全 文 ：雪胆素乙通过破坏微丝结构和促进 p21Cip1 表达抑制
前列腺癌 PC-3 细胞的增殖
任 帅1，徐丽慧1，2，曾龙辉1，欧阳东云1，何贤辉1
(暨南大学生命科学技术学院 1． 免疫生物学系，2． 细胞生物学系，广东 广州 510632)
摘要:目的 分析雪胆素乙( CuⅡb) 对人前列腺癌 PC-3 细胞增殖及细胞周期的影响，探讨其作用机
制。方法 MTS法检测 CuⅡb 0． 064 ～ 200 μmol·L －1作用 48 h 后 PC-3 细胞增殖; CuⅡ b 2 和 20 μmol·L －1
作用 24 h，相差显微镜观察细胞形态; CuⅡ b 2 和 20 μmol·L －1作用 48 h，流式细胞术分析细胞周期分布;免
疫荧光染色分析 CuⅡb 20 μmol·L －1分别作用 1，4和 24 h后微丝和微管细胞骨架变化;免疫印迹法测定 CuⅡb
20 μmol·L －1分别作用 1，4 和 24 h后 G肌动蛋白、F肌动蛋白、p21Cip1及细胞周期蛋白 A，B1，E和 D1 的表
达。结果 CuⅡb以浓度依赖方式抑制 PC-3 细胞的增殖( r = 0． 9817，P ＜ 0． 05) 。CuⅡb 20 μmol·L －1作用
48 h，使细胞周期阻滞于 G2 /M期，从溶剂对照组的( 27． 7 ± 1． 5) %上升为( 45． 3 ± 1． 8) % ( P ＜ 0． 01) ，相差
显微镜见细胞发生明显收缩。CuⅡb 20 μmol·L －1作用 24 h，使 G肌动蛋白水平显著下降，F 肌动蛋白发生
严重聚集( P ＜ 0． 05) ，而对微管只有轻微影响。与溶剂对照组相比，CuⅡb 20 μmol·L －1作用 24 h 后，细胞
p21Cip1表达明显升高，细胞周期蛋白 A表达显著下调，其他细胞周期蛋白表达上调( P ＜0． 05)。结论 CuⅡb能
明显抑制人前列腺癌 PC-3 细胞的增殖，其机制可能是通过诱导肌动蛋白聚集，破坏微丝骨架，促进抑癌因子
p21Cip1表达，阻滞细胞周期的进程。
关键词:雪胆素乙; 前列腺癌细胞; 肌动蛋白聚集; 细胞周期阻滞
中图分类号:R979． 1 文献标志码:A 文章编号:1000-3002(2012)06-0835-07
DOI:10． 3867 / j． issn． 1000-3002． 2012． 06． 010
前列腺癌已成为欧美男性的多发疾病。最新数
据显示，美国新增患者 22． 3 万例，约 2． 9 万人因之
死亡［1］。在欧美男性癌症死亡率中仅次于肺癌而
位居第二［2］。目前，化疗是治疗激素非依赖性前列
腺癌的主要手段，但随着临床上一些抗前列腺癌药
物的广泛使用，其毒性作用和机体产生的耐药性日
益增强［3］。此外，这些药物对前列腺癌并没有足够
的特异杀伤作用。因此研发新的药物显得尤为必
要。研究发现，一些天然植物提取的活性成分如葫
芦素类化合物葫芦素 E，具有抗前列腺癌效应［4］。
雪胆素乙(cucurbitacin Ⅱb，CuⅡb)是从葫芦
科雪胆属植物雪胆(Hemsleya amabilis Diels)提取的
一种四环三萜类有效成分，是葫芦素家族的一个成
员，化学名为23，24-双氢葫芦素F，临床上常用于
基金项目:国家自然科学基金(81173604) ;中央高校基
本科研业务费专项资金(21609403)
作者简介:任 帅(1987 －) ，男，硕士研究生，主要从事
肿瘤药理学研究，E-mail:renshuai19880511@ 163． com，Tel:
(020)85220732
通讯作者:何贤辉，E-mail:thexh@ jnu． edu． cn，Tel:
(020)85220679
治疗菌痢、肠炎、支气管炎和急性扁桃体炎等［5］。
许多研究表明，葫芦素类物质具有广泛的抗肿瘤效
应，能够显著抑制肿瘤的发生发展，其作用机制包括
扰乱正常肌动蛋白细胞骨架，引起肌动蛋白异常聚
集，抑制 Jak /STAT3 信号通路，调节 MAPK 信号通
路等［6 － 10］。然而，CuⅡb 抗人前列腺癌的研究尚未
见报道，具体作用机制不清。本研究以雄性激素非
依赖性前列腺癌 PC-3 细胞为模型，借助流式细胞仪
和荧光显微镜等技术分析不同浓度 CuⅡb 对细胞
增殖和细胞周期分布的影响，探讨其抗癌作用的可
能机制。
1 材料与方法
1． 1 药物、试剂和仪器
CuⅡb，纯度 98%，购自上海顺勃生物技术公
司;RPMI 1640 培养液、胎牛血清、青霉素 /链霉素均
购自美国 Invitrogen 公司;二甲亚砜(DMSO)、碘化
丙啶 (propidium iodide，PI)、十二烷基硫酸钠
(sodium dodecyl sulfate，SDS)购自美国 Sigma 公司;
MTS为 Promega产品;兔抗肌动蛋白抗体、鼠抗细胞
周期蛋白 A、鼠抗细胞周期蛋白 D1、鼠抗细胞周期
·538·中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012
蛋白 E、兔抗细胞周期蛋白 B1(一抗)购自美国 CST
