全 文 ：第二军医大学学报 　２０１６年２月第３７卷第２期 　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｂ．２０１６，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．２
ＤＯＩ：１０．１６７８１／ｊ．０２５８－８７９ｘ．２０１６．０２．０２３６ ·短篇论著·
［收稿日期］　２０１５－０５－０３　　　　［接受日期］　２０１５－０８－２２
［基金项目］　上海卫生系统优秀青年人才培养计划（ＸＹＱ２０１１０３０），第二军医大学专项基金（２０１０ＪＳ１６）．Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　Ｏｕｔｓｔａｎｄｉｎｇ　Ｙｏｕｎｇ
Ｔａｌｅｎｔ　Ｔｒａｉｎｉｎｇ　Ｐｌａｎ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｙｓｔｅｍ（ＸＹＱ２０１１０３０）ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｓｐｅｃｉａｌ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（２０１０ＪＳ１６）．
［作者简介］　陈　俊，硕士，主管药师．Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｊｕｎｔｃｄｊ＠１２６．ｃｏｍ
＊通信作者 （Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒｓ）．Ｔｅｌ：０２１－８１８７５５７１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｑｉｎｇ＿ｚｈａｎｇ９１＠１２６．ｃｏｍ；Ｔｅｌ：０２１－８１８７５２８３，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｗｆ１２３１＠２６３．ｎｅｔ
中药奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物的抗菌化学组分研究
陈　俊１，徐　雷１，曹青青１，赵　亮１，崔龙久２，王　靖３，张国庆１＊，谭蔚锋２＊
１．第二军医大学东方肝胆外科医院药材科，上海２００４３８
２．第二军医大学东方肝胆外科医院胆道一科，上海２００４３８
３．第二军医大学长海医院检验科，上海２００４３３
　　［摘要］　目的　研究中药奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取部位中具有抗菌活性的具体组分。方法　采用硅胶柱层析法对奇蒿
氯仿、乙酸乙酯提取部位进行组分分离，选用临床常见致病菌通过纸片扩散法和常量肉汤稀释法对分离得到的各组分进行体
外药敏试验，通过物理化学方法进一步鉴定活性成分的结构。结果　奇蒿氯仿、乙酸乙酯部位的多个分离组分对临床常见致
病菌具有不同程度抗菌活性，活性显著的组分经结构鉴定确定为：芹菜素、异泽兰黄素、咖啡酸，其中异泽兰黄素对金黄色葡萄
球菌抗菌活性最强，其最小杀菌浓度为０．０６２　５ｍｇ／ｍＬ。结论　本实验方法简单、快捷，可准确有效地得到奇蒿氯仿、乙酸乙
酯活性部位的有效抗菌成分，并首次报道了异泽兰黄素的抗菌活性。
［关键词］　奇蒿；活性提取物；硅胶柱层析；抗菌实验；结构鉴定
　　［中图分类号］　Ｒ　２８４．１　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　０２５８－８７９Ｘ（２０１６）０２－０２３６－０６
Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ
ＣＨＥＮ　Ｊｕｎ１，ＸＵ　Ｌｅｉ　１，ＣＡＯ　Ｑｉｎｇ－ｑｉｎｇ１，ＺＨＡＯ　Ｌｉａｎｇ１，ＣＵＩ　Ｌｏｎｇ－ｊｉｕ２，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ３，ＺＨＡＮＧ　Ｇｕｏ－ｑｉｎｇ１＊，ＴＡＮ　Ｗｅｉ－ｆｅｎｇ２＊
１．Ｄｅｒｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｅａｓｔｅｒｎ　Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００４３８，
Ｃｈｉｎａ
２．Ｄｅｒｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｉｌｉａｒｙ　Ｔｒａｃｔ　Ｓｕｒｇｅｒｙ（Ⅰ），Ｅａｓｔｅｒｎ　Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００４３８，Ｃｈｉｎａ
