全 文 ：· 2592· China Pharmacy 2008 Vol.19 No.33 中国药房 2008年第 19卷第 33期
*讲师 , 硕士。研究方向:毛细管电泳法鉴定中西药成分。电话:
0538-6222706。E-mail:cuiyingjie 77@163.com
毛细管电泳法测定白花丹参不同部位水溶性有效成分
崔英杰 *,李玉琴 ,杨娜娜 ,李大伟 ,赵晓民 ,夏作理(泰山医学院 ,泰安市 271000)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)33-2592-03
摘 要 目的:建立以高效毛细管区带电泳法快速分离和测定白花丹参不同部位水溶性有效成分的新体系 。方法:采用未涂层石英
毛细管柱(75μm×50.2 cm , 有效长度为 40 cm),以 5 mmol ·L -1磷酸-硼砂缓冲液(pH 7.4)为介质 ,压力进样(0.5 psi)4 s , 20
kV 恒压分离 ,检测波长为 210 nm ,柱温为 25 ℃。结果:8 min内白花丹参样品中的原儿茶醛 、丹参素 、原儿茶酸完全基线分离;三
者的检测浓度均在 2.5 ～ 200.0 μg ·mL -1范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系;三者平均回收率分别为 100.04%、
99.99%、100.01%, R SD 分别为 1.75%、1.73%、1.74%。结论:本方法具有良好的精密度 、回收率及线性关系 ,可用于定量测定白
花丹参中 3种水溶性有效成分 。
关键词 毛细管电泳法;原儿茶醛;丹参素;原儿茶酸;白花丹参;含量测定
Determination of Water-soluble Active Principles in Different Parts of Salvia mil tiorrhiza by Capillary
Zone Electrophoresis
CU I Ying -jie , LI Yu-qin , YANG N a-na , LI Da-wei , ZHAO Xiao -min , XIA Zuo-li(Taishan M edical
Universi ty , Taian 271000 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish a high per formenc capilla ry zone elect rophoresis method fo r the dete rmination of the
w ater -soluble active ingredients in diffe rent parts o f the S alv ia mi ltiorrhiz a.M ETHODS :Capillary elect rophoresis w as
conducted using uncoated capillary column(75 μm×50.2 cm , effec tive leng th =40 cm)wit h 5 mmol · L -1 phosphate-borax
(ph7.4)as running buffe r by pressure injection(0.5 psi/4 s)and constant voltage separation(20 kV)wit h a de tection leng th of
210 nm and a co lumn temperature of 25 ℃.RESULTS:A complete baseline separation of PAH , DSS and PA w as achieved
within 8 min under the optimized conditions.The good linear range w as from 2.5μg ·mL -1 to 200.0μg ·mL -1 f or all the three
ingredients.The average recoveries o f t he 3 ing redients were 100.04%, 99.99%, and 100.01%, respective ly , with RSD at
1.75%, 1.73%,and 1.74%, respectively.CONCLUS ION :The method is satisfactory in precision , recovery and linearity , and it
can be used to de te rmine th ree w ate r-soluble active ingredients in diffe rent parts of the S alv ia milt iorrhiza.