公司，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔、山羊抗鼠
IgG抗体为 Jackson ImmuneResearch产品;BCA试剂
盒为美国 Pierce 公司产品;BeyoECL Plus 化学发光
试剂盒购自碧云天生物技术研究所;FACSCalibur 型
流式细胞仪为美国 Becton Dickinson 公司产品;
DMIRB 荧光显微镜为德国 Leica 产品，FluorChem
8000 为美国 AlaphaInnotech公司产品。CuⅡb 溶于
DMSO，配成 20 mmol·L －1的储存液，存于 －20℃备用。
1． 2 细胞培养
人前列腺癌细胞株 PC-3 购自中国科学院上海
细胞库，置于含 10%胎牛血清、青霉素 100 kU·L －1
和链霉素 100 mg·L －1的 RPMI 1640 培养液中，并在
37℃及 5% CO2 的湿化培养箱中培养，每 3 d 传代
1 次，实验时采用对数生长期细胞。细胞分成溶剂
对照组，只加含 0． 1% DMSO的 RPMI 1640 培养液;
CuⅡ b组加入不同浓度的 CuⅡ b作用一定的时间。
实验均重复 3 次。
1． 3 MTS方法测定细胞存活
取对数生长期的 PC-3 细胞接种于 96 孔培养
板，每孔 5000 个细胞，24 h 后将培养液换成溶剂对
照液(含 0． 1% DMSO)和 CuⅡb 0． 064，0． 32，1． 6，
8． 0，40． 0 和 200． 0 μmol·L －1，培养 48 h，加入 20 μl
MTS，37℃培养箱中培养 4 h 后，全自动酶标仪测定
490 nm波长处吸光度(A490 nm)值，并计算药物对细
胞抑制率的影响。为消除培养基对结果的影响，实
验同时设空白对照组(没有细胞，含 RPMI 1640 培
养液和 0． 1% DMSO)。细胞抑制率(%)=〔1 －
(A实验组 － A空白组)/(A对照组 － A空白组)〕× 100%。从
MTS曲线中有浓度依赖性的浓度区，选取高低两个
抑制率分别为约 25% 和 65% 的浓度(即 2 和
20 μmol·L －1)作为下一步实验的测试浓度。
1． 4 倒置相差显微镜观察形态学改变
细胞以每孔 2 × 104 种于 6 孔板中，分别以
CuⅡb 2 和 20 μmol·L －1处理细胞，24 h后显微镜下
观察细胞的形态变化，拍照记录细胞图像。
1． 5 流式细胞仪检测细胞周期［11］
细胞接种于 75 cm2 培养瓶，分别以 CuⅡb 2 和
20 μmol·L －1处理 48 h 后，用 0． 25%的胰酶消化收
集细胞，400 × g离心 10 min，冷 PBS洗 2 次，加 70%
的预冷乙醇于 － 20℃固定 1． 5 h 以上，离心去除乙
醇，细胞中加入 0． 4 ml 含 PI 20 mg·L －1和 RNase A
30 mg·L －1的染色液，37℃避光染色 1 h，用流式细胞
仪检测细胞周期分布，每个样本收集 2． 0 × 104 细胞
参数，数据用 CELLQuest进行分析。
1． 6 荧光染色观察肌动蛋白表达
取对数生长期 PC-3细胞，调整到 1． 5 × 104 L －1，
接种于玻璃底培养皿中(每个培养皿 2 ml) ，24 h 后
将培养液换成溶剂对照液(含 0． 1% DMSO)或
CuⅡb 20 μmol·L －1，分别培养 1，4 和 24 h，4%多聚
甲醛处理 15 min，PBS洗 3 次，冰冷的甲醇于 － 20℃
通透 10 min，PBS洗涤，封闭液(含 5%的山羊血清、
0． 1%的吐温-20，10%的 10 × PBS)封闭 1 h 后加入
抗 β 肌动蛋白一抗，4℃ 反应过夜，洗涤后加入
CF-488A标记的二抗，避光反应 1 h，以 Leica DMIRB
荧光显微镜观察和记录荧光图像。
1． 7 Western印迹法检测细胞骨架及细胞周期相
关蛋白表达
细胞接种于 75 cm2 培养瓶，分别以 CuⅡ b
20 μmol·L －1处理 1，4 和 24 h 后，用预冷的 PBS 洗
细胞 2 次，参考文献［10］，制备 G 肌动蛋白和 F 肌
动蛋白样品，先加入 200 μl预冷的肌动蛋白抽提液
(含 0． 2% Triton X-100)抽提 G肌动蛋白，残余部分
以 2 × SDS-PAGE 上样液裂解获得含 F 肌动蛋白的
样品。制备总蛋白样品时，直接加入 160 μl 全细胞
裂解液，抽提总蛋白，以 BCA 试剂盒测定蛋白质浓
度，取适量蛋白样品，以 12%或 10%十二烷基硫酸
钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白质，
电泳后将蛋白电转移至 PVDF 膜上，加入一抗于
4℃摇床孵育过夜，洗涤后，加入相应的 HRP标记二
抗孵育 1 h，最后用 BeyoECL Plus化学发光试剂盒显
色，X线片显影，FluorChem 8000 成像仪记录结果，并