３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｃｈａｎｇｈａｉ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００４３３，Ｃｈｉｎａ
　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ
Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ　Ｓ．Ｍｏｏｒｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ　Ｓ．
Ｍｏｏｒｅ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｔｅｓｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｅｒｅ
ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　Ｋｒｉｂｙ－Ｂａｕｅｒ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｂｒｏｔｈ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ａｃｔｉｖｅ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｌｏｒｅｄ－ｒｅａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ
ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ　ｈａｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｅｇｒｅｅｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｆｏｒ　ｃｏｍｍｏｎ
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃ．Ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ：ａｐｉｇｅｎｉｎ，ｅｕｐａｔｉｌｉｎ，ａｎｄ　ｃａｆｆｅｉｃ
ａｃｉｄ；ｅｕｐａｔｉｌｉｎ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ （ＡＴＣＣ２５９２３）ａｎｄ　Ｓｔａｎｄａｒｄ
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕａ（ＡＴＣＣ２９２１３），ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍａｌ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｂｅｉｎｇ　ｂｏｔｈ　０．０６２　５ｍｇ／ｍＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
Ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｓｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｓｔｕｄｙ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｑｕｉｃｋ；ｉｔ　ｃａｎ　ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｏｂｔａｉｎ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ　ａｎｄ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ．Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｏ　ｒｅｐｏｒｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｅｕｐａｔｉｌｉｎ．
［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ；ａｃｔｉｖｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ；ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　ｔｅｓｔ；ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