KEY WORDS Capillary zone electrophoresis;Protocatechuic a ldehyde(PAH);Danshensu (DSS);Pro toca techuic acid (PA);
S alv ia mi ltiorrhiz a;Content de termina tion
nm波长范围内均有明显的紫外吸收 , 且 250 nm 波长附近的
吸收尤为强烈 , 故采用 HPLC-UV 法进行分析 。在同一条件
下 ,比较 280 、220 、254 、320 、400 nm 波长下检测到的 HPLC 图
谱时发现 , 在 280 nm 波长下图谱基线较平稳 , 且色谱峰较多 ,
峰形较好 ,故选定 280 nm 作为检测波长 。
在选择样品的提取方法时发现 ,超声提取法快速 、简便 ,且
其条件较甲醇加热回流温和 ,效果则无显著性差异 。试验证明 ,
浸泡 12 h 、超声 30 min后 ,样品有效成分已基本提取完全 。
本文选择了种植于康定的生长环境、种植年限和种植方法等
方面比较具有代表性的 10批掌叶大黄作为样品来建立 HPLC
指纹图谱。10批掌叶大黄样品的共有峰占总峰面积均≥70%,整
体相似度均接近或>0.90 ,提示人工种植的掌叶大黄样品在生
长环境 、种植年限和种植方法等方面存在很大差别;但其主要
化合物成分的种类及大部分化合物的相对含量还是比较一致
的 ,表明在同一种植地域的大黄中各类型化合物的合成代谢主
要受植物体内在因素的调控 。生长环境 、种植年限和种植方法
等对其影响可能主要体现在总量的积累和少量化合物的相对
含量上 , 如在不同生长年限样品间含量差异可达 2倍以上并表
现出个别峰之间较大的比例变化 。因此 , 有必要采集更多的样
品进行深入的研究 。
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(收稿日期:2008-03-13 修回日期:2008-10-20)
中国药房 2008年第 19卷第 33期 China Pharm acy 2008 Vol.19 No.33 · 2593·
表 1 回归方程 、线性范围和检测限
Tab 1 Regression equation , linear range and detection li_
mit
成分 回归方程 线性范围/μg ·mL- 1 相关系数(r)
检测限
/μg ·mL- 1
原儿茶醛 Y =— 2 474.67+2 382.99X 2.5～ 200.0 0.999 7 0.25
丹参素 Y =— 2 786.17+2 163.91X 2.5～ 200.0 0.999 5 0.25
原儿茶酸 Y =— 11 736.69+5 557.47X 2.5～ 200.0 0.999 5 0.15
表 2 加样回收率试验结果(n=9)
Tab 2 Results of recovery test(n=9)
成分 样品含量/μg ·mL- 1
加入量
/μg ·mL- 1
测得量
/μg ·mL- 1
回收率
/%
x
/%
RSD
/%
原儿茶醛 30.5 10 40.512 3 100.12
100.04 1.30 75.5 30 60.498 8 99.99
30.5 50 80.501 2 100.01
丹参素 47.9 20 67.917 8 100.04
99.99 1.47 73.9 50 127.867 8 99.96
47.9 80 132.839 2 99.98
原儿茶酸 47.9 20 56.059 6 100.05
100.01 1.47 74.9 40 76.041 8 99.98
47.9 80 116.038 6 99.99
表 3 样品含量测定结果(n=5)
Tab 3 Results of content determinat ion of samples(n=5
样品 成分 样品含量/mg ·g- 1 RSD/%
白花丹参药材 原儿茶醛 0.61 2.13
丹参素 32.84 1.52
原儿茶酸 0.721 2.41
白花丹参叶制剂 原儿茶醛 - -
丹参素 23.05 1.45
原儿茶酸 0.226 2.32
白花丹参 Salv ia mi ltiorrhiz a bge.f.alba为唇形科植物
丹参 S alv ia milt iorrhiza bge 的白花变型 , 通常以根部入药 ,
味苦 ,性微寒 ,具有活血化瘀 、凉血消肿 、清心除烦的功效 [1] 。其
主要分布于山东境内 , 其他地区较为少见 , 属珍稀濒危药用植
物 。通过对白花丹参的根 、茎 、叶不同部位中微量元素的分析比
较发现 ,白花丹参的茎、叶可能具有一定的药用价值 [2 ] 。现代药
理研究也证明 , 白花丹参的根和茎 、叶水提物能明显增强脑缺
血再灌注小鼠的耐缺氧能力 , 且茎 、叶水提物对脑缺血保护作
用较强 [ 3 ,4 ] 。丹参水溶性主要有效成分为丹参素 、原儿茶酸和原
儿茶醛等 。已有几位研究者采用高效毛细管电泳法来分离和测
定这 3种物质 [5 ,6 ]。在此基础上 ,笔者建立了一种新的毛细管区
带电泳体系来分离测定白花丹参及其叶制剂中丹参素 、原儿茶
酸 、原儿茶醛的含量 。
1 仪器与试药
P/ACE MDQ 型毛细管电泳仪、二极管阵列检测器(美国
