全 文 ：、蜣螂、柴胡、黄芩、半夏(制)、党参、干姜、白芍等 23 味药物组
成。其功效为活血化瘀，软坚散结。现代药理研究表明，本方药
物及配伍组合有保护血管内皮的功能［9，10］，在防治 AS 方面有一
定的疗效，但是机制尚未阐明。本实验光镜观察到血管壁的病理
形态学变化证实模型成功;实验检测结果显示血府逐瘀汤可影响
血脂和血浆中 6 － Keto － PGF1α / TXB2 平衡的表达。以上结果提
示血府逐瘀汤有效防治 AS的可能机制与其调节脂质代谢，调节
血浆中 6 － Keto － PGF1α / TXB2 表达水平，改善血管内皮代谢，减
轻病变程度等有关，这可能是其抗 AS的分子机制之一。
参考文献:
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收稿日期:2011-06-30; 修订日期:2011-12-14
基金项目:河北省中医药局资助项目(No． 2010046)
作者简介:赵永明(1978-) ，女(汉族) ，河南汝南人，现任河北北方学院讲
师，硕士学位，主要从事新药研究开发工作．
* 通讯作者简介:郭春燕(1968-) ，女(汉族) ，河北万全人，现任河北北方
学院基础医学院教授，博士学位，主要从事中药新药研究开发工作．
土木香根中总黄酮的提取工艺的正交实验法优化
赵永明1，李素霞2，田亚汀1，王阿娇1，王 金1，郭春燕1*
(1．河北北方学院·基础医学院，河北 张家口 075000;
2．河北化工医药职业技术学院，河北 石家庄 050026)
摘要:目的 探讨土木香根中总黄酮的提取工艺。方法 通过对土木香提取参数中乙醇浓度、料液比、提取时间及提取次
数进行单因素实验，采用正交实验法，以总黄酮浸出量为考察指标，优化土木香总黄酮的提取工艺。结果 经过正交实验
得出的最佳工艺条件为乙醇浓度 65%，料液比 1∶ 10，提取时间为 1． 5h，回流提取 2 次，在此条件下土木香的总黄酮浸出
量为 14． 41 mg ·g －1。结论 经优化得到的提取工艺稳定、可行。
关键词:土木香; 总黄酮; 提取工艺; 正交试验
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 05． 036
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)05-1132-02
土木香 Inula helenium 为菊科旋覆花属植物，多年生草本，根
供药用。有健脾和胃、行气止痛、安胎功效，常用于脘腹胀痛，呕
吐泻痢，岔气作痛，胎动不安［1］。现代医学研究证明其还具有抑
制肿瘤细胞和结核分枝杆菌、降低血糖等作用［2 ～ 4］。
土木香中主要含有萜类、黄酮、挥发油、氨基酸和多糖等成
分。黄酮类物质具有多种药理作用，有广泛的开发价值与应用前
景。目前关于土木香的研究主要集中在倍半萜类，而关于总黄酮
的研究未见有文献报道。本文在单因素试验的基础上采用
L9(3
4)正交实验，优化总黄酮提取工艺，为土木香总黄酮的开发
研究奠定基础。
1 材料
土木香购自河北安国药材市场，经河北北方学院中医学院赵
恒成教授鉴定为菊科植物土木香的根，粉碎，过 20 目筛，备用。
芦丁(中国药品生物制品检定所，100080 － 200707，供含量测定
用)。UV2100 紫外可见分光光度计(美国 Labtech) ，其余试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 土木香总黄酮含量测定
2． 1． 1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 6． 05 mg，置于
10 ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度。
2． 1． 2 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液 0． 2，0． 4，0． 6，
0． 8，1． 0，1． 5 ml，分别置于 25 ml 量瓶中，分别加水至 10 ml。首
先加 5% NaNO2 溶液 1 ml，摇匀，放置 6 min;然后加 10%
Al(NO3)3溶液 1 ml，摇匀，放置 6 min;最后加 4% NaOH 溶液 10
ml，摇匀，放置 15 min后，加水定容;同时做空白组。于 510 nm处
测定吸光度，以吸光度对浓度做标准曲线，得回归方程为:A =
0． 010 2C － 0． 008(r = 0． 999 6) ，在 4． 84 ～ 36． 3 μg·ml －1范围内
线性关系良好。
2． 1． 3 总黄酮含量的测定 取各提取液 1 ml，按“2． 1． 2”项下方
法显色、测定，计算总黄酮含量，空白组为提取液不加显色剂，其
余操作相同。
2． 1． 4 稳定性实验 对同一供试品溶液，于 0，0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，
2． 5，3． 0 h依法测定，记录吸收值，结果 RSD为 1． 98%，样品在 3．
0 h内稳定。
2． 2 单因素考察
