全 文 ：中国肿瘤生物治疗杂志 http:/ /www． biother． org
Chin J Cancer Biother，Jun． 2014，Vol． 21，No． 3
doi:10． 3872 / j． issn． 1007-385X． 2014． 03． 008 ·基础研究·
木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤 B16 细胞的分化及其机制
赵连梅1，耿艺曼1，孙士萍1，任风芝2，韩丽娜1，单保恩1(1． 河北医科大学第四医院 肿瘤研究所 ＆ 科研中心，河北
石家庄 050011;2． 华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北 石家庄 050018)
［基金项目］ 河北省卫生厅医学科学研究重点课题项目基金资助(No． 20120120)。Project supported by the Medical Science Ｒesearch Project of
Hebei Province (No． 20120120)
［作者简介］ 赵连梅(1981 －) ，女，内蒙古敖汉旗人，博士生，助理研究员，主要从事抗肿瘤中药的筛选及机制的研究工作。E-mail:lianmeizh-
mail@ 163． com
［通信作者］ 单保恩(Shan Baoen，corresponding author) ，E-mail:shanbaoen@ 163． com
［优先出版］ http:/ /www． cnki． net /kcms /doi /10． 3872 / j． issn． 1007-385X． 2014． 03． 008． html
［摘 要］ 目的:探讨从中药木鳖子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxylcinnamaldehyde，PHD)对小鼠黑素瘤 B16
细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法:以 10、20、40 μmol /L PHD作用 B16 细胞，设空白对照及福司克林(Forskelin)
阳性对照组。磺酰罗丹明(suphrhodamineB，SＲB)法检测 PHD对 B16 细胞生长的抑制率，平板克隆集落形成实验检测细胞的
克隆形成能力，Giemsa 染色观察细胞形态，比色法检测细胞中黑色素含量和酪氨酸酶(tyrosinase，Tyr)活性，划痕愈合实验检
测细胞的迁移能力，Western blotting检测 Tyr、酪氨酸酶相关蛋白 1(tyrosinase protein，Trp1)及 MAPK信号转导通路中 p-P38、p-
JNK和 p-EＲK1 /2 的表达。结果:PHD对黑素瘤 B16 细胞具有明显的增殖抑制作用，10、20、40 μmol /L PHD作用 B16 细胞 48
h后，其增殖抑制率与对照组相比明显增加［(12． 78 ± 0． 87)%、(37． 70 ± 2． 28)%、(42． 17 ± 4． 18)% vs 0，P ＜ 0． 05］，20、40
μmol /L PHD组增殖抑制率与 Forskelin 组相比明显增加［(37． 70 ± 2． 28)%、(42． 17 ± 4． 18)% vs(22． 00 ± 1． 13)%，P ＜
0. 05］。40 μmol /L PHD处理 B16 细胞 24、48、72 h后，B16 细胞呈典型分化形态，黑色素含量及 Tyr活性与对照组相比均明显
增加［(0. 097 ± 0. 02)、(0． 13 ± 0． 04)、(0． 15 ± 0． 05)vs(0． 085 ± 0． 003) ; (1． 11 ± 0． 31)、(1． 43 ± 0． 05)、(1． 67 ± 0． 49)vs
(0． 64 ± 0. 10) ，P ＜ 0. 05］;细胞集落形成能力和迁移能力都明显降低(均 P ＜ 0． 05)。与空白对照组相比，PHD处理组细胞 Tyr
和 Trp1 的表达明显增加(P ＜ 0． 05) ，MAPK信号通路中 p-P38 和 p-JNK的表达水平也明显增加(P ＜ 0． 05) ，而 p-EＲK 活性差
异则无统计学意义(P ＞ 0． 05)。结论:PHD通过上调 MAPK信号通路中 p-P38 和 p-JNK的活性而对小鼠黑素瘤 B16 细胞产
生明显的增殖抑制，并在形态和功能上诱导黑素瘤细胞的分化。
［关键词］ 对羟基桂皮醛;木鳖子;黑素瘤;B16 细胞;分化;MAKPS通路
［中图分类号］ Ｒ739． 5;Ｒ730． 54 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1007-385X(2014)03-0282-06