Beckm an公司);868型 pH 测试仪(美国 Orion公司);Milli-
Q Systhesis型超纯水系统(法国M illipore公司);FD-1型冷
冻干燥机(北京博医康技公司);AX -205型电子分析天平(瑞
士梅特勒-托利多公司)。氢氧化钠(山东单县有机化工厂)、磷
酸(山东兖州化工厂)、硼砂(天津市博迪化工有限公司)均为分
析纯;丹参素钠 、原儿茶醛 、原儿茶酸对照品 (中国药品生物制
品检定所 , 批号分别为 110810-200503 、 110810-200506 、
110809-200503);白花丹参采于泰山南麓 ,经泰山医学院夏作
理教授鉴定为真品 。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
分别准确称取丹参素钠 、原儿茶醛 、原儿茶酸对照品 2.0
mg ,用超纯水溶解 , 分别配制成丹参素钠 、原儿茶醛 、原儿茶酸
浓度为 2 mg ·mL -1对照品贮备液 ,密闭 , —4 ℃避光贮存 。试
验时用超纯水稀释至所需浓度 。
2.2 供试品溶液的制备
2.2.1 白花丹参药材溶液:将药材切段后用粉碎机粉碎 , 过
60目筛 ,混合均匀后贮存于硅胶干燥器中 。使用时用四分法取
出 500.00 mg ,加 10 mL 水 ,浸泡 2 h ,100 ℃煮约 30m in ,多层
棉纱或 200 目滤网过滤 ;剩余药渣再加 50 mL 水煮约 30
min。 2次溶液合并到一起 , 5 000 r ·min -1离心 10 min ,收集
上清 , 80 ℃水浴蒸馏至 10 mL 左右;再次过滤 ,滤液定容于 10
mL 容量瓶中 ,密封 , —4 ℃避光贮存 。
2.2.2 白花丹参叶制剂供试品:取同一批白花丹参叶 , 磨碎
后过 30目筛 , 取出 10 g 粉末 , 浸泡于 500 mL 水中(100 ℃)5
min , 过滤 , 经冷冻干燥后得冻干粉 , 贮存于干燥器中 。测定时
精确称取 500.00 mg 冻干粉 , 加水溶解过滤后定容在 10 mL
容量瓶中 ,密封 , —4 ℃避光贮存 。
2.3 电泳方法
2.3.1 电泳条件:以 5 mmol· L -1的硼砂缓冲液(pH7.4)为
介质 , 以未涂层石英毛细管柱(75 μm×50.2 cm , 有效长度为
40 cm)为分离通道 , 柱温为 25 ℃, 压力进样(0.5 psi)4 s , 20
kV 恒压分离 ,检测波长为 210 nm ,正极进样 ,负极检测 。
2.3.2 方法:为使毛细管内表面保持一致 , 每次试验前分别
用蒸馏水(5min)、0.1 mol ·L -1NaOH(5 min)、蒸馏水(3 min)、
缓冲溶液(10 min)依次冲洗毛细管。2次运行之间依次用蒸馏
水(2 min)、0.1 mol· L -1NaOH (3 min)、蒸馏水(2 min)、缓
冲溶液(5 min)冲洗毛细管 ,以提高迁移时间 、峰面积和峰高的
重现性 。进样前所有溶液需经 0.45μm 微孔滤膜过滤 ,并超声
脱气。试验结束后将毛细管用超纯水冲洗 10 min ,贮存 ,备用 。
2.4 线性关系考察
由对照品贮备液配制成不同浓度 (0 、 2.5 、 5.0 、 10.0 、
20.0 、50.0 、100.0 、200.0 μg ·mL -1)的系列混合对照品溶液 ,
于选定条件下进行电泳分析 , 分别重复 3次 。以峰面积平均值
(Y)对浓度(X , μg ·mL -1)进行线性回归 ,得到 3种水溶性成
分的回归方程 、线性范围 、检测限 ,见表 1。
2.5 精密度试验
将上述对照品溶液在选定条件下连续重复进样 5次 , 测
定 。结果 。当对照品浓度分别为 5 、20 、100μg ·mL -1时 ,原儿
茶醛含量的 RSD 分别为 1.56%、1.56%、1.82%;丹参素含量
的 RSD 分别为 1.72%、 1.42%、 1.79%;原儿茶酸含量的
R SD 分别为 1.73%、1.76%、1.83%,表明方法精密度良好 。
2.6 加样回收率试验
取已知含量的白花丹参药材溶液 ,按高 、中 、低 3个量度准
确加入对照品溶液适量 ,按样品测定法测定 , 计算加样回收率 ,
结果见表 2。
2.7 样品含量测定
在选定条件下 , 按上述方法测定白花丹参药材及其叶制剂
中3种水溶性成分的含量 ,结果见表 3;电泳图谱见图 1。
从表 3可以看出 , 白花丹参药材和叶制剂中 3种水溶性成
分的含量水平高低为丹参素>原儿茶酸>原儿茶醛;虽然白花
丹参药材中 3种成分的含量较叶制剂中的含量高 , 但从表中结
果可知白花丹参叶也具有一定的药用价值 , 可以加以开发利
用 。这与文献 [4 ]结论一致 。
从图 1可以看出 , 3种水溶性成分的测定均不受其它成分干
扰 。其中 ,白花丹参叶制剂中由于原儿茶醛含量低 ,未检测到。
3 讨论
本文采用毛细管电泳法 ,在 8 min内使原儿茶醛 、丹参素 、
· 2594· China Pharmacy 2008 Vol.19 No.33 中国药房 2008年第 19卷第 33期
射干苷标准品质量标准研究
袁崇均 *,王 笳 # ,陈 帅 ,罗 森 ,徐学民(四川省中医药科学院 ,成都市 610041)
