全 文 ：RP-HPLC法测定蜘蛛香中蒙花苷的含量
赵丽 ,王一萍 ,吴亚林 ,冒玉娟 ,李小平＊　(江苏畜牧兽医职业技术学院 ,江苏泰州 225300)
摘要　[目的]建立高效液相色谱法测定蜘蛛香(ValerianawalichiiDC.)中蒙花苷的含量 ,为蜘蛛香药材的质量评价提供参考。 [方法]
采用ZorbaxSBC18色谱柱(150.0mm×4.6mm, 5μm),流动相为甲醇– 0.1%的乙酸(V∶V=70∶30),流速 1.0ml/min,柱温 30℃,检测波
长为 326nm。 [结果 ]蒙花苷在 0.010 ～ 0.080μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系 (r=0.999 7);样品平均回收率为 98.20%,
RSD值为 1.78%(n=5)。 [结论] RP-HPLC法可作为蜘蛛香中蒙花苷含量测定的一种有效方法 , 这为蜘蛛香药材的质量评价提供了
参考。
关键词　蜘蛛香;蒙花苷;RP-HPLC法
中图分类号　S12　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)36-20638-02
DeterminationofContentofLinarininValerianawalichiiDC.byRP-HPLC
ZHAOLietal　(JiangsuAnimalHusbandryandVeterinaryColege, Taizhou, Jiangsu225300)
Abstract　[ Objective] ToestablishaRP-HPLCmethodforthedeterminationofthecontentoflinarininValerianawalichiiDC..[ Method]
HPLCconditionswereasfollows:separationcolumnofZorbaxSBC18 column(150.0mm×4.6 mm, 5 μm), mobilephaseofmethanol- 0.1%aceticacid(V∶V=70∶30), andflowrateof1.0ml/min, columntemperatureof30℃anddetectionwavelengthof326nm.[ Result]Intherangeof
0.010-0.080μg, therelationshipbetweenconcentrationoflinarinandpeakareawasgood(r=0.999 7).Theaveragerecoveryrateoflinarin
was98.2%withRSDvalueof1.78%(n=5).[ Conclusion] TheRP-HPLCmethodestablishedinthisstudyisfavorableforthedeterminationof
linarininValerianawalichiiDC., whichprovidesreferenceforthequalitycontrolofValerianawalichiiDC..
Keywords　ValerianawalichiiDC.;Linarin;RP-HPLC
作者简介　赵丽(1982-),女 , 江苏泰州人 , 助理实验师 ,硕士 ,从
事基础化学教育的研究。 ＊通讯作者 , E-mail:lixiaop-
ing1995@163.com。
收稿日期　2010-10-18
　　蜘蛛香(ValerianawalichiDC.)又名马蹄香 、老虎七 、印
度缬草等 ,系败酱科缬草属植物 [ 1] 。其根茎和根均可入药 ,
具有理气和中 、散寒除湿 、活血消肿之功效 ,用于治疗脘腹胀
痛 、呕吐泄泻 、小儿疳积 、风寒湿痹 、脚气水肿 、月经不调 、跌
打损伤和疮疖等症。研究表明 ,蜘蛛香主要化学成分为挥发
油 、环烯醚萜类和黄酮类等 ,其中黄酮类成分主要包括橙皮
苷 、蒙花苷等 [ 2] 。橙皮苷含量研究已有一些报道 ,但蒙花苷
含量的研究尚未见报道 [ 1 , 3] 。鉴于此 ,笔者采用 RP-HPLC法
对蜘蛛香中蒙花苷含量进行测定 ,以期为蜘蛛香药材的质量