Effect and mechanisms of p-hydroxylcinnamaldehyde from cochinchina mo-
mordica seed on differentiation of mouse melanoma B16 cells in vitro
Zhao Lianmei1，Geng Yiman1，Sun Shiping1，Ｒen Fengzhi2，Han Lina，Shan Baoen1(1． Cancer Ｒesearch Institute ＆ Ｒe-
search Center，the Fourth Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050011，Hebei，China;2． New Drug Ｒe-
search and Development Co． Ltd of China Pharmaceutical Corporation，Shijiazhuang 050015，Hebei，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the effect and underlying mechanisms of p-hydroxylcinnamaldehyde (PHD)isola-
ted from the cochinchina momordica seed on the differentiation，proliferation and metastasis of mouse melanoma B16 cells
in vitro． Methods:B16 cells were treated with PHD． At the designated time points after treatment，proliferation inhibition
was assessed by the Suphrhodamine B assay，colony formation by plate colony assay，morphological changes by Giemsa
staining，melanin content and tyrosinase activity by colorimetric analysis，metastasis by wound healing assays，and protein
levels of Tyr，Trp1，t-proteins，p-p38，p-JNK and p-EＲK1 /2 by Western blotting． Ｒesults:PHD inhibited B16 cell pro-
liferation in a dose-dependent manner (P ＜ 0． 05)． The inhibition rate at 20 μmol /L (37． 70 ± 2． 28%) ，40 μmol /L
(42． 17 ± 4． 18%)was even higher as compared with forskelin treatment (22． 00 ± 1． 13%，P ＜ 0． 05)． B16 cells treated
·282·
赵连梅，等． 木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤 B16 细胞的分化及其机制
with PHD at 40 μmol /L for 24，48，72 h showed a dendrite-like morphology，indicative of differentiation． PHD (10 to 40
μmol /L)significantly increased melanin amount at 24 h (0． 097 ± 0． 02) ，48 h (0． 13 ± 0． 04) ，and 48 h (0． 15 ±
0. 05)as compared with non-treatment control (0． 085 ± 0． 003，P ＜ 0． 05)and tryosinase activity at 12 h (1． 11 ±
0. 31) ，24 h (1． 43 ± 0． 05) ，and 48 h (1． 67 ± 0． 49)as compared with control (0． 64 ± 0． 10，P ＜ 0． 05)． PHD treat-
ment effectively attenuated metastasis (P ＜ 0． 05)and remarkably reduced colony-forming capacity (P ＜ 0． 05)in B16
cells． Moreover，PHD significantly increased the protein content of Tyr，Trp1 and enhanced phosphorylation of P38 and