以 β微管蛋白作为内参，以 AlphaEaseFC软件分析求
半定量数据，作为 G肌动蛋白、F肌动蛋白、细胞周期
蛋白 A，B1，D1，E，p21Cip1蛋白相对表达量。
1． 8 实验结果数据以 珋x ± s表示，用 GraphPad Prism
4． 0 软件进行单因素方差分析，组间比较采用 Newman-
Student-Keuls检验，P ＜0． 05为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 CuⅡb对 PC-3 细胞形态的影响
在 MTS结果基础上，选择对细胞增殖有明显抑
制效应两个浓度 CuⅡb 2 和 20 μmol·L －1，观察其对
细胞形态和周期的影响。如图 1 所示，PC-3 细胞经
CuⅡb作用24 h，相差显微镜下观察，溶剂对照组细
胞生长良好(图 1A) ，CuⅡb 2 μmol·L －1组细胞生长
缓慢，细胞间隙变宽，但大部分细胞保持伸展状态
(图 1B) ;CuⅡb 20 μmol·L －1组细胞数量明显减少，
大部分细胞收缩变圆，且可发现明显的细胞收缩后
留下的丝状痕迹(图 1C)。
·638· 中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012
Fig． 1 Effect of cucurbitacin Ⅱb (CuⅡb)on cell mor-
phology after culturing for 24 h． A:normal control;B － C:
CuⅡb 2 and 20 μmol·L －1 ．
2． 2 CuⅡb对 PC-3 细胞增殖的影响
如图 2 所示，CuⅡb 0． 064，0． 32，1． 6，8，40
和 200 μmol·L －1处理 PC-3 细胞 48 h 后，随着药物
浓度的升高，抑制率明显增强，并呈现一定的浓度依
赖性。CuⅡb 1． 6，8 和 40 μmol·L －1组细胞抑制率
分别为(15． 8 ± 7． 9)%，(51． 9 ± 3． 2%)和(69． 7 ±
1． 4)% (r = 0． 9817，P ＜ 0． 05)。
Fig． 2 Effect of CuⅡ b on PC-3 cells survival by MTS
assay． The PC-3 cells were seeded in 96-well plates and incubated with
CuⅡb for 48 h at the concentrations of 0． 064，0． 32，1． 6，8，40 and
200 μmol·L －1，respectively，and then measured by MTS assay． Inhibito-
ry rate(%)=〔1 － (ACuⅡb － ABlank)/ANormal contorl － ABlank〕× 100% ．
珋x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01，compared with normal control
group (containing 0． 1% DMSO)．
2． 3 CuⅡb对 PC-3 细胞周期分布的影响
如图 3 和表 1 所示，流式细胞仪分析显示，
CuⅡb 2 μmol·L －1 处理的 PC-3 细胞周期分布
(图 3B)与溶剂对照组(图 3A)相似，而 CuⅡ b
20 μmol·L －1处理的 PC-3 细胞周期发生明显变化
(图 3C) ，使 G2 /M 期(四倍体峰)明显增多，G0 /G1
期细胞减少，亚二倍体峰(凋亡峰)细胞有微小的升
高趋势(P ＜ 0． 05)。
Fig． 3 Cell cycle analysis of PC-3 cells treated with CuⅡb for 48 h by flow cytometry． A:normal control (containing 0． 1%
DMSO) ;B － C:CuⅡb 2 and 20 μmol·L －1 ． M1:sub-G0 /G1，M2:G0 /G1，M3:S，M4:G2 /M．
Tab． 1 Effect of CuⅡb on cell cycle of PC-3 cells
CuⅡb /μmol·L －1
Cell cycle /%
Sub-G0 /G1 G0 /G1 S G2 /M
0 0． 5 ± 0． 1 57． 4 ± 0． 8 11． 3 ± 0． 9 27． 7 ± 1． 5
2 1． 0 ± 0． 6 63． 6 ± 2． 2* 7． 7 ± 0． 4* 24． 9 ± 1． 8
20 5． 1 ± 0． 9* 36． 6 ± 0． 1＊＊ 7． 9 ± 0． 6* 45． 3 ± 1． 8＊＊
PC-3 cells were treated with CuⅡb for 48 h and measured by flow cytometry． 珋x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，compared with normal control
