑制作用 。
关键词 :银篙合剂 ;棉球肉芽肿 ;大鼠
中图分类号 : R2 8 5 . 5 文献标识码 : B 文章编号 : 1006 一 09 7 9 ( 2 0 1 0 ) 12一00 3 8一0 2
银篙合剂由柴胡 、青篙 、 金银花 、 连翘 、黄荃 、 板蓝根 、玄参 、甘 号 04 03 27 3 。 临用前以蒸馏水配制成所需剂量 ,用前充分摇匀 。
草 、 薄荷等中药组成 ,具有解热镇痛 、 抗菌消炎等功效 ,用于治疗 .2 2 对照品:银翘解毒液 ,广东华南制药厂产品 , 20 m明欠, 3次日 , 批感冒身热 、鼻塞 、 头痛 、 咳嗽和咽喉炎 。 号 04 04 05 。 临用前以蒸馏水溶解配制成所需剂量 ,用前充分摇匀 。
1 试验目的 .2 3 试验动物 :取 s D 大鼠 , 50 只 , 雌雄均用 ,体重 180一 220 9 , 由广
评价银篙合剂对大鼠棉球肉芽肿的预防作用 。 东省医学实验动物中心提供 。 实验动物质量合格证明许可证号为
2 实验材料 sC x (K 粤 )2 0 3一0 02 ,本项研究所用实验用动物设施合格证号为
2
.
1 供试品 :银篙合剂 : 由广东省佛山市顺德区龙江医院提供 ,批 清洁级标准 ,粤检证字 2 00 lC O490
, 渭南职业技术学院医药学系 ( 7 14 0 ) 2 .4 仪器 : 大鼠手术台 , 自制 ;s a rt o ir u s B P Zn D 十万分之一电子
20 10 年 4 月 4 日收稿 称 ,德国产品 ; D HG 一 9加3 A 型电热恒温鼓风干燥箱 ,上海精密实
DOI : 10. 16040 /j . cnki . cn15 -1101. 2010. 12. 048
2 0 10年 6月 39
验设备有限公司产品。
3 试验方法川
.3 1动物分组 : 50 只 DS 大鼠按体重随机分为 5组 : 正常对照组 ,
阳性药对照组 :银翘解毒液组 ,银篙合剂高 、 中 、低剂量组 。
3 .2 剂量设置 : ①银篙合剂剂量 :银篙合剂临床成人剂量为 6 8 9生
药 /天 。 参考陈奇主编《中药药理研究方法学》第 1103 页 ,按 “ 体表
面积比 ” 口犊算动物试验剂量 ,则大鼠药效学高 、 中、 低剂量分别为
24 .4 8
、
12 .2 4 和 6 . 1 2 9生药瓜g (低剂量为临床等效量 ) 。 ②银翘解毒
液剂量 :根据成人一日量 ,按 “体表面积比” 换算动物试验剂量 ,为
5
.
4 x记kI g o
3 .3 试验统计方法 : 试验结果均采用 s sP , n . 5简体中文版软件对
数据进行分析和组间 t检验。
.3 4 给药方法 :银篙合剂高 、 中 、 低剂量组及阳性对照药银翘解毒
液按不同剂量灌胃给药 , 2 0m狐g , 每日给药 1次 ,连续 7 天 , 正常
对照组给予等体积蒸馏水 。
.3 5 测定方法 3[] :取 DS 大鼠 50 只 , 雌雄均用 , 随机分为 5 组 ,分别
为对照组 、银翘解毒液 5 .4而瓜g组 、银篙合剂 24 48 、 12 .24 和 .6 1 29
生药瓜g组 。 各组大鼠在乙醚麻醉无菌条件下做胸部皮肤切口 , 将
已称重灭菌的棉球 (20 mg )两个分别植人大鼠左右两腋窝皮下 , 缝合切口 。 当天各给药组按剂量灌胃给药 ,对照组给予等体积蒸馏
水 ,每天 1次 ,连续 7d 。 末次给药后 h1 ,处死大鼠 ,仔细剥离并取
出棉球肉芽组织 , 在 S汪 rt o ir u s B 2P l lD 十万分之一电子称上称湿
重 ,并置于干燥箱中 60 ℃恒温干燥 h6 后称干重 ,所得重量减去原
棉球重 , 即得肉芽肿的湿重及干重 。
4 试验结果
与对照组相比 , 银篙合剂 24 .4 8 、 12 .2 4 和 6 . 12 9生药瓜g 三剂
量组动物肉芽肿湿重数值均显著减小尸丈。 . 01 或 P< .0 05 ; 银篙合
剂 12 .2 4 和 6 . 12 9生药瓜g 剂量组干重数值亦明显减小 , P< .0 ol 。结
果详见表 l 。
表 1 银篙合剂对大鼠棉球肉芽肿的影响
组别 剂量 动物数
( g 生药瓜 g ) (只 )
肉芽肿重量 ( m g )
对照组
银翘解毒液
银蓄合剂
银蓄合剂
银篙合剂
等体积
5
.
4
2 4
.
4 8
12
.
24
6
.
12
10 6 6 6
10 6 4 4
湿重
4 4士5 9
.
4 7
.
4 1土7 6 , 8 1
干重
00 士9
l 0
10
l0
5 9 8
.
4
士7 1
.
6 0
*
5 5 4 0 8士4 4 2 3 * *
55 0
.
89 士4 2
.
10
* *
9 0
.
48 土 13
.
19
9 0
.
4 士 11
.
0 5
8 4
.
4 2士8 .2 * *
82 6 1士9
.
1 8* *
注 : ①银翘解毒液剂量单位为 m F k g ; ②与对照组比较 , * P<
0 05
, * *
P< 0
.