评价提供参考并为后续研究奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料 。
1.1.1　研究对象 。蜘蛛香 ,购自四川成都荷花池中药材市
场 ,经江苏畜牧业兽医职业技术学院于生兰副教授鉴定为蜘
蛛香(ValerianawalichiDC.)正品。
1.1.2　主要试剂 。蒙花苷标准品 ,购自中国生物制品鉴定
所;甲醇 ,为市售色谱纯;石油醚 、乙醇 ,为市售分析纯;水为
超纯水。
1.1.3　主要仪器。ShimadzuLC-10ATVP双泵高效液相色
谱仪 、ShimadzuSPD-10AVP紫外检测器 ,由日本 Shimadzu公
司生产;超纯水器 ,由天津奥特赛恩斯仪器有限公司生产;旋
转蒸发仪 ,由上海申生科技有限公司生产。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件。色谱柱为 ZorbaxSBC18 (150.0mm×4.6
mm, 5 μm);流动相为甲醇 -0.1%的乙酸 (V∶V=70∶30);检
测波长为 326nm;流速为 1.0 ml/min;柱温 30 ℃,进样量为
10 μl。
1.2.2　对照品溶液的制备。精密称取蒙花苷对照品 2.00mg,
置于 200ml量瓶中 ,加入浓度为 80%的乙醇溶液超声溶解 ,
定容至刻度 ,摇匀 ,得对照品储备液。
1.2.3　供试品溶液的制备 。取蜘蛛香药材粉末(40 ～ 180
目)约 2.0 g, (精确至 0.000 1 g),加入 50 ml石油醚 ,回流 2
h,抽滤 ,减压蒸干;加入 80%乙醇 100 ml,超声提取 ,放冷 ,用
80%乙醇补足减失的重量 ,摇匀 ,过滤 ,蒸干 ,再用 80%乙醇
溶解 ,滤去不溶物 ,滤液定容至 10ml,即得供试品溶液。
1.2.4　方法学考察。
1.2.4.1　测定波长的选择 。以 80%乙醇为空白 ,在 200 ～
400 nm波长范围内分别对对照品溶液和供试品溶液进行紫
外光谱扫描 ,确定最大吸收波长为测定波长。
1.2.4.2　线性关系考察。精密量取 1、2、4、6、8 ml标准品溶
液分别置于 10 ml容量瓶中 ,用 80%乙醇定容至刻度 ,分别
进行测定 ,以峰面积为纵坐标 ,进样量为横坐标 ,绘制标准曲
线 ,并计算回归方程考察线性关系。
1.2.4.3　精密度试验 。取同一份对照品溶液 ,按 “1.2.1”中
色谱条件 ,连续进样 5次 ,计算蒙花苷峰面积相对标准偏差
值(RSD)。
1.2.4.4　稳定性试验。将对照品和供试品溶液室温下放
置 ,分别于第 0、2、4、6、8、12 h进样测定 ,计算蒙花苷色谱峰
峰面积 RSD值。
1.2.4.5　回收率试验 。采用加样回收试验 ,设高 、中 、低 3个
浓度 ,每个浓度分别制备 3份供试品溶液 ,高 、中 、低 3个浓
度的对照品加入量与所取供试品的含量之比分别为 0.5∶1、
1.0∶1.0、1.5∶1.0,分别测定 ,计算平均回收率和 RSD值。
2　结果与分析
2.1　方法学考察结果
2.1.1　测定波长确定。对照品和供试品溶液均在 326 nm
处有最大吸收 ,因此选择 326 nm为测定波长。
2.1.2　线性关系考察 。结果表明 ,蒙花苷在 0.010 ～ 0.080
责任编辑　刘群燕　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(36):20638-20639
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.36.159
μg/ml范围内 ,与峰面积呈良好的线性关系 ,回归方程为 Y=
2 067.657 0X+1.578 1, r=0.999 7。蒙花苷对照品及供试品
溶液 HPLC色谱图如图 1所示。
2.1.3　精密度。计算得蒙花苷对照品峰面积(RSD)值为
1.52%(n=5),表明仪器精密度良好 。
2.1.4　稳定性。计算得对照品溶液中蒙花苷色谱峰峰面积
图 1　蒙花苷对照品(a)和样品(b)HPLC图
Fig.1　HPLCchromatogramsofcomparativelinarin(a)andsample(b)
RSD值为 0.46%,供试品溶液中蒙花苷色谱峰峰面积 RSD