［Ａｃａｄ　Ｊ　Ｓｅｃ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ，２０１６，３７（２）：２３６－２４１］
·６３２·
第２期．陈　俊，等．中药奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物的抗菌化学组分研究
　　菊科艾属植物奇蒿（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ａｎｏｍａｌａ　Ｓ．
Ｍｏｏｒｅ）为多年生草本植物，有根和茎，全草呈现黄
酮苷反应［１］。《中国植物志》记载奇蒿在我国有１个
种，１个变种，主要分布在江苏、浙江、江西、福建等
地，又称为南刘寄奴。目前作为刘寄奴用药的植物
有９个科，３２个种，经本草考证奇蒿为刘寄奴正品
应用［２］。中药奇蒿具有解暑消食、活血散瘀、敛疮消
肿等功效［３］，可用于治疗跌打损伤、疮痈肿痛、淤积
不化和血淋血痢等。现代药理研究表示奇蒿具有抗
炎［４－５］、抗缺氧［６］、保肝、抗大鼠血小板凝聚等［７］作
用，临床上常采用奇蒿治疗痢疾［８］和泌尿系感染［９］
等，且奇蒿对单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）也具有良好的治
疗效果［１０］。
鉴于奇蒿的临床应用，相关学者对奇蒿的有效
抗菌活性成分展开了研究。荣远明等［１１］采用奇蒿
全草入药验证了奇蒿对急性细菌性痢疾的疗效。本
研究前期对奇蒿进行了系统的提取分离，完成了各
提取部位体外抗菌实验［１２］。现拟进一步完成抗菌
有效单体的分离与鉴定，为深入研究有效单体的整
体药效学实验提供物质基础。
１　材　料
１．１　仪器　多功能渗漉提取器（常州市新祥天然产
物分离设备有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００系列高效液相
色谱仪（安捷伦科技公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ　６２２０高分辨飞
行时间质谱仪（安捷伦科技公司），配套有标准电喷
雾离子源（ＥＳＩ），分析软件分别为 ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ　Ｄａｔａ
Ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ　ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ 和 Ｑｕａｌｉａｔｉｖｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ
ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ；电热恒温培养箱ＤＨＰ－９２７２型（上海益
恒试验仪器有限公司）；ＤＪ－０４ 粉碎机（上海淀久
公司）。
１．２　药品与试剂　中药奇蒿道地药材采购自浙江
临安（批号２０１４０５１７）。８０％乙醇、石油醚（ＰＥＴ）、
氯仿、乙酸乙酯等试剂均为分析纯（上海市第一试剂
厂）；羧 甲 基 纤 维 素 钠 （ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ　ｃｅｌｕｌｏｓｅ
ｓｏｄｉｕｍ，ＣＭＣ－Ｎａ，上海赫里斯特化工有限公司）。
标准型金黄色葡萄球菌（ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３，ＳＳＡ－
ＡＴＣＣ２９２１３），标 准 型 大 肠 埃 希 氏 菌 （ＳＥＣ－
ＡＴＣＣ２５９２２），标 准 型 铜 绿 假 单 胞 菌 （ＳＰＡ－
ＡＴＣＣ２７８５３），临床型无乳链球菌（ＣＳＡ－０３５９８２７６），
临床型福氏志贺菌（ＣＳＦ－０３４７５４９１），临床型鼠伤寒
沙门菌（ＣＳＴ－５００２３２４１７２），水解络蛋白（ｍｕｅｌｅｒ－
ｈｉｎｔｏｎ，Ｍ－Ｈ）琼脂培养基、Ｍ－Ｈ 培养液 （型号：
ＣＭＯ３３７，厂家：ＯＸＯＩＤ，英国），血平板 （型 号：
ＣＭＯ３３１，厂 家：ＯＸＯＩＤ，英 国 ）。 细 菌 ＳＳＡ－
ＡＴＣＣ２５９２３、ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３、ＳＥＣ－ＡＴＣＣ２５９２２
和ＳＰＡ－ＡＴＣＣ２７８５３均采购于温州市康泰生物科技
有限公司。细菌 ＣＳＡ－０３５９８２７６、ＣＳＦ－０３４７５４９１和
ＣＳＴ－５００２３２４１７２为第二军医大学长海医院检验
