全 文 ：爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性
杨胜远1 , 2 , 陆兆新1* , 孙力军1 , 吕凤霞1 , 别小妹1 , 刘战民1
(1.南京农业大学食品科学技术学院 , 江苏 南京 210095;2.广西大学生命科学与技术学院 , 广西 南宁 530005)
摘要:从爬山虎茎中分离到 5株内生菌 , 其中菌株 EJC - 1具有谷氨酸脱羧酶 (GAD) 活性。当湿菌体与 10 g L - 1谷氨
酸钠溶液比例为 1∶10 (W∶V) 时 , 在 30℃和 120 r m in- 1下振荡反应 24 h, 细胞转化液中 γ-氨基丁酸浓度为 (3. 07±
0. 23) mmo l L - 1。通过形态特征 、 生理生化特征和 16S rDNA序列分析鉴定 E JC - 1为巨大芽孢杆菌 (Bacillus m egateri-
um)。同时基于 16S rDNA构建了系统进化树 , 并对 EJC -1进行了系统发育分析 。 B.m egaterium EJC -1 GAD的最适反应
温度和 pH分别为 50 ℃和 5.6。低于 40 ℃, GAD在 pH 5 ～ 6范围内较稳定。 2. 5 mm o l L -1 M g2+对 GAD活力具有显著
的促进作用 , 活力提高了 13.85%。
关键词:谷氨酸脱羧酶;γ-氨基丁酸;内生菌;巨大芽孢杆菌;特性
中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:1000 - 2030 (2007) 02 -0122 - 06
Identification ofParthenoc issus tricuspidata endophyte and
characterization of its g lutamate decarboxylase
YANG Sheng-yuan1, 2 , LU Zhao-x in1* , SUN Li-jun1 , LÜFeng-x ia1 , B IE X iao-me i1 , LIU Zhan-m in1
(1. Co llege of Food Sc ience and Technology, N an jing Agricultural University, Nan jing 210095, China;
2. Co llege of L ife Science and Techno logy, Guangx i Un ive rsity, Nanning 530005, China)
Abstract:One endophy tic bac terium EJC - 1 producing g lutam a te deca rboxy lase (GAD) was screened from 5 strains isola ted from
Parthenocissus tricuspidata (S ieb. et Zucc. ) P lanch. W hen the b io transform a tion w as conducted w ith the ra tio of w et ce lls and
10 g L - 1 L-g lutam a te a t 1∶10 (W∶V) under 120 r m in- 1 at 30℃ for 24 h, theγ-am inobu ty ric acid o f bio transfo rm ation so lu-
tion of strain EJC - 1 w as (3. 07 ±0.23) mmo l L - 1. Base on m orpho log ica l, phy sio log ical and b iochem ica l characteristics,
16S rDNA and phy logenic ana ly sis, the stra in E JC - 1 w as classified to Bacillus megaterium. The prope rties of its GAD we re a lso
exam ined, and the optim al tem pe ra ture and pH fo rGAD activ ity we re 50℃ and 5.6, respec tive ly. The GAD ac tivity w as stable at
pH 5 -6 and be low 40 ℃. 2. 5 mmo l L- 1 M g2+ significantly inc reased GAD ac tiv ity, w hich prom oted 13.85% o f the activ ity.