but not EＲK． Conclusion:P-hydroxylcinnamaldehyde may inhibit melanoma growth and metastasis，possibly through acti-
vating P38 and JNK signaling pathways．
［Key words］ p-hydroxylcinnamaldehyde (PHD) ;cochinchina momordica seed;melanoma;B16 cell;differentiation;
MAPKS pathway
［Chin J Cancer Biother，2014，21(3) :282-287］
恶性黑素瘤是常见的皮肤恶性肿瘤，恶性程度
高且广泛耐药，转移早，进展快，病死率高［1］。目前
临床上某些抗黑素瘤疗法疗效差、毒性作用大，因
此，急需寻找新的治疗方法。诱导分化是指恶性肿
瘤细胞在体内外分化诱导剂作用下，向正常或接近
正常细胞方向分化逆转的现象，作为恶性肿瘤的一
种新型治疗方法，为抗肿瘤研究开辟了一条崭新的
途径［2-3］。从天然药物中寻找肿瘤细胞的诱导分化
剂是当前的研究热点之一。木鳖子为葫芦科植物的
干燥成熟种子，最早见于北宋《开宝本草》(公元 973
年) ，具有消肿散结、祛毒、治痈肿、疔疮和无名肿毒
等功效，历代本草、方书多有记载。本课题组前期研
究［4-6］发现，木鳖子醇提物具有抑制黑素瘤 B16 细
胞增殖和诱导其分化的作用。本研究旨在探讨木鳖
子中提取的单体化合物对羟基桂皮醛(p-hydroxyl-
cinnamaldehyde，PHD)对 B16 细胞的分化、增殖及迁
移的影响及其可能的作用机制。
1 材料与方法
1． 1 主要试剂
中药木鳖子购自北京同仁堂药店，经河北医
科大学药学院生药学教研室鉴定为正品。PHD
由河北省石家庄市华北制药集团新药研究开发
有限责任公司提取并鉴定。磺酰罗丹明 B(sul-
forhodamine B，SＲB)试剂盒购自美国 Sigma 公
司，瑞-吉(Wrigh-Giemsa)染液购自 Baso 公司，胎
牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司，
ＲPMI 1640、胰蛋白酶均购自美国 Gibco 公司，
p44 /42MAPK (EＲK1 /2 )、p-p44 /42 EＲK1 /2
(Thr202 /Tyr204 )、 p-p38 MAPK (Thr180 /
Tyr182)和 p-SAPK /JNK(Thr183 /Tyr185)抗体均
购自美国 CST 公司，p38、JNK、tyr、Trp1 和 GAP-
DH 抗体均购自美国 Santa Cruz公司。
1． 2 细胞培养
小鼠黑素瘤 B16 细胞株购自中科院上海细胞
库，以含 100 ml /L 胎牛血清的 ＲPMI1640 培养液
(含青霉素 100 U /ml，链霉素 100 μg /ml)于 37 ℃、
5% CO2 培养箱中培养，以 0． 25%胰蛋白酶消化细
胞传代，取对数生长期细胞用于实验。
1． 3 SＲB法检测 PHD对 B16 细胞增殖的影响
取对数生长期 B16 细胞，调整细胞密度至 1 ×
105 /ml，加入 96 孔培养板中，每孔 90 μl，待细胞贴
壁良好后，加入不同浓度 PHD 10 μl(终浓度为 10、
20 、40 μmol /L) ，以不加药组为对照组，继续培养 48
h，弃上清，固定 1 h，蒸馏水冲洗 4 ～ 5 次，4 mg /ml
SＲB染液 100 μl染色 15 min，弃染液，1%乙酸轻洗
4 ～ 5 次，于 490 nm处测光密度值(D值)。
1． 4 显微镜观察 PHD 对 B16 细胞形态的影响
取对数生长期的 B16 细胞，调整细胞浓度为
1 × 105 /ml，加入 6 孔培养板中(孔内预先放置灭菌
盖玻片) ，每孔 2 ml，待细胞在盖玻片上贴壁良好
后，加入 40 μmol /L PHD，继续培养 48 h，取出玻璃
片，生理盐水冲洗 3 次，晾干，滴加瑞氏染料染色 1
min，加入 3 倍体积的蒸馏水，吹匀后静置 15 min，用
清水冲洗干净，普通光学显微镜下观察结果。
1． 5 克隆形成实验检测 PHD对 B16 细胞克隆形成
能力的影响
取对数生长期 B16 细胞，实验组加入 PHD至终
浓度为 40 μmol /L，对照组加入同体积培养基，常规
培养 48 h，胰酶消化，收集、重悬细胞，每组加入细胞
2 000 个，混匀，放置培养箱继续培养至 12 ～ 14 d，
瑞-姬染色法染色，肉眼观察可见细胞集落。
1． 6 划痕试验检测 PHD对 B16细胞迁移能力的影响
对照组加入完全培养基，实验组加入终浓度为
40 μmol /L 的 PHD，常规培养 48 h，胰酶消化，收集