科在不同时期从临床标本中分离获得的致病
菌株。
２　方法和结果
２．１　奇蒿氯仿、乙酸乙酯部位分离　参照文献［１２］
方法逐步提取分离得到奇蒿乙酸乙酯和氯仿部位提
取物的各组分，如图１。分离流分通过薄层层析
（ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＣ）点样，合并含相
同成分的提取流分，氯仿极性部位和乙酸乙酯极性
部位各得到２６个合并样品，氯仿部位合并得到样品
为Ａ１～Ａ２６；乙酸乙酯部位合并得到样品为Ｂ１～
Ｂ２６。以上样品均经过旋转蒸发仪浓缩成浸膏状，再
通过真空离心蒸发浓缩器制备成干粉状物（部分仍
为浸膏状）。所得样品均保存于１．５ｍＬ的ＥＰ管
中，６０Ｃｏ灭菌待用。
２．２　体外抗菌实验
２．２．１　纸片扩散法实验　称取奇蒿的氯仿提取物
及乙酸乙酯提取物各分离流分样本１０ｍｇ，分别加
入助溶剂ＣＭＣ－Ｎａ　１ｍｇ，采用灭菌蒸馏水溶解并加
至１ｍＬ配制成质量浓度为１０ｍｇ／ｍＬ的药液。将
加有５０μＬ药液的圆纸片放在含标准量细菌接种物
的 Ｍ－Ｈ琼脂板上，置于３５℃培养箱中培养１８ｈ，测
量含药纸片周围的抑菌圈大小，以此判断抗菌作用
的强弱。设置灭菌蒸馏水及助溶剂空白对照组（取
助溶剂ＣＭＣ－Ｎａ　１ｍｇ，采用灭菌蒸馏水溶解并加至
１ｍＬ），筛选出纸片扩散法中抑菌圈≥９ｍｍ（纸片直
径６ｍｍ）的抗菌流分样品，以待进一步测定样本的
最小杀菌浓度（ｍｉｎｉｍａｌ　ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，
ＭＢＣ）。
氯仿提取物和乙酸乙酯提取物分离得到的各样
本与细菌配比均进行３次平行实验，取平均值，具有
活性的样本抑菌结果见表１，无明显抑菌活性的样
本和阴性对照组均未列入表中。
·７３２·
第二军医大学学报　２０１６年２月，第３７卷
图１　奇蒿的氯仿和乙酸乙酯部位提取流程
表１　奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物各分离样品的纸片扩散法抑菌结果
菌株
抑菌圈直径ｄ／ｍｍ
Ａ９ Ａ１２ Ａ２０ Ｂ１ Ｂ２ Ｂ３ Ｂ４ Ｂ６ Ｂ８ Ｂ９ Ｂ１３ Ｂ１７ Ｂ１８
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３　 １６　 １６　 １４　 １６　 １６　 １４　 １６　 １４　 １８　 １６　 ６　 ６　 ６
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３　 ７　 １４　 ８　 １２　 １６　 １２　 １４　 ６　 １８　 １２　 ６　 ６　 ６
ＣＳＡ－０３５９８２７６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 １０　 １０　 １０
ＣＳＦ－０３４７５４９１　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 １２　 ６　 ６
ＣＳＴ－５００２３２４１７２　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 ６　 １２　 ６　 ６
　　纸片直径为６ｍｍ
２．２．２　常量肉汤稀释法测定 ＭＢＣ　接种菌液制
备：用接种环挑取３～５个形态相似的待检菌落，将
菌落接种于４～５ｍＬ的 Ｍ－Ｈ肉汤中，于３５℃培养
箱中孵育２～６ｈ。取增菌后的对数生长期菌液用
Ｍ－Ｈ肉汤校正浓度至０．５麦氏比浊标准，再将菌悬
液用 Ｍ－Ｈ肉汤进行１∶１００稀释后备用。
不同浓度抗菌药物的制备和菌液接种：取无菌
试管９支排列一排，第１管加入 Ｍ－Ｈ肉汤１．６ｍＬ，
其余每管中加入 Ｍ－Ｈ肉汤１ｍＬ，在第１管中加入
１０ｍｇ／ｍＬ的抗菌原药液０．４ｍＬ混匀，然后从第１
管中吸取１ｍＬ溶液至第２管，混匀后再从第２管中
吸取１ｍＬ至第３管，如此依次连续倍比稀释至第７
管，并从第７管中吸取１ｍＬ弃之，第８管为不含药
物的阳性对照管，第９管为无菌生长的阴性对照管。
·８３２·
第２期．陈　俊，等．中药奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物的抗菌化学组分研究
此时各管药物浓度依次为２、１、０．５、０．２５、０．１２５、
０．０６２　５、０．０３１　２５ｍｇ／ｍＬ。然后向各管中加入上
述制备好的接种菌液各１ｍＬ，使每管的最终菌液细
菌形成单位为５×１０５　ＣＦＵ／ｍＬ。第１管至第７管
药物浓度分别为１、０．５、０．２５、０．１２５、０．０６２　５、
０．０３１　２５、０．０１５　６２ｍｇ／ｍＬ。将接种好的各个浓度
药液的试管密封，置３５℃孵箱中孵育１６～２０ｈ。将
实验组样本、阳性对照组样本及阴性对照组样本均