Key words: g lu tama te decarboxy lase;γ-am inobu ty ric acid; endophy te;Bacillus m egaterium; charac te riza tion
γ-氨基丁酸 (γ-am inobu ty ric ac id, GABA)是一种非蛋白质组成的天然氨基酸 , 为哺乳动物中枢
神经系统一种主要的抑制性神经递质 , 具有重要的生理功能 , 如降血压 、 利尿 、 镇痛安神 、 改善脑机
能 、增进脑活力 、促进长期记忆 、 营养神经细胞 、改善更年期综合症等 。当大脑长期缺乏 GABA将会
导致癫痫 、 帕金森等疾病 。此外 , GABA可以提高饲料利用率和促进畜禽生长 。GABA已经成为一种新
型功能因子 。在食品上已经开发出富 GABA茶 、糙米 、 米胚芽等 [ 1] 。
谷氨酸脱羧酶 (g lu tam ate decarboxy lase, GAD;EC4.1.1.15)是生物催化 L -谷氨酸的 α-羧基脱
羧生成 GABA的唯一酶 。谷氨酸已经通过发酵法获得大规模生产 , 价格相对较为便宜 , 因此利用微生
物 GAD催化谷氨酸脱羧生产 GABA , 是一条有效策略。
近 20多年来 , 已从不同植物的内生菌及其代谢产物中发现了多种新奇生物活性物质 , 植物内生菌
已发展成为一类重要的微生物资源 , 对其生物酶的研究也引起了微生物工作者的关注 [ 2 - 3] 。但是目前仍
未见有关植物内生菌产 GAD和 GABA的研究报道。通过对爬山虎 、 金银花 、苍术 、黄芩 、白头翁 、百部 、
鱼腥草 、连翘 、 杜仲 、黄芪 、蒲公英 、 蓍草和虎杖等植物的内生菌进行分离筛选 , 在爬山虎中筛选到了一
株具有较高 GAD活性的内生细菌 E JC -1, 本文对其分离 、筛选 、鉴定及其酶学特性进行了报道。
收稿日期:2006 - 04 - 03
作者简介:杨胜远 , 博士 , 高级工程师, 主要从事食品微生物和食品生物技术研究。*通讯作者:E-m ail: fm b@ n jau. edu. cn。
南京农业大学学报 2007, 30 (2):122 ～ 127
Journa l of Nanjing Agricu ltural University
1 材料与方法
1.1 主要试验材料
1 .1.1 植物来源 爬山虎 (Parthenocissus tricuspidata (S ieb.e tZucc.) Planch)采自南京紫金山 。选择
生长旺盛的植株 , 取一定量的茎 , 放入保鲜袋中 , 4℃保存备用 。
1 .1.2 主要仪器和试剂 M J Research公司 PTC - 100TM PCR仪;N ikon 102型光学显微镜;日本 Shi-
madzu LC - 10AD /Shimadzu M S - 2010;Agilent 1100 Se ries高效液相色谱 (XDB - C18柱 , 15 cm ×4.6
mm , 5μm)。 γ-氨基丁酸 (m inimum 99.0%)为 Sigma公司产品;色谱纯试剂为美国 Tedia和 H oney-
we ll In te rnational INC公司产品;生化试剂购自天为生物技术公司 。
1.1.3 培养基 内生菌分离和保藏培养基采用 PDA培养基 。发酵培养基配方为:蛋白胨 5 g, 酵母膏 2
g, 谷氨酸钠 5 g, N aC l 5 g, K 2HPO 4 0.25 g, MgSO 4 7H2O 0.5 g, 100 g马铃薯的水提取液 900mL, 加
水补足 1 000 mL, 调节 pH为 7.0 ～ 7.2, 121 ℃灭菌 20m in。
1 .1.4 PCR引物 参照文献 [ 4] 设计 , 正向和反向引物分别为 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和
5′-ACGGTTACCTTGTTACGACTT-3′, 由北京三博远志生物技术有限公司合成。
1.2 方法
1 .2.1 内生菌分离 取爬山虎的茎用自来水洗净后 , 75%乙醇消毒表面 1 m in, 清洗后 , 再用 1 g L -1
HgC l2表面消毒 1m in, 无菌水冲洗 3次。以无菌刀片切成 1 cm小段 , 贴于 PDA固体培养基表面 , 28℃
培养 , 逐日观察 , 根据镜检菌落形态和颜色挑取单菌落 , 按常规方法纯化后保存。将组织消毒后无菌水
清洗的最后 1次清洗液 0.1mL涂于培养基表面 , 检验样品表面消毒是否彻底。
1 .2.2 GAD产生菌的筛选 分别接 1环内生菌到马铃薯综合培养基中 , 于 30 ℃、 120 r m in-1摇床培
养 36 h。将细胞培养液离心 (5 000 g , 20 m in)收集菌体 , 以生理盐水洗涤菌体 2次。按湿质量加入
10倍的 10 g L - 1谷氨酸钠溶液 , 调节到 pH 4.7, 于 30℃、 120 r m in- 1振荡反应 24 h , 离心收集上清
液 。取上清液 2 mL, 加入 1滴混合酸碱指示剂 (甲基红 +亚甲蓝 , pH <5.4呈红紫色 , pH >5.4呈绿
色 )[ 5] , 初步判断溶液变绿的具有 GAD活性 , 进一步对颜色变绿的转化液采用纸层析 (展开剂为 V
(正丁醇 ) ∶V (乙酸 ) ∶V (水) =12∶3∶5)和 MS对 GABA进行定性分析 。参照文献 [ 6] 采用高效液
相色谱法对转化液中的 GABA进行定量分析。
