全 文 ：续表 1　
编号 保留时间t/min 分子式 分子量 化合物 相对含量(%) 编号 保留时间t/min 分子式 分子量 化合物 相对含量(%)
9 4.850 C 6H 14O 102 1-正己醇 17.11 27 20.988 C20H 40O 296 植醇 1.42
10 4.926 C 6H 14O 102 3-甲基-1-戊醇 4.39 28 21.743 C20H 40O 296 异植醇 0.51
11 5.158 C 7H 14O 114 正庚醛 0.87 29 21.871 C15H 22 202 1 , 1-二甲基-5-叔丁基-1 , 2-二氢茚 0.48
12 5.973 C 6H 14O 102 2-甲基-1-戊醇 0.71 30 22.051 未鉴定 　 　 0.36
13 7.185 C 8H 18O 130 2 , 2-二甲基-1-己醇 3.36 31 22.311 C19H 40 268 2-甲基-十八烷 0.42
14 7.478 C 8H 18O 130 3-辛醇 0.59 32 22.652 C20H 42 282 2-甲基-十九烷 0.61
15 9.313 C 9H 18O 142 壬醛 1.27 33 23.259 C20H 42 282 10-甲基-十九烷 0.66
16 9.396 未鉴定 　 　 0.28 34 23.381 未鉴定 1.39
17 9.523 未鉴定 　 　 0.29 35 23.640 C22H 44 308 1-二十二烯 0.29
18 10.359 C 9H 18O 142 (E)3-壬烯-1-醇 0.99
　　从半边旗挥发油中分离得到 35 个色谱峰 , 鉴定出其中 30 个
化合物 ,占挥发油总量的 97.35%, 其主要成分为:3-甲氧基-1 , 2-
丙二醇(25.94%), 3-己烯-1-醇(20.14%), 1-正己醇(17.11%), 4-
羟基-2-丁酮(5.13%), 3-甲基-1-戊醇(4.39%)。醇类化合物(15
个)占挥发油总量的 82.68%, 其中烯醇(8 个)占挥发油总量的
25.45%;酮类化合物(2 个)为 5.53%;醛类化合物(3 个)为
3.34%;烷烃(4 个)为 2.04%;其他化合物占 3.76%。这些实验
数据为进一步开发利用半边旗的药用资源提供科学依据。
参考文献:
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究[ J] .中药材 , 1996 , 19(1):29-32.
收稿日期:2004-12-20;　修订日期:2005-01-25
基金项目:吉林省中医药管理局基金项目(No.2004-111)
作者简介:张学武(1973-),男(汉族),吉林大安人 , 现任延边大学医学院
讲师 ,博士学位 ,主要从事中草药开发与肝脏生物化学研究工作.
珍珠梅提取物的体内抑瘤作用及其机理研究
张学武 , 金元哲 , 孟繁平
(延边大学医学院 ,吉林 延吉　133000)
摘要:目的:探讨珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠体内的肿瘤抑制作用及机理。方法:按照标准方法给 36 只小鼠
接种 S180肉瘤后 ,给予珍珠梅提取物 10 d , 观察瘤重及体重 ,免疫组织化学方法检测肿瘤组织中的 bcl-2 和 p53 蛋白 ,比色
分析法检测血清 SOD , GSH-Px 的活性及 M DA 含量的变化。结果:给予珍珠梅醋酸乙酯提取物的小鼠瘤重明显小于对
照组 ,实验组与对照组体重变化无显著性差异;对照组的 bcl-2 和 p53 蛋白的表达率明显高于实验组 , 实验组的 SOD ,
GSH-Px 活性高于对照组 ,而 MDA 含量低于对照组。结论:珍珠梅醋酸乙酯提取物对小鼠 S180肿瘤有抑制作用 ,并有可
能影响 bcl-2 和 P53的表达及清除体内自由基。
关键词:珍珠梅;　S180肉瘤;　bcl-2 蛋白;　p53 蛋白;　自由基
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2005)08-0698-02
Study on the Anti-tumor Effect in vivo of Sorbaria sorbi f olia Extract and Its Mechanism
ZHANG Xue-wu , JIN Yuan-zhe , MENG Fan-ping
(College of Medicine , Y anbian Universi ty ,Yanj i , J i lin ,133000 , China)
Abstract:Objective:To study the anti-tumor effects of Sorbaria sorbi f olia ethy l ace ta te ex tract and its mechanism.Meth-
ods:Thir ty six mice were inoculated with the sar cocarcinoma 180 acco rding to the standard method , after 10 days , w eighed
the tumo r and body.The expressions of bcl-2 and p53 pro teins in the tissue we re studied by immunohistochemistry;and
the activities o f SOD , GSH-Px and the content of MDA w ere detected by co lo rime tric me thod in serum.Results:The tumo r
of the test g roups we re lighter than tha t o f contro l g roup , and there w as no remarkable difference betw een the control and
test g roups in body w eight.The expression fr equency o f bcl-2 and p53 pro teins differed significantly among gr oups.S or-
baria sorbi f olia ex trac t increased the SOD , GSH-Px and dec reased MDA level in se rum.Conclusion:Sorbaria sorbi folia
e thy l acetate ex tract can re sist the mouse tumo r.I t might influence the expression of the blc-2 and p53 , and clear the free
radical.