2． 2． 1 提取溶媒的选择 准确称取土木香粗粉 5 g，分别加入 10
倍量的 35%，50%，65%，80%，95%乙醇回流 1 次，提取时间为 1
h，滤过，用少量提取溶液洗涤，滤液定容至 100 ml 量瓶中。按
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 5
“2． 1． 2”项下方法显色、测定，计算总黄酮含量。结果见图 1。
结果表明，65%乙醇溶液作为提取溶媒时总黄酮浸出量最
高，乙醇浓度过高或过低并不增加浸出液中总黄酮含量，故选择
65%乙醇溶液作为提取溶媒。
图 1 乙醇浓度对总黄酮浸出的影响
2． 2． 2 提取溶媒量的考察 准确称取土木香粗粉 5 g，分别加入
6，8，10，12，14 倍量的 65%乙醇溶液。回流提取 1 次，时间为 1
h，其余操作同“2． 2． 1”项下，计算总黄酮含量。结果见图 2。
结果显示，土木香总黄酮的含量随着乙醇溶液的用量增大而
升高，在 10 倍量溶媒时达到最大值，继续增加提取溶媒量，总黄
酮含量并不随之增加，从节约成本、减少能耗角度考虑，选择 10
倍量乙醇溶液作为最佳溶媒量。
图 2 料液比对总黄酮浸出量的影响
2． 2． 3 提取时间的考察 准确称取土木香粗粉 5 g，加入 10 倍量
的 65%乙醇溶液，分别提取 0． 5，1． 0，1． 5，2． 0，2． 5，3． 0 h，按照
“2． 2． 1”项下从“滤过”开始操作，计算总黄酮含量。结果见图 3。
结果显示，提取时间为 1． 5 h，土木香根中总黄酮的浸出量最
高，但是随着回流时间的延长，总黄酮含量并不升高，甚至有所下
降，可能是由于土木香黄酮中含有热不稳定成分，在长时间加热
时分解破坏，故选择 1． 0 h作为最佳提取时间。
图 3 回流时间对总黄酮浸出量的影响
2． 2． 4 提取次数的考察 准确称取土木香粗粉 5 g，加入 10 倍量
的 65%乙醇溶液，提取 3 次，每次提取 1． 0 h，提取液分别定容至
100 ml量瓶中，精密吸取 1 ml，按“2． 1． 2”项方法显色测定，计算
总黄酮含量。结果见图 4。
图 4 提取次数对总黄酮浸出率的影响
结果显示，1 次提取所得总黄酮占总黄酮的 85%，第 2 次提
取所得总黄酮占总黄酮的 12%，而第 3 次只能提取得到 3%的总
黄酮，从经济学原理考虑，选择提取次数为两次。
2． 3 正交实验 综合单因素考察结果和实际生产过程，选择乙醇
浓度、提取溶媒量和提取时间为影响因素，各因素设定 3 个水平，
按 L9(3
4)表安排实验，计算总黄酮含量，正交试验安排及结果见
表 1，方差分析结果见表 2。
以提取物中土木香总黄酮含量为考察指标，直观分析观察
到，各因素对土木香总黄酮提取影响的顺序依次为 A ＞ C ＞ B。
方差分析结果结果表明乙醇浓度对总黄酮提取影响最大，具有显
著性意义。根据直观分析结果，认为最佳提取工艺为 A2B2C2，即
土木香药材加 10 倍量 65%乙醇，回流提取 2 次，1． 5h /次。
表 1 总黄酮提取工艺正交实验安排及结果
编
号
A
乙醇浓度
B
回流时间
C
料液比
D
总黄酮浸出量
/mg·(g药材)－ 1
1 1(55%) 1(1． 0 h) 1(1∶ 8) 1 10． 02
2 1 2(1． 5 h) 2(1∶ 10) 2 11． 63
3 1 3(2． 0 h) 3(1∶ 12) 3 10． 85
4 2(65%) 1 2 3 13． 68
5 2 2 3 1 14． 05
6 2 3 1 2 13． 24
7 3(75%) 1 3 2 10． 14
8 3 2 1 3 9． 87
9 3 3 2 1 11． 38
K1 10． 83 11． 28 11． 04 11． 82
K2 13． 65 11． 85 12． 23 11． 67
K3 10． 46 11． 82 11． 68 11． 47
R 3． 19 0． 57 1． 19 0． 35
表 2 总黄酮浸出量方差分析
来源 SS f MS P
A 18． 31 2 98． 95 ＜ 0． 05
B 0． 621 2 3． 36
C 2． 116 2 11． 44
D(误差) 0． 18 2
2． 4 验证实验 准确称取土木香根细粉 5． 0 g，共 3 份。按上述
最佳提取提取工艺:即土木香药材加 10 倍量 65%乙醇，回流提
取 2 次，1． 5 h /次。提取液浓缩定容至 100 ml量瓶中，取样，显色
测定总黄酮的含量。结果总黄酮的含量分别为 14． 06，14． 34 和
14． 83 mg·g －1，RSD为 2． 70%。按此优化条件进行提取时，总黄
酮含量稳定，提取条件合理可行。
3 讨论
本实验通过紫外分光光度法测定和正交实验优选土木香总
黄酮的最佳提取方案，通过较为系统的研究，确立了最佳提取方
案。该提取方法合理、简单、可行，有实际应用价值。
经显色后，对芦丁和总黄酮提取液进行全波长扫描，其最大
吸收波长均为 510 nm，故选定 510 nm作为测定波长。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 5 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 5 期