1 .2.3 LC M/ S测定条件 液相色谱流动相组成为 V (乙腈 ) ∶V (甲酸 ) ∶V (水 ) =50∶0.05∶49.95,
等梯度洗脱;MS采用电喷雾离子化 , 正离子扫描模式 , 质荷比 (m /z)范围为 10 ～ 1 000;典型脱溶剂
装置电压为 25V , 温度为 200 ℃;探针电压为 3.5 kV;N 2流量为 5 L m in-1;加热块温度为 150 ℃。
1 .2.4 形态结构观察及生理生化试验 参照文献 [ 7] 。
1 .2.5 16S rDNA序列分析 16S rDNA的扩增参照文献 [ 4] , 由上海生工生物工程技术服务有限公司
进行纯化和测序 。将 16S rDNA序列与 GenB ank+EMBL+DDBJ+PDB数据库中的核苷酸序列进行同源
性分析 (h ttp: / /www.ncbi.nlm.nih.gov /b last)[ 8] , 并选择产芽孢的杆状细菌各个属的模式种及已报道
产 GAD的细菌和巨大芽孢杆菌的 16S rDNA核苷酸序列 , 利用 B ioEd it_ 7.0.0软件的 C lustalW程序进
行多重比对 , 然后利用 C lusta l X1.8软件采用 N eighbour-jo ining方法以 E .coli O 157∶H7为外群 (ou t-
group)构建系统发育树 , 并进行 bootstrap分析 , 重复次数为 1 000次。
1 .2.6 GAD制备及酶活力测定 将湿菌体 3 g悬浮到 30 mL pH 4.7的 MacIlvaine缓冲液 (0.2 mol
L
- 1), 冰浴中超声波破碎 (400W , 工作 5 s间隔 15 s, 全程 90 m in), 4 ℃放置过夜 , 离心收集上清液
(6 250 g , 20 m in), 再用 80%饱和度的 (NH 4)2SO4沉淀 GAD , 将沉淀溶解于 15 mL pH 4.7的 MacIl-
va ine缓冲液 (0.2mo l L -1), 然后于 pH 4.7的 MacIlvaine缓冲液 (0.05mo l L - 1)中 4 ℃下充分透
析 , 作为 GAD酶液。参照文献 [ 6] 测定 GAD活力 , 以相对酶活力 (%)表示酶活力。
2 结果与分析
2.1 产 GAD植物内生菌分离 、 筛选
样品表面消毒鉴定结果显示 , 样品表面消毒彻底 , 爬山虎的茎在 PDA平板培养基上所生长的微生
123 第 2期 杨胜远等:爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性
物为植物内生菌 。共分离到 5株细菌 , 只有 EJC -1的转化液在加入混合指示剂后颜色变绿 (图 1), 经
过纸层析分析 , 存在与 GABA标准品 Rf一致的茚三酮显色斑点 (图 2)。进一步通过 MS对转化液的分
子量组成进行分析显示 , 转化液中存在 GABA (m /z 104, [M +H ] +)和 GABA-N a (m /z 127, [M +
H ] +) (图 3)。由此证明 EJC - 1具有 GAD活性 。通过 HPLC测定 , 转化液中 GABA浓度为 (3.07±
0.23 ) mmo l L -1。
图 1 菌株 EJC -1转化反应前后混合酸碱指示剂的色泽变化
F ig. 1 Co lo r change of the comp lex pH ind ica to r in the b io trans-
form ation so lu tion o f stra in EJC -1
1. pH 4.7 L -谷氨酸溶液 pH 4.7 of L-g lutam ate; 2. 转化反应前 Before
the biotran sform ation react ion;3. 转化反应后 A fter the b iotransform at ion reaction
图 2 菌株 EJC -1转化液纸层析图
F ig. 2 Paper chrom atog raphy o f the b io transfor-
mation so lu tion o f stra in EJC -1
1. 菌株 E JC - 1转化液 B iotransform ation solu tion of
strain EJC - 1;2. GABA; 3. L -G lu+GABA
图 3 菌株 EJC -1转化液的 MS分析图
F ig. 3 MS spectrum o f the b io transfo rma tion so lu tion o f stra in EJC -1
2.2 菌株 EJC -1的形态特征
在 PDA平板上 , E JC - 1幼龄时期菌落圆形 、
突起 、 表面光滑 、 有光泽 、 湿润 、 半透明 、 黏稠 、
易挑取 (图 4 - A)。随培养时间的延长菌落黏性
降低 , 表面光泽变暗 , 长时间培养变成浅褐色 , 易
挑取。用营养肉汤液体试管培养 , 菌体聚集形成沉
淀 。采用碱性复红简单染色 , 显微镜下观察到
E JC - 1菌体两端钝圆 , 菌体较大 , 培养 18 h菌体
大小在 (3.8 ～ 4.0) μm ×(1.8 ～ 2.0) μm , 多成
对出现 。美兰染色观察 , 细胞内有多个不着色的颗
粒 , 革兰氏染色阳性 , 部分两端着色较重 , 开始时
图 4 菌株 EJC -1菌落形态和细胞形态
F ig. 4 Co lony and ce llmorpho logy o f stra in EJC -1
