全 文 ：线叶菊总黄酮测定的方法学研究
杨　卿1　李　杰1　朱庆玲2
摘　要　目的:利用黄酮类化合物可与金属离子形成有色螯合物的机制 ,用比色法测定线叶菊中总黄
酮的含量。方法:NaNO2 -A1(NO3)3 -NaOH 体系与线叶菊总黄酮提取物反应 ,用比色法测定其结果 。结
果:最大吸收波长为 505 nm ,回归方程为A =0.0139C+0.0091 ,标准工作曲线的 r =0.9995 ,平均加标回
收率为 98.88%,RSD =1.0%。结论:该方法简单方便 ,准确可靠 ,可用来测定线叶菊中总黄酮的含量。
关键词　线叶菊总黄酮;测定;比色法;方法学
中图分类号　R927.2　　文献标识码　A　　文献编号 1006-(2009)06-415-03
Research on Method to Determine the Total flavones of Filifolium Sibiricum Kitam
Yang Qing , Li Jie , Zhu Qingling
The seventh People s Hosipital of Datong city
Abstract　Objective:To determine the contents of total flavone in Filifolium sibiricum Kitam by colorimetry that utilize the fact
that the mixture of flavone compounds with metal iron can fo rm colourfu1compounds.Methods:To carry on a reaction between the
extraction of tota1 flavone in Filifolium sibiricum Kitam and the system of NaNO2-A1(NO 3)3-NaOH , determined by colorimetry.
Results:the max wavelength was 505 nm , The regression equation was A=0.0139C+0.0091;the correlation coeficient of standard
curve was 0.9995 , the average recovery was 98.88%, The relative standard deviation was 1.0%。 Conclusion:The method to deter-
mine the Total flavones of Filifolium sibiricum Kitam.by using the colorimetry is feasible.
Key words　Total flavones of Filifolium sibiricum Kitam;Determination;Colorimetry;Methods
　　线叶菊[ Filifolium sibiricum(L.)Kitam.] 又名
兔毛蒿 、消疔草等 ,是菊科线叶菊属植物 ,其地上部
分入药 ,在临床上可治疗传染病高热 、疔疮痈肿 、血
瘀刺痛等症[ 1 , 2] 。研究证明 ,线叶菊总黄酮对金葡
菌有高度抑菌作用 ,对乙型链球菌 、伤寒杆菌 、福氏
痢疾杆菌中度敏感 ,对肺炎双球菌 、绿脓杆菌 、志贺
氏及宋内氏痢疾杆菌等均不敏感 ,对青霉素耐药金
葡菌仍有较好的抑菌作用[ 3] 。关于中药材中的总
黄酮含量测定已有报道[ 4] ,但其方法学研究还不尽
完善 ,故本文对线叶菊总黄酮含量测定的方法学进
行了研究。
1　仪器与试药
1.1　仪器
岛津 UV -250可见-紫外分光光度计(日本
岛津公司);721型分光光度计(上海第三分析仪器
厂);FA2004型电子天平(上海良平仪器仪表有限
公司)。
1.2　试药
芦丁对照品(中国药品生物制品检定所 ,批号
100080-200306);其它试剂试药均为分析纯 。
线叶 菊 采 自 内 蒙 古 大 青 山 区 (批 号
20060710),经内蒙古医学院药学院乔俊缠教授鉴
定。
2　方法与结果
2.1　测定方法的选择
线叶菊所含黄酮类化合物的主要成分为兔毛
蒿素 、北美圣草素 、万寿菊黄素 3 , 6-二甲醚等多
种黄酮类化合物 ,这三种黄酮类化合物均具有 3,4
-邻位羟基 ,在碱性条件下可与亚硝酸钠 、三氯化
铝反应而显红色 ,据此特点 ,选芦丁作为对照品 ,采
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第 23卷　第 6期
2009年　　12月
　　长治医学院学报　　　
　　　　　JOURNAL　OF　CHANGZHI　MEDICAL　COLLEGE 　　　
　　　Vol.23　No.6
　　　Dec.　2009
作者单位　1大同市第七人民医院(037005)　2 内蒙古自治区药品
检验所
用分光光度法进行含量测定。
2.2　测定波长的选择
分别取芦丁对照品溶液 、线叶菊药材溶液经显
色后在 200 nm ～ 700 nm 波长范围进行光谱扫描 ,
结果上述二种溶液在波长 505 nm 处均有明显吸
收 ,故选择 505 nm波长为测定波长 。
2.3　供试品溶液的制备
取本品中粉 1 g ,精密称定 ,加 70%的乙醇 40
mL ,加热回流 3 次 ,每次 2 h ,放冷 , 滤过 , 合并滤
液 ,用 70%乙醇洗涤残渣及容器 ,洗液并入滤液
中 ,减压回收乙醇 。水液用等倍量石油醚(30 ℃～
60 ℃)提取 3次 ,每次 15 mL ,弃去石油醚液 ,水液
浓缩至稠膏状 ,加 60%乙醇 60 mL ,溶解 ,滤过 ,滤
液置 100 mL 量瓶中 ,用少量 60%乙醇洗涤滤纸与
容器 ,洗液并入量瓶中 ,加 60%乙醇至刻度 ,摇匀。
精密量取 25 mL ,置 50 mL 量瓶中 ,加水至刻度 ,摇