值为 2.4%(n=5),表明对照品溶液和供试品溶液在 12 h内
稳定。
2.1.5　回收率。结果表明 ,蒙花苷高 、中 、低 3个浓度平均
回收率为 98.20%, RSD值为 1.78%(n=5)。
1.2.5　样品测定。将样品按 “1.2.3”中方法制成供试品溶
液 ,用 “1.2.1”中色谱条件测定 ,经 RP-HPLC分析 ,计算蒙花
苷含量。
2.2　样品测定结果　将蒙花苷峰面积代入线性回归方程 ,
测得蜘蛛香中蒙花苷含量为 0.013 mg/g。
3　结论与讨论
采用超声提取法 ,分别考察了浓度为 40%、60%、80%、
95%的乙醇和甲醇为提取溶剂时蒙花苷含量的提取效率 ,发
现以 80%乙醇为提取溶剂时蒙花苷的提取效率较高 ,且提取
物中干扰峰较少 ,色谱分离效果较好 ,故采用 80%乙醇为提
取溶剂。
分别取 80%乙醇溶解的对照品液和样品液适量 ,用二极
管阵列检测器进行紫外吸收光谱扫描 ,发现在 254 nm和 326
nm处蒙花苷均有较强吸收 ,但在 326 nm处其他成分的干扰
较小 ,故选择 326 nm作为检测波长。
该试验建立的测定蜘蛛香中蒙花苷含量的 RP-HPLC
法 ,该法精密度良好 ,回收率良好 ,适合蒙花苷的测定。试验
中测得蜘蛛香中蒙花苷含量为 0.013 mg/g。
参考文献
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量[ J].畜牧与饲料科学 , 2009, 30(9):63-64.
(上接第 20637页)
2.4　化合物Ⅳ　黄白色无定形粉末 ,吸湿性强。 UVλMeOHmax
nm:254, 270;1H-NMR(500 MHz, CD3 OD)δ:7.43, (1H, brs,
H-3), 5.76(1H, ddd, H-8), 5.65(1H, d, H-1), 5.60(1H, m, H-
6), 5.25(1H, ddd, H-10b), 5.22(1H, ddd, H-10a), 5.11 (1H,
ddd, H-7b), 5.02(1H, dd, H-7a), 4.65(1H, d, H-1′), 4.37
(1H, d, H-1″), 3.87(1H, dd, H-6″b), 3.75(1H, dd, H-6′a),
3.65(1H, dd, H-6″a), 3.52(1H, ddd, H-5′), 3.37 ～ 3.25
(6H, m, H-9, H-3′, H-3″, H-4′, H-4″, H-5″), 3.21(1H, dd, H-
2″), 3.16(1H, dd, H-2′);13 C-NMR(CD3OD)δ:98.74 (C-1),
150.73 (C-3), 104.87(C-4), 127.01(C-5), 117.17(C-6),
70.90(C-7), 134.90(C-8), 46.61(C-9), 18.71(C-10),
166.35(C-11), 100.37(C-1′), 74.44(C-2′), 71.52(C-3′),
71.32(C-4′), 77.37(C-5′), 69.90(C-6′), 105.00(C-1″),
75.05(C-2″), 78.01(C-3″), 70.91(C-4″), 71.51(C-5″), 62.70
(C-6″)。上述数据与文献 [ 7]报道的 6′-O-β-D-葡萄糖基龙
胆苦苷一致 ,鉴定为 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷。
3　结论　
该研究应用多种色谱技术对秦艽根的化学成分进行分
离纯化 ,并通过理化方法和波谱数据进行结构鉴定。结果从
水溶部位分离并鉴定了 4种化合物 ,分别为龙胆苦苷 、獐牙
菜苷 、獐牙菜苦苷和 6′-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷 ,这 4种化
合物均为首次从宁夏产栽培秦艽中分离得到 。
参考文献
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2063938卷 36期　　　　　　　　　　　　　　　　赵 丽等　RP-HPLC法测定蜘蛛香中蒙花苷的含量