细胞，每组细胞调整细胞密度为 5 × 105 /ml，加入 6
·382·
中国肿瘤生物治疗杂志，2014 年 6 月，21(3)
孔培养板中，每孔 2 ml，待培养 24 h后划痕，弃培养
液，PBS冲洗 2 次，加入无血清培养基 2 ml，常规培
养，每隔 6、12 和 24 h 观察照相。细胞迁移能力依
据细胞对划痕的愈合能力而定。
1． 7 B16 细胞黑色素的测定
对数生长期 B16 细胞制成单细胞悬液，以每孔
1 × 105 细胞 /ml 接种 1． 8 ml 于 6 孔培养板，待贴壁
良好后，加入不同浓度 PHD(终浓度为 10、20、40
μmol /L)或者阳性对照药福司克林，以不加药组作
为培养基对照组。将细胞培养 48 h，消化、收集细
胞，调整细胞密度为 5 × 105 /ml，设 3 个平行管，每平
行管 1 ml ，1 000 × g 离心 5 min，倾去上清液，细胞
团溶于 1 mol /L NaOH(含 10% DMSO)200 μl，80 ℃
水浴保温 2 h后转移至 96 孔培养板内，475 nm处检
测光 D值，取 3 个平行样的均数作为结果［6］。
1． 8 B16细胞酪氨酸酶(Tyrosinase，Tyr)活性的测定
生长期 B16 细胞制成单细胞悬液，待细胞贴壁
良好后，加入不同浓度 PHD(终浓度为 10、20、40
μmol /L)或者阳性对照药福司克林，以不加药组作
为培养基对照组，常规培养 48 h，消化、收集细胞，调
整细胞密度至 5 × 105 /ml，设 3 个平行管，每管 1 ml，
1 000 × g离心 5 min，弃上清，细胞溶于 0． 5%脱氧
胆酸钠 100 μl，并充分振荡使细胞溶解，0 ℃放置 15
min，取出测试管，37 ℃水浴保温 10 min 后加入 1%
左旋多巴(L-levodopa，L-DOPA)孵育 2 h，再转移至
96 孔培养板内，于 475 nm处测 D值 ［6］。
1． 9 Western blotting检测 PHD对 Tyr、Trp1 和信号
通路蛋白表达的影响
取对数生长期 B16细胞，加入终浓度为40 μmol /
L 的 PHD，对照组加入等量培养液，置于 37 ℃培养箱
中培养不同时间后，分别提取各组细胞总蛋白，并测
定各组蛋白浓度。蛋白样品各取 40 μg，经 SDS-
PAGE分离，转膜，封闭 2 h 后加入相应抗体，4 ℃孵
育过夜，TBST 洗膜 3 次，每次 10 min，加入二抗(1∶
20 000)室温孵育2 h，TBST洗膜3次，每次10 min，用
凝胶图像分析软件分析灰度值。以目的蛋白条带与
GAPDH条带灰度值比值表示各目的蛋白表达水平。
1． 10 统计学处理
采用 SPSS13． 0 统计软件，计量资料以 珋x ± s 表
示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采
用 LSD检验，以 P ＜ 0． 05 为差异有统计学意义。
2 结 果
2． 1 PHD是 5 种木鳖子单体化合物中对 B16 细胞
增殖抑制最强的一种
利用高相液相色谱并利用核磁共振技术提取并
鉴定了从木鳖子醇提物中分离的含量较高的五种单
体化合物:p-hydroxylcinnamaldehyde(PHD) ，conife-
rylaldehyde (CFD) ，p-hydroxylbenzaldehyde(PHA) ，
3-o-Methoxyaniline- p-hydroxylbenzaldehyde (MPH)
and ligballinol (LBL)。它们对小鼠黑素瘤 B16 细胞
均具有一定的抑制作用，但是第一种化合物 PHD对
B16 细胞的抑制作用最强(图 1)。
10、20、40 μmol /L PHD 作用于 B16 细胞 48 h
后，与对照组相比，细胞增殖抑制率均明显升高
［(12． 78 ± 0． 87)%、(37． 70 ± 2． 28)%、(42． 17 ±
4. 18)vs 0，P ＜ 0． 05］，其中 20、40 μmol /L PHD 对
细胞的增殖抑制率明显高于 Forskelin 阳性对照组
［(37． 70 ± 2． 28)%、(42． 17 ± 4． 18)% vs (22． 00 ±
1． 13)%，P ＜ 0． 05) ］(图 2)。
图 1 木鳖子的五种单体化合物对 B16 细胞增殖的抑制作用
Fig． 1 Inhibiting effect of five kinds of monomeric
compounds isolated from the cochinchina
momordica seed on the prolieration of B16 cells
A:PHD;B:CFD;C:PHA;D:MPH;E:LBL
* P ＜ 0． 05 vs B，C，D，E
图 2 PHD对 B16 细胞增殖的影响
