全 文 ：收稿日期:2006-08-10
基金项目:广东省科技计划项目(2005A30101002);广东省普通高校自然科学研究基金资助项目(04Z002)
作者简介:李沛波(1973-),湖南涟源人,博士,讲师,研究方向:心血管药理学和中药新药研究与开发;苏薇薇,教授,通讯作者.E-mail:
lsssww@zsu.edu.cn
田 基 黄 系 藤 黄 科 金 丝 桃 属 植 物 地 耳 草
(HypericumjaponicumThunb.)的干燥全草。味甘、
微苦、性凉,归肝、胆、大肠经,具有清热利湿、散瘀
止痛、消肿解毒的功效[1]。药理研究表明,田基黄具
有保肝[2]、抗肿瘤[3,4]、调节免疫功能[5]、抗病毒[6]、抗
氧化[7]、止血[8]等作用。以田基黄为原料制成的田基
黄注射液收载于 1977版中国药典,现临床常用于
急、慢性肝炎的治疗,但其有效成分尚不明确。本
研究组承担了国家药典委员会 “田基黄药材及田
基黄注射液指纹图谱的研究”课题,在对田基黄进
田基黄中三个黄酮类化合物保肝退黄作用的实验研究
李沛波,王永刚,吴钉红,吴 忠,苏薇薇
(中山大学生命科学学院,广东 广州 510275)
摘 要:【目的】 研究田基黄中槲皮苷(Quercetin-3-β-D-rhamnose)、异槲皮苷(Quercetin-3-β-D-
glucoside)、田基黄苷(Quercetin-7-β-D-rhamnose)3个黄酮类化合物的保肝退黄作用。【方法】选用四氯化碳
(CCl4)和 D-氨基半乳糖胺 (D-Gal)致大鼠急性肝损伤模型,观察 3个黄酮类化合物对血清丙氨酸转氨酶
(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)的影响;用 α-萘异硫氰酸酯(ANIT)致小鼠黄疸性肝损伤模型,观察 3个黄酮类
化合物对血清总胆红素(T.BIL)的影响。【结果】异槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷均能显著抑制 CCl4和 D-Gal所致
的大鼠血清 ALT和 AST升高,对 ANIT所致的小鼠血清总胆红素升高有明显的降低作用。【结论】田基黄中 3
个黄酮类化合物异槲皮苷、槲皮苷、田基黄苷均有保肝退黄作用。
关键词:田基黄;黄酮;保肝退黄;实验研究
中国分类号:R285.5;R282.71.5;R962 文献标识码:A 文章编号:1627-3554(2007)01-0040-04
ExperimentalStudyofThreeFlavonoidsIsolatedfromHypericumjaponicumThunb.
onHepatoprotectiveandJaundice-relievingEfects
LIPei-bo,WANGYong-gang,WUDing-hong,WUZhong,SUWei-wei
(ColegeofLifeSciences,SUNYat-senUniversity,Guangzhou510275,China)
Abstract:【Objective】 Tostudythehepatoprotectiveandjaundice-relievingefectsofthreeflavonoids
Quercetin-3-β-D-rhamnose,Quercetin-3-β-D-glucoside, andQuercetin-7-β-D-rhamnoseisolatedfrom
HypericumjaponicumThunb.【Methods】AcutehepaticinjurymodelsinducedbyCCl4andD-aminogalactosewere
usedtoinvestigatetheefectofthethreeflavonoidsontheserumASTandALTlevels;alpha-naphthylisothiocyanate
(ANIT)-inducedcholestasismodelwasusedtostudytheefectofthethreeflavonoidsonserumtotalbilirubinlevels.
【Results】 Quercetin-3-β-D-glucoside,Quercetin-3-β-D-rhamnose,andQuercetin-7-β-D-rhamnosewereableto
significantlypreventtheCCl4andD-aminogalactose-inducedriseinserumenzymes (ASTandALT) andlower
ANIT-increasedserumtotalbilirubinlevels. 【Conclusion】 Quercetin-3-β-D-glucoside,Quercetin-3-β-D-
rhamnose,andQuercetin-7-β-D-rhamnoseareofhepatoprotectiveandjaundice-relievingefects.