group．
·738·中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012
2． 4 CuⅡb对 PC-3 细胞肌动蛋白聚集的影响
免疫印迹法分析 G 肌动蛋白和 F 肌动蛋白的
含量结果显示，与溶剂对照组相比，随着作用时间的
延长，CuⅡb 20μmol·L －1处理的 PC-3 细胞，G 肌动
蛋白含量明显降低(P ＜ 0． 05) (图 4A，B) ，其中
CuⅡb作用1 h后，G肌动蛋白含量约减少三分之一，
作用 4 h和 24 h后 G肌动蛋白含量低于检测下限，
没有显示明显的条带，而相应的 F 肌动蛋白水平
随着作用时间的延长呈升高趋势，其中在 4 h
和 24 h后 F 肌动蛋白水平明显升高(P ＜ 0． 05)
(图 4C，D)。
Fig． 4 Effect of CuⅡb 20 μmol·L －1 on levels of G-actin
(A，B)and F-actin(C，D)analyzed by Western blotting．
1:normal control group;2:1 h group;3:4 h group;4:24 h group． The
relative levels of G-actin and F-actin were normalized to β-tubulin． B was
the semiquantitative result of A． D was the semiquantitative result of C．
珋x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，＊＊ P ＜ 0． 01，compared with normal control
group．
免疫荧光显微分析表明(图 5) ，溶剂对照细胞
肌动蛋白在细胞皮质区成细丝状分布(图 5A1 和
B1) ;CuⅡb 20 μmol·L －1作用 4 h 肌动蛋白开始聚
集(图 5A2 和 B2) ，CuⅡb 20 μmol·L －1处理 24 h 组
细胞肌动蛋白发生明显聚集，成亮点状区域性分布
(图 5A3 和 B3)。与肌动蛋白相比，微管结构的变
化较小且滞后于肌动蛋白的聚集。
Fig． 5 Effect of CuⅡb 20 μmol·L －1 on actin(A)and
β-tubulin(B)in PC-3 cells (Immunofluorescence)． 1:normal
control group;2:4 h group;3:24 h group．
2． 5 CuⅡb 对 PC-3 细胞周期蛋白及 p21Cip1表达
的影响
免疫印迹分析显示，与溶剂对照组相比，CuⅡb
20 μmol·L －1作用 1 h后，没有检测到 p21Cip1表达，但
CuⅡb 20 μmol·L －1作用 4 和 24 h 后，p21Cip1表达明
显升高(P ＜ 0． 05) (图 6A，图 6B1)。与溶剂对照组
相比，CuⅡb 20 μmol·L －1作用 4 和 24 h 后，周期蛋
白 B1(图 6A，图 B2)和周期蛋白 E(图 6A，图 B3)表
达均明显上调(P ＜ 0． 01) ，作用 1 h 时蛋白表达无
显著差异。与此相反，周期蛋白 A 在 1 和 4 h 时明
显增加(P ＜ 0． 01) ，24 h后几乎检测不到(图 6A，图
B4) ;与对照组相比，周期蛋白 D1 在 1 和 4 h时表达
水平明显升高(P ＜ 0． 01) ，24 h 后下调到溶剂对照
组水平(图 6A，图 B5)。
·838· 中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012
Fig． 6 Effect of CuⅡb on expression of cell cycle related proteins in PC-3 cells analyzed by Western blotting． B1 － B5 were the
semiquantitative results of A． 1:normal control group;2:1 h group;3:4 h group;4:24 h group． The relative levels were normalized to β-tubulin．
珋x ± s，n = 3． * P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01，compared with normal control group．
3 讨论
本研究显示，CuⅡb 能快速引起人前列腺癌
PC-3 细胞中 G肌动蛋白的清除和 F肌动蛋白聚集，
严重破坏微丝细胞骨架的结构，同时上调细胞周期
抑制因子 p21Cip1的水平，降低细胞周期蛋白 A 的表