A. 菌落形态 C olony m orphology;B. 细胞形态 C ellm orphology
(×1 000)
124 南 京 农 业 大 学 学 报 第 30卷
芽孢近端生 、圆形 , 随着培养时间的延长 , 芽孢扩大呈椭圆形 , 芽孢囊不膨大 , 无伴孢晶体 (图 4 -
B)。根据文献 [ 7] 初步判断 EJC -1属于芽孢杆菌属。
2.3 菌株 EJC -1的生理生化特性
参照文献 [ 7] 对菌株 EJC -1进行生理生化试验 , 结果见表 1。巨大芽孢杆菌利用木糖产酸 [ 7] , 但
菌株 EJC -1却产碱 , 在耐盐生长性质上也与报道有一定差别 , E JC - 1在含 70 g L -1 NaC l的培养基中
仍能生长。根据最大相似原则 , 参照文献 [ 7] 初步判定 E JC - 1为 Bacillusmegaterium 。
表 1 EJC -1的生理生化试验结果
Tab le 1 Resu lts o f physio log ica land b iochem ica l tests o f stra in EJC -1
特征 Characterist ics 结果 Resu lts 特征 C haracteristics 结果 Resu lts
接触酶 Catalase act ivity + 硝酸盐还原 N itrate reduction -
厌氧生长 Anaerob ic grow th - 需要 NaC l和 KC lNaC l and KC l needing -
V-P测定 V ages-Prosk auer - 需要尿素 U rea need ing -
V-P培养物终 pH Vages-P roskauer (pH) 6. 00 pH 6. 8营养肉汤生长 G row th in b ro thm edium (pH 6. 8) +
利用 D -葡萄糖产酸 A cid from D-glu cose + pH 5. 7营养肉汤生长 G row th in b ro thm edium (pH 5. 7) +
利用 L -阿拉伯糖产酸 A cid from L-arabinose + 2 g L - 1 NaC l生长 G row th in 2 g L - 1 NaC l +
利用 D -木糖产酸 A cid from D-xy lose - 5 g L - 1 NaC l生长 G row th in 5 g L - 1 NaC l +
利用 D -甘露醇产酸 A cid from D-m anni tol + 7 g L - 1 NaC l生长 G row th in 7 g L - 1 NaC l +
葡萄糖产气 G as produ ct ion from D-g lucose - 10 g L - 1 NaC l生长 G row th in 10 g L -1 NaC l -
酪蛋白水解 C asein hyd rolysis + 5℃生长 G row th at 5℃ -
明胶水解 G lut in hydro lysis + 10℃生长 G row th at 10℃ -
淀粉水解 Am ylolysis + 30℃生长 G row th at 30℃ +
利用柠檬酸盐 C i trate u tilization - 40℃生长 G row th at 40℃ +
利用丙酸盐 Prop ionate u tilization - 50℃生长 G row th at 50℃ -
酪氨酸水解 Tyrosine hyd rolysis + 形成吲哚 Indo l produ ction -
苯丙氨酸脱氨酶 Pheny lalanine deam inase + 形成二羟基丙酮 D ihyd roxyacetone produ ct ion -
卵黄磷脂酶 Lecithin hydrolase + 革兰氏阳性 G ram strain +
2.4 菌株 EJC -1的 16S rDNA序列分析
菌株 EJC - 1的 16S rDNA扩增
核苷酸序列为 1 457 bp, 已在 G en-
Bank中登记 , 登记号为 DQ093581。
经与 GenBank +EMBL +DDB J +
PDB数据库中报道的 16S rDNA核
苷酸序列比对 , 菌株 EJC -1的 16S
rDNA核苷酸序列与巨大芽孢杆菌
(Bacillus megaterium)的 16S rDNA
核苷酸序列的同源性最高 , 达到
99%。
选择产芽孢杆状细菌的不同属
的模式菌株和部分产 GAD的细菌
16S rDNA核苷酸序列构建系统发
育树 , 如图 5所示 , EJC - 1与
B.megaterium 位 于 同 一 簇 群 ,
1 000次 bootstrap分析完全支持该
图 5 以 16S rDNA序列为基础的系统发育树
F ig. 5 Phylogene tic re lationsh ip based on 16S rDNA
分枝结点数值表示 1 000次 bootstrap分析所支持次数;线段 (0. 02) 表示 0. 02序列
差异的分枝长度。 The percen tages of 1 000 bootstrap replicates are show n near the relevan t
nodes. The bar ind icates 2-nucleotide sub stitu tions p er 100 nu cleotides in 16S rDNA.