Keywords: HypericumjaponicumThunb; flavonoids; hepatoprotectiveandjaundice-relievingefects;
experimentalstudy
[JSUNYat-senUniv(MedSci),2007,28(1):40-43]
第28卷 第1期
2007年 1月
Vol.28 No.1
Jan. 2007
中山大学学报(医学科学版)
JOURNALOFSUNYAT-SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES)
DOI:10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2007.0009
行指纹图谱研究的过程中,通过光二极管阵列检
测器(Diode-ArayDetector,DAD)检测到多种黄酮
类化合物,其中槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷含量
较高。笔者对该 3个化合物进行了保肝退黄的药
理实验,为进一步研究田基黄治疗急、慢性肝炎的
物质基础提供了实验依据。
1 材料与方法
1.1 药物及试剂
槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷由本实验室从田
基黄药材中提取分离所得,经测定纯度达到 98%
以上,实验前用生理盐水配制成 0.05mg/mL的溶
液供小鼠给药,配制成 0.07mg/mL的溶液供大鼠
给药。甘利欣注射液,江苏正大天晴药业有限公
司,批号:DG0540,实验前用生理盐水稀释成 0.27
mL/mL的溶液。茵栀黄注射液:常熟雷允上制药有
限公司,批号:20041023,实验前用生理盐水稀释
成0.26mL/mL的溶液。CCl4:汕头市光华化学厂,
AR,批号:20040108。D-氨基半乳糖胺 (D-
aminogalactose,D-Gal),江苏省无锡市久丰工贸有
限公司,批号:20040615。丙氨酸转氨酶(ALT)、门
冬氨酸转氨酶 (AST)、总胆红素 (bilirubintotal,T.
BIL)试剂盒:上海荣盛生物技术有限公司,批号分
别为:20041108、20050125、20041025。α-萘异硫氰
酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT),Sigma公
司产品,批号:04-467,临用前用花生油配成所需
浓度。
1.2 动物
昆明种小鼠雌雄各半,体质量(20±2)g,动物
合格证号:粤监证字2004A018。SD大鼠雌雄各半,
体质量 (190±20)g,动物合格证号:粤监证字
2004A021。由广东省医学实验动物中心提供。
1.3 对 CCl4所致急性肝损伤大鼠 ALT、AST的
影响
按文献[9]方法。SD大鼠 120只,按随机数字
表进行完全随机化分为 12组,每组 10只即正常
对照组,CCl4模型组,甘利欣注射液组,槲皮苷低、
中、高剂量组,异槲皮苷低、中、高剂量组,田基黄
苷低、中、高剂量组,每组10只。用药组每天按10
mL/kg腹腔注射药液 1次,正常对照组和 CCl4模
型组给予等体积生理盐水,连续 7d。末次给药后
1h,除正常对照组外,其余各组大鼠按剂量 0.6
mL/kg腹腔注射 0.3mL/mL的 CCl4植物油溶液造
模,正常对照组腹腔注射等体积植物油,同时禁食
不禁水。24h后由眼眶静脉丛取血,分离血清,采
用试剂盒测定血清ALT、AST含量。
1.4 对 D-氨基半乳糖胺所致急性肝损伤大鼠
ALT、AST的影响
按文献[9]方法。SD大鼠 120只,按随机数字
表进行完全随机化,分为12组,即正常对照组,D-
氨基半乳糖胺(D-aminogalactose,D-Gal)模型组,
甘利欣注射液组,槲皮苷低、中、高剂量组,异槲皮
苷低、中、高剂量组,田基黄苷低、中、高剂量组,每
组10只。用药组每天按10mL/kg腹腔注射药液1
次,正常对照组和 D-氨基半乳糖胺模型组给予等
体积生理盐水,连续7d。末次给药后1h,除正常
对照组外,其他各组大鼠按剂量400mg/kg腹腔注
射 D-氨基半乳糖胺造模,同时禁食不禁水。24h
后由眼眶静脉丛取血,分离血清,采用试剂盒测定
血清ALT、AST含量。
1.5 对 α-萘异硫氰酸酯所致黄疸性肝损伤小鼠
T.BIL的影响
按文献[10]方法。昆明种小鼠 120只,按随机
数字表进行完全随机化分组,分为 12组,即正常
对 照 组 ,α-萘 异 硫 氰 酸 酯 (alpha-
naphthylisothiocyanate,ANIT)模型组,茵栀黄注射
液组,槲皮苷低、中、高剂量组,异槲皮苷低、中、高
剂量组,田基黄苷低、中、高剂量组,每组10只。用
药组每天按 10mL/kg腹腔注射药液 1次,正常对
照组和 α-萘异硫氰酸酯模型组每天腹腔注射等
体积生理盐水,连续7d。末次给药后1h,除正常
对照组外,其余各组小鼠按剂量 100mg/kg灌服
α-萘异硫氰酸酯造模,同时禁食不禁水,48h后
由眼眶静脉丛取血,常规分离血清,采用试剂盒按
咖啡因法测定总胆红素的含量。
1.6 统计学处理
实验数据以“x±s”表示。采用 SPSS11.0统计
软件进行 One-WayANOVA统计分析,P<0.05时
有统计学意义。
2 结 果
2.1 对 CCl4所致急性肝损伤大鼠 ALT、AST的