放入３７℃培养箱中培养４８ｈ，从每一个含有不同浓
度药物的菌液试管中取１００μＬ菌悬液，分别加入琼
脂平板上，放３７℃培养箱中培养４８ｈ，观察细菌生长
的菌落数，以无菌落形成的药液最小浓度为 ＭＢＣ。
纸片扩散法实验中抑菌圈直径≥９ｍｍ的样品（Ａ９、
Ａ１２、Ｂ２、Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１８）与敏感菌配对，测定
各配对样本 ＭＢＣ，其中，Ａ２０、Ｂ１、Ｂ３、Ｂ６、Ｂ９因样品量
过少，未进行进一步的 ＭＢＣ测试。结果见表２。
表２　奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物中活性抗菌分离样品的常量肉汤稀释法 ＭＢＣ结果
提取物 菌株
药物浓度ρＢ／（ｍｇ·ｍＬ－１）
１．０００　 ０．５００　 ０．２５０　 ０．１２５　 ０．０６２　５　 ０．０３１　２５　０．０１５　６２ 对照
ＭＢＣ
ρＢ／（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ａ９ ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３ － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ０．２５０
Ａ１２ ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
Ｂ２ ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３ － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ０．２５０
Ｂ４ ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
Ｂ８ ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２５９２３ － － － － － ＋ ＋ ＋ ０．０６２　５
ＳＳＡ－ＡＴＣＣ２９２１３ － － － － － ＋ ＋ ＋ ０．０６２　５
Ｂ１３ ＣＳＡ－０３５９８２７６ － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ０．２５０
ＣＳＦ－０３４７５４９１ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
ＣＳＴ－５００２３２４１７２ － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ０．１２５
Ｂ１７ ＣＳＡ－０３５９８２７６ － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ０．２５０
Ｂ１８ ＣＳＡ－０３５９８２７６ － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ０．２５０
　　＋：细菌生长；－：细菌未生长．ＭＢＣ：最小杀菌浓度
２．３　活性单体化合物的结构鉴定　根据以上体外
抗菌活性筛选，样品组分Ａ９、Ａ１２、Ｂ２、Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３、
Ｂ１７、Ｂ１８均表现出一定的抗菌活性，通过 ＨＰＬＣ－
ＴＯＦ－ＭＳ总离子流色谱图发现纯度较高的样品流分
为Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３，且根据总离子图中信号峰质谱数据
判断可能的化合物并与之比较，如图２。通过ＴＬＣ
法比较化合物Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３与推测可能对照品的Ｒｆ
值，见图３，３个化合物与对照品的Ｒｆ值基本一致。
结合１　ＨＮＭＲ、１３　ＣＮＭＲ数据，得到化合物 Ｂ４、Ｂ８、
Ｂ１３分别为单体化合物芹菜素、异泽兰黄素、咖啡
酸，其结构式见图４。
２．４　活性单体化合物的相对含量测定　采用高效
液相色谱法测定奇蒿乙酸乙酯提取部位中芹菜素、
异泽兰黄素和咖啡酸的相对含量。色谱条件如下：
美国 Ｗａｔｅｒｓ　Ａｔｌａｎｔｉｓ　ｄＣ１８色谱柱（４．６ｍｍ ×２５０
ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈（Ａ）和水（Ｂ），梯度洗脱；
Ａ相体积分数随时间的变化为１５％～２０％（０～１０
ｍｉｎ），２０％ ～３０％ （１０～１５ ｍｉｎ），３０％ ～４０％
（１５～３０ｍｉｎ），４０％～１００％（３０～４０ｍｉｎ）；流速１．０
ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长３２５ｎｍ；柱温２５℃；进样量５
μＬ。色谱图见图５，其中，保留时间ｔ＝９．６３１ｍｉｎ的
信号峰１为咖啡酸，ｔ＝２９．３１７ｍｉｎ的信号峰２为芹
菜素，ｔ＝３６．１６１ｍｉｎ的信号峰３为异泽兰黄素。该
３个化合物与其他化合物信号峰均基线分离。根据
峰面积归一化法计算得到总吸收峰面积 Ａ＝
２２５　０４５．３，咖啡酸、芹菜素、异泽兰黄素的峰面积分
别为３　１５２．５、５４０．９、３５．６，因此３个化合物的相对
含量分别为１．４０１％、０．２４％、０．０１６％。
·９３２·
第二军医大学学报　２０１６年２月，第３７卷
图２　化合物Ｂ４（Ａ）、Ｂ８（Ｃ）、Ｂ１３（Ｅ）与对照品芹菜素（Ｂ）、异泽兰黄素（Ｄ）、咖啡酸（Ｆ）的总离子流图谱
图３　化合物Ｂ４（Ａ）、Ｂ８（Ｂ）、Ｂ１３（Ｃ）与对照品芹菜素（Ａ）、异泽兰黄素（Ｂ）、咖啡酸（Ｃ）的薄层层析（ＴＬＣ）图
图４　３个单体化合物的结构式
图５　奇蒿乙酸乙酯提取部位的高效液相色谱图
１：咖啡酸；２：芹菜素；３：异泽兰黄素
３　讨　论
３．１　提取部位的活性成分分析　基于前期奇蒿提
取物体外抗菌活性的实验研究结果［１２］，本研究对奇
蒿的抗菌有效部位展开进一步分析，结果显示组分
Ａ９、Ａ１２、Ｂ２、Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３、Ｂ１７、Ｂ１８对临床致病菌均
有显著活性，其中Ａ９、Ａ１２为氯仿部位分离组分，其
余均为乙酸乙酯部位分离组分。对以上活性组分进
行纯度检查和结构鉴定，发现组分Ｂ４、Ｂ８、Ｂ１３为单
体化合物，分别为芹菜素、异泽兰黄素、咖啡酸；其余
·０４２·
第２期．陈　俊，等．中药奇蒿氯仿、乙酸乙酯提取物的抗菌化学组分研究
组分均含杂质，有待后续进一步分离纯化。本研究
采用常规分离手段初步探索了奇蒿活性部位的抗菌
单体化合物，研究结果表明抗菌活性成分多集中于
乙酸乙酯提取部位，该研究结果为本次实验的重大
突破，为深入研究奇蒿的抗菌药理机制指明方向。
在后续的研究中可深入研究奇蒿乙酸乙酯部位的化
学成分，以期得到更多单体化合物。
３．２　活性结果分析　本研究采用纸片扩散法和肉
汤稀释法对分离得到的全部组分进行了抗菌实验，
此体外抗菌实验方法常规可靠，是目前体外抗菌活
性筛选的常用方法。本次实验结果显示，奇蒿氯仿、
乙酸乙酯部位的分离组分对标准型大肠埃希氏菌
ＳＥＣ－ＡＴＣＣ２５９２２、标 准 型 铜 绿 假 单 胞 菌 ＳＰＡ－
ＡＴＣＣ２７８５３均未表现出明显的抗菌活性。前期研
究［１２］提示奇蒿氯仿提取物部位对ＳＥＣ－ＡＴＣＣ２５９２２
的 ＭＢＣ为６．２５ｍｇ／ｍＬ，前期研究所采用的抗菌活
性研究方法与本实验抗菌活性测试方法相同，表明
本次试验未能分析获得奇蒿中抗大肠埃希氏菌的活
性化合物，需要在后续研究中对奇蒿氯仿提取部位
中含杂质的组分或氯仿提取部位进一步分离纯化，
以寻找抗ＳＥＣ－ＡＴＣＣ２５９２２的活性成分。分离组分
中Ａ９、Ａ１２、Ｂ２、Ｂ１７、Ｂ１８对金黄色葡萄球菌、无乳
链球菌、福氏志贺菌和鼠伤寒沙门菌具有不同程度
的抗菌活性，但未能确定其中发挥作用的具体成分，
需要进一步去除杂质，对得到的单体化合物通过化
学方法和波谱解析确定其结构。
３．３　芹菜素和异泽兰黄素抗菌分析　奇蒿氯仿、乙
酸乙酯中多个分离组分对金黄色葡萄球菌均具有显
著抗菌活性，以乙酸乙酯部位中黄酮类化合物异泽
兰 黄 素 （Ｂ８）的 活 性 最 强，其 ＭＢＣ 为
０．０６２　５ｍｇ／ｍＬ，黄酮类化合物芹菜素（Ｂ４）对金黄
色葡萄球菌也有显著杀菌活性。本课题组拟根据这
一方向，进一步研究奇蒿中其他黄酮类化合物对金
黄色葡萄球菌的杀菌作用，同时通过整体药效学研
究，以期发现黄酮类化合物如异泽兰黄素、芹菜素对
金黄色葡萄球菌的抗菌规律和杀菌机制。本研究首
次报道了黄酮类化合物异泽兰黄素的抗菌活性，拟
在下一步研究中对其进行体内药代动力学研究。
３．４　咖啡酸抗菌分析　咖啡酸是目前研究较为广
泛的化合物，文献［１３］报道咖啡酸具有抗菌、抗病毒、
降糖、降脂、调节免疫等功效，可用于治疗多种疾病。
本次研究发现咖啡酸对临床常见的无乳链球菌、福
氏志贺菌以及鼠伤寒沙门菌具有显著的抗菌活性，
其 ＭＢＣ分别为０．２５、０．１２５、０．１２５ｍｇ／ｍＬ，为临床
应用咖啡酸治疗相关细菌感染提供数据指导。咖啡
酸也是目前药物化学合成的热门先导化合物之一，
本研究为咖啡酸合成应用提供又一重要原料来源。
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［本文编辑］　尹　茶
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