达，从而导致细胞周期阻滞，抑制细胞增殖。这些结
果表明，CuⅡb 可能通过破坏肌动蛋白细胞骨架而
发挥其抗前列腺癌的效应。
在 MTS结果基础上，本研究选择对细胞增殖有
明显抑制效应的 CuⅡb 浓度 2 和 20 μmol·L －1观察
其对细胞形态和周期的影响。实验进程中发现，与
溶剂对照组相比，CuⅡb 20 μmol·L －1作用 24 h 后
细胞形态已发生明显变化，作用 48 h 细胞周期出现
明显阻滞，而在 2 μmol·L －1细胞形态和周期阻滞并
不明显。基于这些细胞水平的药理作用，本研究在
机制研究时选择有明显药效的 20 μmol·L －1研究作
用 1，4 和 24 h对细胞骨架和细胞周期相关蛋白表
达的影响。
葫芦素类物质影响肌动蛋白细胞骨架的现象已
有报道，如葫芦素 B 能够诱使肌动蛋白聚集，引起
G2 /M期阻滞，抑制细胞增殖
［12］。我们也曾发现葫
芦素 B能引起小鼠 B16F10 细胞 G肌动蛋白的快速
清除［13］。在细胞有丝分裂胞质分离期，肌动蛋白与
肌球蛋白结合形成收缩环，收缩环收缩，使两个子细
胞最终分离;肌动蛋白的聚集往往引起胞质分裂的
失败，导致多核细胞的形成。CuⅡb 促使肌动蛋白
聚集，但对微管的结构影响较小，这与以往的报道相
符［12，14］。因此，可以推测，CuⅡb 通过破坏微丝细
胞骨架，影响收缩环的形成，使细胞核不能分离，从
而将细胞周期阻滞在四倍体峰 G2 /M期。
细胞周期受一系列分子的调控，如 CDK、细胞
周期蛋白、抑癌基因及其产物。其中 CDK的活性受
到细胞周期蛋白及抑癌基因产物的双向调节。
·938·中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012
p21Cip1是细胞周期的负调因子，通过结合细胞周期
蛋白-CDK 复合物，抑制后者的活性，使细胞周期阻
滞于 G1 和 G2 /M 期
［15 － 16］。通过细胞周期标志物
(如细胞周期蛋白 A、细胞周期蛋白 D 等) ，可推测
细胞周期阻滞的阶段。细胞周期蛋白 A 是 S 期进
程的关键因素。本研究显示，CuⅡ b 不但上调
p21Cip1的表达水平，而且使细胞周期蛋白 A 水平下
降，推测在 p21Cip1的调控下，由于细胞周期蛋白 A
的低表达，细胞未能进入并通过 S期，细胞周期阻滞
在 G0 /G1 期或 G2 /M 期。需要指出的是，流式细胞
仪分析不能区分 G2 /M期和处于 G0 /G1 期的四倍体
细胞，可见流式数据显示的 G2 /M 期细胞中可能包
含处于 G0 /G1 期的四倍体细胞。
微丝主要以球状肌动蛋白和纤维状肌动蛋白动
态平衡形式存在。肌动蛋白聚合∕去聚合状态的改
变与诸多细胞生理过程如胞质分裂、凋亡、运动和分
泌等有关，一旦药物打破这种平衡，对细胞产生的影
响可想而知［6］。据报道，葫芦素作用后，细胞的运动
能力几乎完全丧失［17］，这在一定程度上限制了肿瘤
细胞的扩散。综合本研究结果得知，CuⅡb 是一类作
用于微丝结构的药物。Lee等［18］指出，细胞松弛素 B
及其他抗肌动蛋白药物可不依赖于 p53 介导，通过破
坏细胞骨架中肌动蛋白的平衡，直接引起 p21Cip1表达
上调。值得一提的是，PC-3 是 p53 缺陷型细胞。本
研究也发现，p21Cip1表达明显上调。故推测，CuⅡb 作
用下，PC-3细胞中 p21Cip1表达上调可能与微丝骨架
的改变有关，其具体机制有待进一步研究。
总之，本研究表明 CuⅡb 能抑制前列腺癌 PC-3
细胞的增殖，诱导细胞周期阻滞，表现出明显的抗前
列腺癌效应，这种效应可能与其破坏肌动蛋白细胞骨
架有关。然而，CuⅡb是否在体内模型中也通过同样
的机制发挥抗肿瘤效应，需要进一步研究阐明。
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Inhibitory effect of CucurbitacinⅡb on proliferation of human prostate
cancer PC-3 cells through disruption of microfilaments
and upregulation of p21Cip1 expression
REN Shuai1，XU Li-hui1，2，ZENG Long-hui1，OUYANG Dong-yun1，HE Xian-hui1
(1． Department of Immunobiology，2． Department of Cell Biology，College of Life Science and Technology，
Jinan University，Guangzhou 510632，China)
Abstract:OBJECTIVE To explore effects of cucurbitacin Ⅱb (CuⅡb)on human prostate