影响
CCl4能引起大鼠急性肝损伤,显著提高大鼠
李沛波,等.田基黄中3个黄酮类化合物保肝退黄作用的实验研究第1期 41
血清 ALT、AST含量。而异槲皮苷的中、高剂量及
槲皮苷和田基黄苷的低、中、高剂量均能抑制 CCl4
引起的大鼠血清 ALT、AST含量升高(与模型组比
较,P<0.01或0.05;表1)。
表 1 3个黄酮类化合物对 CCl4所致急性肝损伤的影响
Table1 EfectofthreeflavonoidsonacutehepaticinjuryinducedbyCCl4 (x±s)
Normalcontrol
Modelcontrol
Ganlixininjection
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Dosage
Saline
Saline
2.7mL/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
ALT(U/L)
21.7±9.5
867.1±349.21)
197.1±79.42)
385.5±110.23)
260.6±136.82)
223.5±98.32)
587.0±153.5
230.9±110.92)
220.4±56.92)
153.3±36.42)
100.2±28.12)
86.3±23.42)
AST(U/L)
203.6±50.9
1323.9±643.21)
330.2±113.92)
638.2±140.33)
313.4±69.72)
290.3±86.32)
998.4±241.0
266.6±36.92)
245.5±65.42)
534.3±210.33)
266.0±64.72)
231.2±58.42)
1)comparedwithnormalcontrolP<0.01;2)comparedwithmodelcontrolP<0.01;3)comparedwithmodelcontrolP<0.05
2.2 对 D-氨基半乳糖胺所致急性肝损伤大鼠
ALT、AST的影响
由表 2可见,D-氨基半乳糖胺能引起大鼠急
性肝损伤,显著提高大鼠血清 ALT、AST含量。而
中、高剂量的槲皮苷、田基黄苷和低、中、高剂量的
异槲皮苷均能抑制 D-氨基半乳糖胺引起的大鼠
血清ALT、AST含量升高 (与模型组比较,P<0.01
或0.05)。
表 2 3个黄酮类化合物对 D-氨基半乳糖胺(D-Gal)所致急性肝损伤的影响
Table2 EfectofthreeflavonoidsonacutehepaticinjuryinducedbyD-Gal (x±s)
1)comparedwithnormalcontrolP<0.01;2)comparedwithmodelcontrolP<0.05;3)comparedwithmodelcontrolP<0.01
Normalcontrol
Modelcontrol
Ganlixininjection
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Dosage
Saline
Saline
2.7mL/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
ALT(U/L)
23.3±6.3
643.0±278.91)
301.5±141.12)
480.4±120.4
134.8±70.13)
100.2±26.33)
203.5±42.23)
89.1±38.33)
65.2±20.13)
502.5±128.9
169.4±84.63)
142.1±32.23)
AST(U/L)
259.4±57.5
1022.0±446.91)
377.0±79.83)
986.3±286.2
431.3±48.73)
321.5±100.43)
637.2±143.33)
315.6±104.83)
223.4±53.33)
895.4±301.2
337.9±60.83)
299.7±59.93)
2.3 对 α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致黄疸性肝损
伤小鼠T.BIL的影响
由表 3可见,α-萘异硫氰酸酯能引起小鼠黄
疸性肝损伤,显著提高小鼠血清T.BIL含量。而槲
皮苷和异槲皮苷的中、高剂量及田基黄苷的低、
中、高剂量均能抑制 α-萘异硫氰酸酯引起的小鼠
血清T.BIL含量升高(与造模组比较,P<0.01)。
中山大学学报(医学科学版) 第28卷42
[1]
[2]
[3]
[4]
[5]
[6]
[7]
[8]
[9]
[10]
[11]
[12]
[13]
[14]
3 讨 论
田基黄为藤黄科植物地耳草的全草。文献报
道[11]该植物中含有多种化学成分,如:色原烯类
(chromeme), 二 氢 黄 酮 醇 鼠 李 糖 苷(flavanonol
rhamnoside),二肽类(dipeptidederivative),吨酮类
(xanthones), 间 环 己 三 醇 衍 生 物(phloroglucinol
derivatives)等。
由田基黄提取制成的灭菌水溶液(即田基黄注
射液)对急性黄疸型、迁延性和慢性及重症肝炎及
肝硬化的 SGPT下降均有较好效果,临床试验表
明,其对急性黄疸性和非黄疸性肝炎有效率达
95%,对迁延性和慢性肝炎有效率为 74%[12]。但在