0 1
。
5 试验结论
银篙合剂对大鼠棉球肉芽肿有明显抑制作用 。
参考文献
【l] 王北婆 , 李仪奎 . 中药新药研制开发技术与方法【M] .上海 :上海
科学技术出版社 .2 0 1 .5 24 ·
21[ 陈奇 . 中药药理研究方法学 . 1 103 .
3[] 李仪奎 . 中药药理实验方法学[M] .上海 :上海科学技术 出版社 .
1 99 1
.
25 3
.
镁类杂质对药用蒙脱石吸附力的影响
马书太 ’
摘 要 : 目的 :探测与蒙脱石伴生的非水溶性镁类杂质对蒙脱佑 吸附力的影响 。 方法 :对与蒙脱石伴生的非水溶性镁类杂质进行定性 、
定童测定。 结果 :非水溶性镁类杂质能严重影响蒙脱石对硫酸士的宁吸附力的测定结果 。 结论 :现有的国家药品标准中检测药用蒙脱
石吸附力的方法专属性较差 , 方法有待改进。
关键词 :药用蒙脱石 ;镁类杂质 ;吸附力
中图分类号 : R 2 8 5 .5 文献标识码 : B 文章编号 : 1006一 097 9 ( 2 0 1 0 ) 12一0 039一02
药用蒙脱石吸附力的测定是控制蒙脱石质量的一项重要指 .0 5酬 , 从表 1的数据可以看出 :
标 。 现有的国家药品标准中检测蒙脱石吸附力的方法是用分光光 每克氧化镁 “ 吸附 ” 五水硫酸士的宁的量是蒙脱石的 27 .3 8 -
度法 ,测定吸附硫酸士的宁的量 1I] 。 45 .6 3倍。
药用蒙脱石是由膨润土水洗去杂质所得 , 由于各地的成矿条 每克氢氧化镁 “ 吸附 ” 五水硫酸士的宁的量是蒙脱石的
件不一或加工操作不当 , 膨润土中与蒙脱石伴生的镁类矿物 ,特
别是氧化镁含量较高 , 文献报道天然膨润土中氧化镁的含量在
.0 37 %
一
.6 0 %之间冈 , 但是蒙脱石中非水溶性镁类杂质对蒙脱石吸
附力的影响未见公开报道 。 本文报道药用蒙脱石中非水溶性镁类
杂质对蒙脱石吸附力的干扰情况 。
1 仪器与试药
.1 1 仪器 :紫外可见分光光度计 (UT 一 1 80 北京普析通用仪器有限
公司 ) ; pH 计 ( p h s 一3 e 上海雷磁 ) :
1 .2 试剂与药品 :硫酸士的宁 (购于上海泰兴市沃特尔化工有限公
司 ) ;重铬酸钾 (基准 )上海化学试剂公司 ;硫代硫酸钠 (基准 )焦碱
集团化学试剂厂 ;其他试剂均为分析纯 ;药用蒙脱石 (从产地采
得 , 并按传统加工工艺制成样品 ) 。
2 试验方法与结果
2
.
1 非水溶性镁类矿物 “ 吸附力 ” 的试验 : 按照国家药品标准第 5
册药用蒙脱石吸附硫酸士的宁的测定方法测定 ,非水溶性镁类矿
物 “ 吸附 ”硫酸士的宁的结果如表 1 。
表 1 非水溶性镁类矿物 “ 吸附力 ” 测定结果
10
.
3 2一 17 、 2倍。
每克铝碳酸镁 “ 吸附 ” 五水硫酸士的宁的量是蒙脱石的
2
.
10 5
一
3
.
5 1倍 。
每克硫酸镁 “ 吸附” 五水硫酸士的宁的量是蒙脱石的 .0 1 14 -
0
.
1 9倍。
结果表明 , 除硫酸镁外 ,铝碳酸镁 、 氢氧化镁 、 氧化镁对硫酸
士的宁的“ 吸附力 ” 大于蒙脱石的几倍到几十倍。
.2 2 非水溶性镁类矿物对药用蒙脱石吸附力的影响试验 : 取海南
产药用蒙脱石 ,分别加人氧化镁 、 氢氧化镁 、 铝碳酸镁 、硫酸镁 , 按
国家现行的药用蒙脱石质量标准中吸附力测定法 ,分别测定蒙脱
石及其混合物的吸附力 , 海南产药用蒙脱石样品的吸附力是
.0 3 67 (吮 ) ,其他混合物 “ 吸附力 ” 结果如表 2o
表 2 蒙脱石及其混合物吸附力测定结果
名称
.6226或
名称
吸附力(咖
氧化镁
1 3
.
6 9
氢氧化镁 铝碳酸镁 硫酸镁
5
.
1 6 1
.
0 5 2 6 0
.
05 7
重量
( g )
0
.
10 6 1
0
.侧 )6 4
0
.
10 5 5
0
.
0 16 2
理论吸
附量 (目
0
.
0 3 57
0
.
0 8 76
0
.
0 3 5 5
0 0 8 3 6
理论吸附 实测吸 回收率 增加吸
量和 (s) 附量@ %() 附量%()
0
.
1 2 3 3 0
.
13 2 8 12 6
.
6
0
.
1 19 1 0
.
1206 104
.
2
国家药品标准中规定 : 每克蒙脱石吸附硫酸士的宁为 .0 3 -
*
ltJ 东中医药大学药学院 ( 2 50 3 55 )
20 10 年 4 月 6 日收稿
注 :表中重量是取样量 ,理论吸附量是样品吸附力 (吮 )乘以取样量 , 回收率%抓实测吸附力一镁化合物理论吸附量 ): 蒙脱石
理论吸附量 。
(下转 42 页 )