Fig． 2 Effect of PHD on proliferation of B16 cells
* P ＜ 0． 05 vs Forskelin
2． 2 PHD对 B16 细胞形态的影响
40 μmol /L PHD 处理 B16 细胞 24 、48 和 72 h
·482·
赵连梅，等． 木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤 B16 细胞的分化及其机制
后，细胞体积增大为梭形，排列有序，成纤维状生长，
多数细胞出现树突状结构，为典型的细胞分化形态
(图 3) ，证明 PHD可能诱导了黑素瘤 B16 细胞的分
化，与前期木鳖子粗提物的研究结果一致。
2． 3 不同浓度 PHD对 B16 细胞黑色素的产生以及
Tyr活性的影响
20、40 μmol /L PHD 处理 B16 细胞 48 h 后，与
对照组相比，黑色素明显增加［(0． 13 ± 0． 04)、
(0. 15 ± 0． 05)vs (0． 085 ± 0． 003) ，P ＜ 0． 05］。10、
20、40 μmol /L PHD 处理组 B16 细胞 Tyr活性，与对
照组 相比，差异均有统计学意义［(1． 11 ± 0． 31)、
(1． 43 ± 0． 05)、(1． 67 ± 0． 49)vs (0． 64 ± 0． 10) ，均
P ＜ 0． 05］。结果证实，PHD作用可以使 B16 细胞生
成黑色素明显增加，也使合成黑色素的关键酶 Tyr
活性明显加强，说明 PHD诱导黑素瘤细胞向黑色素
细胞方向分化(图 4)。
2． 4 PHD降低 B16 细胞增殖能力和克隆集落形成
能力
40 μmol /L PHD处理 B16 细胞后，细胞的克隆
形成数量与对照组相比，差异无统计学意义(P ＞
0. 05) ，但其克隆集落的大小明显低于对照组(图
5) ，提示 PHD能够诱导 B16 细胞的分化。
2． 5 PHD抑制 B16 细胞的迁移能力
划痕实验进一步检测结果(图 6)显示，40
μmol /L PHD作用于 B16 细胞 12、24 h后，其迁移能
力发生改变，在划痕后 12 h，PHD 组划痕宽度与对
照组相比明显增加［(1． 78 ± 0． 13)vs (1． 16 ± 0． 26)
mm，P ＜ 0． 05］;在划痕后 24 h，PHD 组划痕宽度也
明显增加［(1． 48 ± 0． 24)vs (0． 87 ± 0． 12)mm，P ＜
0． 05］，结果提示，PHD对 B16 细胞的迁移能力具有
抑制作用。
图 3 40 μmol /L PHD处理后不同时间点 B16 细胞形态的改变(×200)
Fig． 3 Morphological changes of B16 cells treated with 40 μmol /L PHD at different time points(×200)
图 4 PHD对 B16 细胞黑色素生成和 Tyr活性的影响
Fig． 4 Effects of PHD on melanin production and activity of tyrosinase in B16 cells
* P ＜ 0． 05 vs Ctrl group
2． 6 PHD对 B16 细胞中 Tyr、Trp1 蛋白水平的影响
40 μmol /L PHD作用 B16 细胞 24、48、72 h 后，
Tyr蛋白含量均明显升高［(0． 51 ± 0． 32)、(0． 65 ±
0． 41)、(0． 93 ± 0． 21)vs(0． 32 ± 0． 05) ，P ＜ 0． 05］。
Tyr相关蛋白 Trp1 的含量也明显升高［(2． 54 ±
0. 22)、(2． 80 ± 0． 29)、(0． 43 ± 0． 51)vs(0． 21 ±
0. 05) ，P ＜ 0． 05］，表明 PHD 通过提高 Tyr 和 Trp1
蛋白的水平促进了黑色素的产生(图 7)。
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中国肿瘤生物治疗杂志，2014 年 6 月，21(3)
2． 7 PHD 对 B16 细胞 p-P38、p-JNK 和 p-EＲK1 /2
蛋白水平的影响
经 PHD(40 μmol /L)处理 30、60、120 min 后，
B16 细胞中 p-P38 蛋白水平与对照组相比明显升高
［(0． 59 ± 0． 07)、(0． 68 ± 0． 11)、(0． 94 ± 0． 13)vs
(0． 43 ± 0． 03) ，P ＜ 0． 05) ;经 PHD(40 μmol /L)处
理 60、120 min后，B16 细胞中 p-JNK 蛋白水平与对
照组相比也明显升高［(0． 93 ± 0． 03)、(1． 08 ±
0. 13)vs (0． 66 ± 0． 07) ，P ＜ 0． 05］，而 p-EＲK、