匀 ,即得。
2.4　线性关系考察
取在 120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照品 20
mg ,精密称定 ,置 50 mL 量瓶中 , 加 60%乙醇 35
mL ,温热使溶解 ,放冷 ,加 60%乙醇稀释至刻度 ,摇
匀;精密吸取 25 mL ,置 50 mL 量瓶中 ,加水至刻
度 ,摇匀 , 即得(每 1 mL 中含无水芦丁 0.1843
mg)。精密吸取 0.0 mL 、1.0 mL 、2.0 mL 、3.0 mL 、
4.0 mL 、5.0 mL 、6.0 mL 对照品溶液分别置 25 mL
量瓶中 ,各加 30%乙醇至 6 mL ,加 5%亚硝酸钠溶
液 1 mL ,摇匀 ,放置 6 min , 加 10%硝酸铝溶液 1
mL ,摇匀 ,放置 6 min ,加氢氧化钠试液 10 mL ,加
30%乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 15 min。照分光光度
法于 505 nm 波长处测定吸光度。以吸光度对溶液
浓度进行回归分析 ,结果浓度在 7.2μg/mL ～ 43.2
μg/mL 范围内呈良好的线性关系。回归方程 A =
0.0139C+0.0091 , r =0.9995。标准曲线见表 1。
表 1　标准曲线数值表
对照品浓度(μg/mL) 7.2 14.4 21.6 28.8 36.0 43.2
吸光度值(A) 0.105 0.210 0.309 0.421 0.508 0.605
2.5　提取次数的考察
为保证被测成分在回流提取过程中能全部提
净 ,实验研究中对提取次数做了考察 。
取本品中粉 1 g ,精密称定 ,加 70%的乙醇 40
mL ,加热回流 4次 ,每次2 h ,放冷 ,滤过 ,用 70%乙
醇洗涤容器 ,洗液并入滤液中 ,各次提取液分别按
供试品溶液制备项下的方法 ,自“减压回收乙醇”
起 ,依法制得供试品溶液 。精密量取各供试品溶液
1mL ,分别置 25 mL 量瓶中 ,照标准曲线制备项下
的方法 ,自“加 30%乙醇至 6 mL”起依法测定吸光
度 ,结果见表 2。
表 2　提取次数的考察
提取次数 第一次 第二次 第三次 第四次
吸光度值(A) 0.391 0.042 0.019 0.012
　　
表 2中数据可见 ,提取三次 ,黄酮类化合物基
本提净 ,故将提取次数定为三次。
2.6　稳定性试验
取供试品溶液 1 mL ,置 25 mL 量瓶中 ,照标准
曲线制备项下的方法 ,自“加 30%乙醇至 6 mL”起 ,
依法分别于 0 min 、5 min 、10 min 、15 min 、20min 、25
min 、30 min 、35 min测定吸光度 ,结果见表 3。
表 3　不同时间测定样品中总黄酮的吸光度值
时间(min) 0 5 10 15 20 25 30 35
吸光度值(A)0.423 0.428 0.431 0.434 0.434 0.434 0.434 0.434
从表中数据可见 ,黄酮类化合物显色 15 min
后达到最大吸光度值 ,35 min内吸光度值稳定 。
2.7　重复性试验
取供试品 6份 ,各 1 g ,精密称定 ,分别按供试
品溶液的制备方法操作 ,得供试品溶液 ,测定每份
含量 ,结果见表 4。
表 4　样品中总黄酮含量重复性实验结果
样品号 取样量(g) 吸光度值(A) 含量(mg/g)平均含量(mg/g)RSD(%)
1 1.0003 0.336 127.2
2 0.9995 0.333 126.2
3 0.9994 0.334 126.6 127.1 0.52
4 1.0002 0.335 126.8
5 1.0006 0.337 127.6
6 1.0011 0.338 127.9
2.8　加样回收试验
取供试品中粉 6份 ,各 1 g ,精密称定 ,各加入
416 长治医学院学报
芦丁对照品 2 mg ,分别按供试品溶液的制备方法
操作 ,得供试品溶液 ,测定每份含量 ,计算回收率 ,
测定结果见表 5。
表 5　加样回收测定结果
　 称样量(g)
样品中总黄酮
含量(mg)
加入对照品
量(mg)
吸光度值
(A)
测得总黄酮
含量(mg)
回收率
(%)
1 1.0002 118.11 9.17 0.363 127.30 100.2
2 1.0004 118.14 9.35 0.363 127.30 98.0
3 0.9996 118.13 8.99 0.362 126.94 98.0
4 1.0001 118.10 9.08 0.362 126.94 97.4
5 1.0002 118.11 9.17 0.363 127.30 100.2
6 1.0000 118.09 9.26 0.363 127.30 99.46
从表中数据可见 ,线叶菊药材的平均加样回收
率为 98.88%,变异系数 RSD =1.0%。
3　讨论
　　我们曾比较了不同组成的黄酮显色剂 ,如醋酸
钾一三氯化铝[ 5] 、醋酸钠缓冲液一三氯化铝[ 6]等 ,
但紫外区吸收峰较小 ,干扰较大 ,无法测定含量 。
从药材中提取总黄酮方法较多 ,如加热回流提
取 ,超声提取 ,索氏提取等 ,经比较热回流提取的含
量较高 ,且经脱脂后干扰较小 ,故采用此方法 。
　　在进行含量测定过程中 ,考虑到脱脂时乙醇和
石油醚混溶 ,须将乙醇回收完全 ,但过度的浓缩会
使黄酮析出而损失 ,因此这一过程必须控制好 。
　　本方法能够较准确的测定线叶菊药材中总黄
酮的含量 ,且操作简便 ,为制定药材及其制剂相应
的质量标准提供了可靠的参考 。
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(收稿日期:2009-09-22;修回日期:2009-10-11)
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