Key words:Sorbaria sorbi f olia ;　Sarcoca rcinoma 180;　bcl-2 pro teins;　p53 proteins;　F ree r adical
　　珍珠梅 Sorbaria sorbi f olia 属蔷薇科植物 , 又称“山高粱”
“八木条” ,广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁夏及东北 ,
有活血化瘀 、消肿止痛 、治骨折及跌打损伤的作用 , 其主要成分为
黄酮类化合物[1] 。 1980 年代初期国内学者研究发现珍珠梅水提
物有抗缺氧作用[ 2] ,我们曾研究过珍珠梅醋酸乙酯提取物对亚硝
酸钠和四氯化碳对急性肝损伤具有保护作用[ 3] 。本次实验研究
珍珠梅对小鼠 S180肉瘤的抑瘤率 , 以及免疫组织化学方法检测肿
瘤组织中的 bcl-2 和 p53 蛋白;比色分析法检测血清 SOD ,
MDA 及 GSH -Px 含量的变化 , 旨在阐明珍珠梅的抑瘤作用及
可能机理。
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时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 8期 LISH IZHEN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL.16 NO.8　
1　材料与方法
1.1　珍珠梅生物活性成分的制备 茎 、叶 、花 ,采集于吉林省延吉
市市郊。醋酸乙酯提取物:醋酸乙酯分 3 次浸泡珍珠梅 , 温度为
40℃, 12 h/次 , 合并 3 次滤液 ,用旋转蒸发器减压浓缩 , 获珍珠梅
醋酸乙酯提取物浸膏(1 g 珍珠梅有效成分相当于 33.3 g 生药)。
1.2　动物 昆明种小鼠 ,体重为 18～ 22 g ,雄性 , 由延边大学医学
院动物科提供。
1.3　S180细胞株 由吉林大学预防医学研究所提供。
1.4　试剂 P53 , bcl-2 及 S-P 试剂盒均为福建迈新生物技术
开发公司产品;SOD , GSH-Px 及 M DA 试剂盒为南京建成生物
工程研究所产品 ,其他试剂均为国产分析纯。
1.5　方法
1.5.1　体内抑瘤实验 取 36 只小鼠 , 随机分成 3 组:实验 Ⅰ组 ,
实验Ⅱ组 ,对照组。每组 12 只在无菌条件下 , 取传代第 9 d 的
S180肉瘤小鼠腹水 ,用生理盐水以 1∶3 比例稀释 , 给每只小鼠右
腋窝部皮下注射 0.2 ml ,相当于 2×105 瘤细胞/只小鼠。对照组
每天灌胃生理盐水 , 剂量为 10 ml/ kg , 实验Ⅰ , Ⅱ组每天灌胃珍
珠梅提取物分别为 16.7 , 8.4 g/ kg , 连续给予受试物 10 d。实验
期间让动物自由进食和饮水。
1.5.2　观察指标 在动物荷瘤第 11 天 ,将小鼠称重 ,眼球取血并
分离血清 ,进行生化指标的测定。立即取出肝脏全部标本均用中
性福尔马林固定 ,石蜡包埋 , 5μm 连续切片。用免疫组织化学染
色方法 ,按 S-P 试剂盒说明书检测 P53 及 blc-2 蛋白。处死后
的小鼠剥离瘤体称重。根据动物荷瘤第 1 天与第 11 天体重之差
计算各组动物平均体重变化幅度。肿瘤生长抑制率采用下列公
式计算。
抑制率=对照组平均体重-实验组平均体重对照组平均体重 ×100%
1.5.3　免疫组织化学结果判定 bcl-2 阳性者为细胞膜或细胞
浆有棕黄色颗粒;p53 阳性者为细胞核有棕黄色颗粒。 P53 和 bcl
-2蛋白表达强度 , 根据阳性物质着色深浅及阳性细胞数的多少
分为 4 级:无阳性细胞或阳性细胞少于 10%或背景同空白对照
者为(-);每张切片少于 25%的细胞明显呈阳性为弱阳性(+);
25%细胞明显呈阳性为阳性(++);多于 50%细胞呈阳性为强
阳性(+++)。
1.6　统计学处理 数据以 x±s表示 , 应用 S PSS 10.0 统计软件
进行方差分析 、秩和检验 , 两两比较用 q 检验。
2　结果
2.1　S180荷瘤小鼠的抑制作用 结果见表 1～ 2。
表 1　珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠的抑制作用( x±s)
分组　 n 瘤重 m/ g 抑制率(%)
　实验Ⅰ 11 　　1.49±0.92＊ 46
　实验Ⅱ 11 0.93±0.31＊＊ 57
　对照 12 2.75±1.27
　　与对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P <0.01