中图分类号 R917;R927.11 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2008)33-2594-03
摘 要 目的:建立射干苷标准品的质量标准 。方法:采用定性 、定量分析方法 ,依照 2005年版《中国药典》(二部)附录有关规定 ,对
射干苷各项指标进行检测 。结果:3批射干苷标准品的比旋度为 —28°～ —30°([ α] 25D ,c0.11 ,吡啶),百分吸收系数(E1%1 cm)为 790 ～ 830 ,
熔点为 252 ～ 254 ℃,灰分<0.5%,高效液相色谱法测定射干苷含量>99.5%。结论:各项指标均符合标准物质的相关规定 ,所建标
准可用于射干苷标准品的质量控制 。
关键词 射干苷;质量标准;高效相色谱法;标准品
Study on the Quality Standard of Belamcandin Standard Substance
YUAN Chong -jun , WANG Jia , CHEN Shuai , LUO Sen , XU Xue-min(Sichuan Academy of Science of
Chinese M ateria M edica ,Chengdu 610041 ,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish the quality standard of Belamcandin standard substance.M ETHODS:Dif ferent in-
dices of standard Belamcandin were exam ined w ith quantita tive and quantitative analyses according to the cor responding mea-
sures stipulated in the Appendix o f pharm acopoeia of peoples republic of C hina(part Ⅱ)published in 2005.RESU LTS :T he
specific ro tato ry power o f 3 batches of st andard Be lam candin w as —28°～ —30°([α] 25D , c0.11 , Pyridine);t he E1%1 cmw as 790 ～ 830;
the melting point w as 252 ～ 254 ℃ and the ash content w as less than 0.5%.The content of Be lam candin in the products w as
above 99.5% as revealed by HPLC.CONCLUSION :All o f the indices w ere show n to mee t t he standards for standard sub-
stances and t he est ablished standard can be used fo r the quality contro l o f standard Belamcandin.
KEY WORDS Belamcandin;Quality standard;HPLC;Belamcandin st andard substance
原儿茶酸达到完全基线分离;白花丹参药材在 210 nm波长下 ,
原儿茶酸最低检测限可达 0.15μg ·mL -1 , 丹参素 、原儿茶醛
最低检测限可达 0.25μg ·mL -1;线性范围大 , 3种水溶性成
分的线性范围均为 2.5 ～ 200μg ·mL -1 。总之 ,本方法快速 、简
单 、回收率高 、变异小 , 可用于白花丹参的成分分析和含量测
定 , 为白花丹参制剂的质量控制 、白花丹参水溶性有效成分的
血浆样品分析及体内药动学研究提供方法学基础 。尤为重要的
是 , 本方法在不加十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)[7 , 8 ]的情况
下就能快速 、简便地检测到 3种水溶性有效成分 , 大大提高了
分析速度 。
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(收稿日期:2007-11-01 修回日期:2008-01-30)
*副主任技师。研究方向:中药新药。电话:028-85237395
#通讯作者:副研究员 , 博士。研究方向:中药新药。电话:028-
85231598。 E-mail:wangjia926@126.com
图 1 电泳图谱
A.混合对照品;B.白花丹参药材;C.白花丹参叶制剂;1.原儿茶醛;
2.丹参素;3.原儿茶酸
Fig 1 Electropherogram
A.mixture of control;B.Sa lvia m il tiorrhiza herbal medicine;C.p re_
parations of Salvia mil t iorrh iza;1.PAH;2.DSS;3.PA