全 文 ：2007年 9月
September 2007
色 谱
Chinese Journa l of Chrom atography
Vo.l 25 No. 5
781 ～ 782
收稿日期:2007-01-29
第一作者:赵兴华 ,男 ,博士研究生 , E-m a il:xianzhaox inghua@yahoo. com. cn.
通讯联系人:王建华 ,男 ,教授 ,博士生导师 , T e l:(029)87092429, E-m a il:jhwang1948@ sina. com.
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No. 30571315)和博士点基金项目(No. 20030712017).
气相色谱-甲基化-α-D-甘露糖苷内标法测定
变异黄芪中的苦马豆素
赵兴华 , 崔忠华 , 耿果霞 , 王建华 , 张志敏 , 宋毓民 , 刘志滨
(西北农林科技大学动物科技学院 , 陕西 杨凌 712100)
摘要:建立以甲基化-α-D-甘露糖苷为内标物 , 用气相色谱测定变异黄芪中苦马豆素的方法。植物样品经甲醇超声
提取 、氯仿去除杂质后 ,将碱性正丁醇萃取物用硅烷化试剂进行衍生化 ,通过 AT. SE-54毛细管柱分离 , 氢火焰离子
化检测器检测 ,测得变异黄芪干草粉中苦马豆素含量为 115. 7m g /kg, 加标回收率为 82.6%～ 94.0%, 相对标准偏
差为 2. 8%。该方法能用于疯草样品中苦马豆素的含量检测。
关键词:气相色谱(GC);疯草( locoweed);苦马豆素(swainson ine);衍生化(derivatization)
中图分类号:O658 文献标识码:B 文章编号:1000-8713(2007)05-0781-02 栏目类别:技术与应用
疯草( locoweed)是棘豆属 (Oxytropis)和黄芪
属 (Astragalus)植物的统称 ,是遍布世界的有毒植
物 ,会导致大量家畜中毒 ,对畜牧业有严重危害 。变
异黄芪是危害较严重的一种疯草 ,广泛分布于内蒙
古 、青海 、甘肃等省区 。苦马豆素 (swainsonine,
SW)是一种水溶性吲哚兹定生物碱 ,是疯草类植物
的主要有毒物质;但 SW能抑制肿瘤的生长和转移 ,
具有很高的药用价值 [ 1] 。目前 SW的检测方法主要
有薄层色谱扫描法 [ 2] 、甘露糖苷酶法 [ 3] 、气相色谱
法 (GC)[ 4] 、液相色谱 /质谱联用法 [ 5]和离子抑制液
相色谱法[ 6]等 。薄层色谱扫描法误差较大 ,结果不
够精确;气相色谱法和液相色谱法虽能进行含量测
定 ,但目前主要采用外标法 。本文作者曾在前期工
作中用气相色谱外标法检测 ,其检测结果的相对标
准偏差 (RSD)为 8%～ 18%,重现性和精确性都较
差 。采用甲基化-α-D-甘露糖苷 (m ethyl-α-D-man-
nopyranos ide,me-Gal)为内标物对 SW进行 GC分
析 ,旨在建立准确 、灵敏的测定方法 ,为进一步研究
动物疯草中毒和 SW的药用价值奠定基础。
1 实验部分
1. 1 材料与试剂
SW标准品 (西北农林科技大学);变异黄芪于
2005年采自内蒙古阿拉善盟左旗;me-Ga l (SIG-
MA ,纯度 99%);双 (三甲基硅烷基 )三氟乙酰胺
(BSTFA)+三甲基氯硅烷 (TMCS)(硅烷化试剂 ,
美国 Supelco);吡啶(分析纯 ,加入高温活化的分子
筛去除水分 )。
1. 2 仪器和条件
GC-14C(日本岛津公司 ),威玛龙色谱工作站。
AT. SE-54石英毛细管柱 (30 m ×0.25 mm , 0.33
μm),柱温 210 ℃,进样口温度 300 ℃,氢火焰离子