cancer PC-3 cells and its underlying mechanism． METHODS The proliferation of cells was detec-
ted by MTS assay after PC-3 cells were treated with CuⅡb 0． 064 － 200 μmol·L －1 for 48 h． After
treated with CuⅡb 2 and 20 μmol·L －1 for 24 h，cell morphologic changes were observed under
phase contrast microscopy． After exposed with CuⅡb 2 and 20 μmol·L －1 for 48 h，cell cycle distri-
bution was measured by flow cytometry using propidium iodide (PI)staining． When cultured with
CuⅡb 20 μmol·L －1 for 1，4 and 24 h dividedly，the changes of microfilament and microtubule
structures were assessed by immunofluorescence staining． After separately treated with CuⅡ b
20 μmol·L －1 for 1，4 and 24 h，the protein expression levels of F-actin，G-actin，p21Cip1，cyclin A，
cyclin B1，cyclin D1 and cyclin E were detected by western blotting(P ＜ 0． 05)． RESULTS
CuⅡb inhibited the proliferation of PC-3 cells in a concentration-dependent manner． CuⅡ b
20 μmol·L －1 increased the cell rates of G2 /M phase (tetraploid)to (45． 3 ± 1． 8)% from (27． 7 ±
1． 5)% in control group (P ＜ 0． 01) ，indicating an arrest of cell cycle progression． The cells
became shrunk after CuⅡb treatment． Meanwhile，CuⅡb 20 μmol·L －1 decreased G-actin levels
and induced severe F-actin aggregation(P ＜0． 05) ，but had minimal effect on the microtubules． In
addition，CuⅡb 20 μmol·L －1 also elevated p21Cip1 expression and downregulated cyclin A level in PC-3
cells，whereas the other cyclins were slightly upregulated(P ＜ 0． 05)． CONCLUSION CuⅡb
can significantly inhibit the proliferation of human prostate cancer PC-3 cells probably through
induction of actin aggregation，disruption of microfilaments，upregulation of tumor suppressor p21Cip1
expression and arrest of cell cycle progression．
Key words:cucurbitacin Ⅱb;prostate cancer cells;actin aggregation;cell cycle arrest
Foundation item:The project supported by National Natural Science Foundation of China (81173604) ;and Basic Research
Funds for the Central Universities (21609403)
Corresponding author:HE Xian-hui，E-mail:thexh@ jnu． edu． cn，Tel: (020)85220679
(收稿日期:2012-03-28 接受日期:2012-07-04)
(本文编辑:乔 虹)
·148·中国药理学与毒理学杂志 2012 年 12 月第 26 卷第 6 期 Chin J Pharmacol Toxicol，Vol 26，No 6，Dec 2012