现有文献报道中,有关田基黄抗肝损伤的有效成
分研究甚少。根据人们对黄酮类化学成分的研究
发现,黄酮类化合物除了具有对心脑缺血损伤、心
律失常的保护作用以及镇痛作用外,对肝损伤也
具有保护作用[13],像水飞蓟黄酮、艾纳香总香酮、
甘草类黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪素等黄酮类成分对
肝损伤均具有较显著的保护作用。在田基黄中,有
学者[14]认为黄酮类成分可能为田基黄抗肝损伤的
主要有效成分。在本实验中,我们对田基黄中含量
较高的 3个黄酮类化合物槲皮苷、异槲皮苷、田基
黄苷进行了保肝退黄的实验研究。结果表明,3个
黄酮类化合物槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷均对
CCl4或 D-氨基半乳糖胺所致的大鼠急性肝损伤
具有良好的保肝降酶作用,对 α-萘异硫氰酸酯所
致的小鼠黄疸性肝损伤均具有良好退黄的作用。
说明槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷是田基黄中的有
效成分。
本实验结果为进一步研究田基黄治疗急、慢
性肝炎的物质基础提供了实验依据。田基黄中除
槲皮苷、异槲皮苷、田基黄苷外的其他成分在治疗
急、慢性肝炎中的作用及各成分之间在发挥药效
时的相互作用有待进一步的研究。
参考文献:
宋立人,胡熙名,张国镇,等.中华本草[M].上海:上海
科学技术出版社,1999:598-601.
黎七雄,王玉山,彭仁秀,等.田基黄注射液对四氯化
碳引起小鼠肝损伤的保护作用 [J].华西药学杂志,
1992,7(3):146-149.
黎七雄,孙忠义,陈金和.田基黄对人喉癌 Hep-2和
人宫颈癌 Hela细胞株生长的抑制作用[J].华西药学
杂志,1993,8(2):93-94.
金辉喜,李金荣.田基黄对人舌癌细胞株 TSCCa细胞
毒作用的研究[J].临床口腔医学杂志,1997,13(1):
19-20.
周小玲,柯美珍,宋志军.田基黄对大鼠呼吸道及全
身免疫功能的影响[J].广西医科大学学报,2001,18
(2):211-212.
吴移谋,占利生.田基黄水煎剂对 E型单纯疱疹病毒
复制的抑制作用[J].湖南微生物学通讯,1990,(2):7-
10.
蒋惠娣,黄夏琴,杨 怡,等.九种护肝中药抗脂质过
氧化作用的研究[J].中药材,1997,20(12):624-626.
李建良,朱照娟.田基黄治疗内脏出血[J].时珍国药
研究,1994,5(1):47—48.
徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学[M].3版.北
京:人民卫生出版社,2003:1346.
陈 奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版
社,2000:832-851.
李廷钊,柳润辉,张 薇,等.田基黄黄酮类化学成分
的研究[J].中国天然药物,2004,2(5):283-284.
陈丽云,杨立伟,苏薇薇,等.田基黄及其注射液的研
究进展[J].中药材,2002,25(7):525-528.
黄河胜,马传庚,陈志武.黄酮类化合物药理作用研究
进展[J].中国中药杂志,2000,25(10):589-592.
虞金宝,吕武清,李才堂,等.HPLC测定田基黄注射
液中槲皮素含量[J].中成药,2005,27(1):100-101.
(编辑 黄小延)
表 3 3个黄酮类化合物对 α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致黄
疸性肝损伤影响
Table3Efectofthreeflavonoidsoncholestasisinducedby
ANIT (x±s)
1)comparedwithnormalcontrolP<0.01;2)compared
withmodelcontrolP<0.01
Normalcontrol
Modelcontrol
Yinzhihuanginjection
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-rhamnose
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-3-β-D-glucoside
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
Quercetin-7-β-D-rhamnose
n
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
Dosage
Saline
Saline
2.6mL/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
0.25mg/kg
0.5mg/kg
1.0mg/kg
T.BIL(μmol/L)
4.6±1.6
100.6±36.31)
50.6±16.02)
84.2±21.1
32.7±10.32)
23.5±5.32)
87.4±26.1
42.4±12.82)
30.1±4.22)
51.0±11.02)
31.3±8.62)
20.0±3.22)
李沛波,等.田基黄中3个黄酮类化合物保肝退黄作用的实验研究第1期 43