化检测器 (FID)温度 280 ℃,载气为高纯氮 ,流速为
2mL /m in,进样 1 μL,分流比 30∶1。用内标工作曲
线法定量 。
1. 3 样品制备
1. 3. 1 待测样品制备
准确称取 10 g变异黄芪干草粉于烧瓶中 ,加入
50mL甲醇超声提取 30m in。重复一次 。合并提取
液 ,回收甲醇 ,浸膏用 1mol /L HCl溶解 ,氯仿萃取 ,
去除杂质 ,调水相的 pH为 10 ,用正丁醇萃取 ,回收
正丁醇 ,再用 2 mL吡啶溶解残留物为供试样品 。
1. 3. 2 标准样品制备
准确称取一定量的 SW标准品 , 用吡啶配成系
列质量浓度的标准溶液 。
1. 3. 3 衍生化
准确量取 100 μL标准溶液和样品溶液 ,各加入
10 μL内标溶液 (5 g /L me-Gal溶液 ),再加入 100
μL BSTFA+TMCS硅烷化试剂衍生 ,密闭 ,室温放
置 1 h。
2 结果与讨论
2. 1 内标物的选择
外标法受进样重复性和试验条件稳定性的影
响 ,在没有自动进样器等条件时 ,其分析结果的精确
性和准确性很难得到保证。 SW与 α-甘露糖苷结构
色 谱 第 25卷
类似 ,因此本试验采用 m e-Gal为内标 ,其出峰时间
与 SW出峰时间相近 ,又能与 SW有效分离 (R s =
3.88),符合内标物的标准 ,可以满足对 SW进行定
量分析的要求 。
图 1 (a)甲基化-α-D-甘露糖苷 、(b)苦马豆素标准品和(c)样品的气相色谱图
1. 甲基化-α-D-甘露糖苷;2. 苦马豆素.
2. 2 线性关系和检出限
利用内标标准曲线法对 SW进行定量分析 , SW
终浓度为 2.048, 0.512, 0.128, 0.032, 0.008 g /L。
以标准样品中 SW的峰面积和内标峰面积之比为纵
坐标 y 、以 SW的质量浓度 (g /L)为横坐标 x绘制标
准曲线 , 回归方程为 y =5.542 4x - 0.039 8(r =
0.999 9),说明 SW在 0.008 ～ 2.048 g /L范围内呈
良好的线性关系 。
以 3倍信噪比(S N/ =3)计算检出限 ,检出限为
0.001 g /L。
2. 3 衍生物的稳定性
分别将 0.512, 0.125, 0.032 g /L的 SW标准溶
液衍生后 ,每隔 2 h测定一次 ,共测定 12次 ,高 、中 、
低 3种浓度的溶液测定结果的 RSD分别为 1.9%,
2.7%和 3.7%。结果表明衍生物在 24 h内稳定。
2. 4 准确度及精确度
于已知含量的变异黄芪干草粉样品中添加含
SW 0.051 85, 0.103 7和 0.155 5 mg的标准溶液 ,
在上述色谱条件下进样分析 ,每个添加水平做 3次
平行试验 ,计算 SW的平均回收率为 82.6%, 90.6%
和 94.0%。取质量浓度为 0.512 g /L的标准溶液 ,
重复进样 12次 ,计算精密度 ,得 RSD为 2.8%。
2. 5 样品测定
按上述样品处理方法和色谱条件对变异黄芪中
干草粉的 SW进行含量测定 ,平行测定 6次。结果
表明 ,样品中 SW的含量为 115.7mg /kg。
3 结论
采用萃取法处理植物样品 ,不通过柱色谱分离 ,
简化了操作步骤 ,减少了 SW在操作过程中的损失。
利用内标工作曲线法对样品中的 SW进行定量测
定 ,方法灵敏度高 ,消除了外标法由于进样量等因素
造成的误差 ,重现性好 ,精确度高 ,提高了方法的稳
定性 ,结果准确可靠 。该方法适用于疯草植物样品
中 SW的微量分析 。
参考文献:
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