t-EＲK、t-JNK和 t-p38 蛋白水平则无明显改变
(图 8) ，表明 MAPKs信号通路中的 p38 通路和 JNK
通路可能参与了 PHD诱导的 B16 细胞分化过程。
图 5 PHD对 B16 细胞克隆形成能力的影响
Fig． 5 Effect of PHD on colony formation ability of B16 cells
图 6 40 μmol /L PHD对 B16 细胞划痕愈合的影响(×200)
Fig． 6 Effect of 40 μmol /L PHD on ability of wound
healing in B16 cells (×200)
图 7 PHD对 B16 细胞中 Tyr和 Trp1 蛋白水平的影响
Fig． 7 Effects of PHD on level of Tyr and
Trp1 proteins in B16 cells
图 8 PHD 对 MAPKs信号通路蛋白水平的影响
Fig． 8 Effects of PHD on some proteins
level in MAPKs signal pathway
* P ＜ 0． 05 vs 0 min treatment group
3 讨 论
近年来，中药等天然药物抗肿瘤新药开发的品
种迅速增多，发挥的治疗作用也涉及到各个方面。
目前研究［8-10］显示，熊果酸、莲房花青素、八棱丝瓜
蛋白、羽扇豆烷、染料木黄铜等天然药物能够诱导小
鼠黑素瘤 B16 细胞的分化，本课题组前期研究结
果［5］显示，木鳖子醇提物能够显著抑制 B16 细胞的
生长并能够诱导其分化。木鳖子醇提物经高效液相
色谱结合核磁共振技术分离得到 5 种单体化合物，
其中的 PHD 对 B16 细胞的作用最强。本研究结果
进一步显示，PHD能明显抑制黑素瘤 B16 细胞的增
殖，并可诱导 B16 细胞出现分化形态，说明 PHD 可
作为潜在的抗肿瘤药物应用于临床，为治疗恶性黑
素瘤开辟新的治疗途径。不同浓度 PHD 分别作用
B16 细胞 24、48、72 h 后，其增殖明显受到抑制，且
随着药物浓度的增加和作用时间的延长，细胞分化
程度不断增大，提示 PHD可能是通过诱导细胞分化
而发挥抗肿瘤作用。黑色素含量增加是黑素瘤细胞
·682·
赵连梅，等． 木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛诱导小鼠黑素瘤 B16 细胞的分化及其机制
功能分化的标志之一［11］，而在黑色素细胞中，Try 控
制黑色素的合成，是黑色素合成通路中的关键酶。
本研究检测了 Try、Trp1 的表达，结果显示，
40 μmol /L PHD作用于细胞 48 h 后，细胞的黑色素
含量以及 Tyr 活性增高，且黑色素合成相关蛋白
Tyr、Trp1 的水平明显升高，因此进一步证实了 PHD
能够诱导黑素瘤细胞向正常黑素方向分化。此外，
细胞生长曲线、细胞集落克隆形成试验分别证实了
PHD对 B16 细胞的增殖和克隆形成能力的显著抑
制作用，提示 PHD不仅在形态和功能上诱导小鼠黑
素瘤 B16 细胞的分化，而且能够明显降低已经分化
细胞的恶性程度，诱导 B16 细胞分化为正常或接近
正常细胞。
MAPKs 为丝氨酸、苏氨酸蛋白激酶的一个家
族，调节细胞的凋亡、增殖及迁移等，在黑色素细胞
生物活性中具有重要作用［14］。MAPKs 超家族中 3
个特征性亚家族为 Erks、JNK和 p38 MAPKs，最近已
有报道［11，15-16］显示，p38-MAPKs 通路活化与黑色素
合成增加有关，p38-MAPKs 的级联反应也参与了由
MSH、UV、Lupeol诱导的 B16 的黑色素的合成。本
实验检测了不同浓度 PHD 作用 30、60、120 min 后，
B16 细胞 p-P38、p-JNK 以及 p-EＲK 的表达情况，
Western blottig 结果显示，药物作用后 p-P38 和 p-
JNK的表达水平缓慢升高，而 p-EＲK 的蛋白表达水
平则无明显变化，说明 PHD可能通过增强 p-P38 和
p-JNK的磷酸化水平而激活黑色素合成相关基因，
促进小鼠黑素瘤 B16 细胞的分化。
综上，PHD诱导小鼠黑素瘤 B16 细胞分化的作
用，并对其机制进行初步的探讨，为其临床治疗恶性
黑素瘤提供理论基础。
［参 考 文 献］
［1］ Prignano F，Coronnello M，Pimpinelli N，et al． Immunophenotyp-
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［收稿日期］ 2013 － 12 － 25 ［修回日期］ 2014 － 03 － 16
［本文编辑］ 周琳玲，韩丹
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