从表 1 中可以看出 ,实验 Ⅰ组 , 实验Ⅱ组的小鼠瘤重明显低
于对照组 ,其抑瘤率分别达 46%, 57%, 而实验组间无显著性差
异。
如表 2 所示:至动物荷瘤第 11 天 ,各组荷瘤小鼠体重增重变
化无显著性差异(P>0.05)。
表 2　珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠的体重变化
分组 n 实验前体重 m/ g 实验后体重 m/ g 体重变化 m/ g
实验Ⅰ 11 22.1±0.5 29.4±2.8 5.1±2.3
实验Ⅱ 11 22.8±0.8 27.8±3.4 4.3±1.9
对照 12 22.6±0.6 28.3±1.1 4.6±1.2
2.2　珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠 p53 , bcl-2表达的
影响 见表 3。与对照组比较 ,实验组 p53 , bcl-2 表达明显低于
对照组(P<0.05)。
2.3　SOD , GSH-Px 及 MDA 在各组动物血清中的变化 实验
Ⅰ组 , Ⅱ 组血清 SOD、GSH -Px 的活性均高于对照组(P <
0.05), 而 MDA 的量明显低于对照组(P<0.05)。见表 4。
表 3　珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠的 P53 , b cl-2表达的影响
分组　　 n P53蛋白表达- + ++ +++
bcl-2蛋白表达
- + ++ +++
实验Ⅰ ＊ 11 5 3 2 1 8 2 1 0
实验Ⅱ ＊ 11 4 2 4 1 6 2 2 1
对照 12 1 1 7 3 1 2 8 1
　　与对照组比较 , ＊P<0.05
3　讨论
本实验观察不同浓度的珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180肉瘤
的抑制作用 ,大 、小剂量组间的抑制作用均超过 45%, 表明珍珠
梅在动物体内有较强的抑瘤作用。
bcl-2和 P53是近年来研究肿瘤细胞凋亡的基因[ 4] 。 bcl-
2基因能使细胞长期存活 , 抑制细胞凋亡 , 产生恶性细胞克隆。
野生型 p53 能监控细胞内 DNA 的状态 ,防止突变或受损的 DNA
复制与转录 ,促进受到改变的细胞凋亡 , 保证细胞按细胞周期生
长 ,其可能机理可能有两条途径:一条是激活促进凋亡的 bcl-2
家族的凋亡促进因子 bad;另一条是通过缉获依赖细胞周期蛋白
激酶(CDK s)的抑制物来实现 , CDK s 是细胞维持正常周期所必
需的。野生型 p53 基因在抑制恶性增殖过程中起着重要的作用 ,
其编码蛋白可促进药物诱导的肿瘤细胞凋亡。它在恶性肿瘤中
多产生突变 ,形成突变型 p53蛋白 ,从而失去对恶性肿瘤的控制 ,
突变型 p53 蛋白可以通过免疫组织化学方法检出。本实验结果
显示 ,实验组 bcl-2 和 p53 的阳性表达率均低于对照组(P <
0.05), 说明珍珠梅提取物可能起到下调抑癌基因表达的作用 , 从
而使肿瘤缩小 ,这可能是珍珠梅抑瘤作用的机理之一。
表 4　珍珠梅醋酸乙酯提取物对 S180荷瘤小鼠血清 SOD、GSH -Px 及M DA 的影响( x ±s)
分组 n SOD
C/ U· L-1
GSH-Px
C/U · L-1
MDA
C/ nmol· L-1
实验Ⅰ 11 　93.6±26.3＊ 　16.8±4.3＊ 　1.35±0.23＊
实验Ⅱ 11 96.8±31.6＊ 21.3±5.9＊ 1.36±0.69＊
对照 12 76.5±25.9 11.6±5.3 1.98±0.36
　　与对照组比较 , ＊P<0.05
现已证明 ,在癌变的诱发和促发阶段均有自由基参与。各种
诱癌因素和促癌因素通过各自的转化途径 , 终使自由基水平增
加 ,从而参与癌变过程。 SOD、GSH-Px 是属于体内消除自由基
和脂质过氧化物的酶类 ,与体内其他酶类及抗氧化剂组成一个自
由基的防御系统 , 以清除过多的自由基 , MDA 是自由基代谢的
产物。本实验中对照组 SOD、GSH -Px 活性均显著低于实验
组 ,而 M DA 含量显著高于实验组。说明珍珠梅可以通过清除自
由基抑制肿瘤的生长 ,这可能是珍珠梅抑制肿瘤生长的另一个重
要机理。
参考文献:
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LISHIZH EN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEARCH 2005 VOL.16 NO.8 时珍国医国药 2005 年第 16 卷第 8 期