分枝;与其他产芽孢杆状细菌和产 GAD细菌的发育关系相对较远 。
结合 EJC - 1的形态特征 、 生理生化特征和 16S rDNA序列分析 , 将 EJC - 1鉴定为巨大芽孢杆菌
(B .megaterium )。
2.5 温度和 pH对 B.megaterium EJC -1 GAD活性的影响
在 M acIlvaine缓冲液 (pH 4.7, 0.2mo l L- 1)中于不同温度条件下测定 GAD活力 , 结果 GAD的
最适反应温度为 50 ℃, 高于 Lactobacillus brevis和 Rhodotorula g lu tinis的 GAD最适反应温度 (30
125 第 2期 杨胜远等:爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性
℃)[ 9 - 10] 。将 GAD在 M acIlva ine缓冲液中 (pH 5.6 , 0.2 mol L - 1)分别于 40、 50、 60、 70和 80℃保
温 30m in, 再于 50 ℃测定 GAD的酶活力 , 结果当处理温度低于 40℃时可以保持 92%活力 , 当处理温
度低于 50℃时可以保持 87%活力 (图 6), 说明 B.megaterium EJC - 1 GAD的热稳定性较好。
在 50 ℃于 pH 3.6 ～ 6.4的 M acIlva ine缓冲液 (0.2mo l L -1)中测定 GAD活力 , 结果 GAD在 pH
5 ～ 6范围内活性较高 , pH超过 6活力急速下降 , 最适反应 pH为 5.6。将 GAD分别在 pH 3、 4、 5、 6、
7和 8的 M acIlvaine缓冲液 (0.05 mol L- 1)中于 30 ℃处理 12 h, 然后在 pH 5.6M acIlvaine缓冲液
(0.2mo l L -1)中于 50℃测定 GAD残余活力 , 结果表明 GAD在 pH 4 ～ 6范围内较稳定 , 当 pH超过 6
则非常不稳定 , 已丧失 80%的酶活力 (图 7)。
图 6 温度对 B.mega ter ium EJC -1 GAD活性的影响
F ig. 6 Effects o f tem pera ture on B.mega te rium EJC - 1
GAD ac tiv ity
●温度对 GAD反应活性的影响 E ffects of tem perature on the reaction
activity ofGAD;○温度对 GAD稳定性的影响 E ffects of temperature on
the stabi lity of GAD
图 7 pH对 B.mega ter ium EJC -1 GAD活性的影响
F ig. 7 E ffec ts of pH on B.mega te rium EJC - 1 GAD
activ ity
●pH对 GAD反应活性的影响 E ffects of pH on the reaction
activity ofGAD;○ pH对 GAD稳定性的影响 E ffects of pH on the
stab ility ofGAD
2.6 二价金属离子对 B.megaterium EJC -1 GAD活性的影响
分别在反应液中加入终浓度为 2.5 mmo l L -1的二价金属离子 , 然后于 pH 5.6和 50 ℃下测定 GAD
活力 , 结果 Mg2 +对 GAD活力有促进作用 , 酶活力提高了 13.85%。 Fe2+、 Cu2+和 Zn2 +对 GAD活力有
抑制作用 , 而 Ca2 +、 Mn2+和 Co2 +对 GAD活力影响不大 (表 2)。
表 2 二价金属离子对 B.mega te rium EJC -1 GAD活性的影响
Tab le 2 Effects o f b iva len tm e ta llic ions on GAD activ ity o fB.mega te rium EJC -1
二价金属离子 (2. 5 mm ol L - 1)
B iva len tm etallic ions
相对酶活性 /%
Relative act ivity
二价金属离子 (2. 5mm ol L- 1)
B ivalentm etallic ion s
相对酶活性 /%
Relative activity
Fe2+ 81. 00 Mg2+ 113.85
C u2+ 52. 33 M n2+ 103.89
Zn2+ 81. 81 C o2+ 98.03
C a2+ 104. 66
3 讨论
B.megaterium通常被认为是土壤微生物 , 但宋子红等[ 11]对花生内生菌的种群研究及动态分析表明
巨大芽孢杆菌是花生的主要内生细菌之一 , 高增贵等[ 12]也发现巨大芽孢杆菌是玉米内生菌的主要种群 。
本研究通过严格消毒和检验 , 在爬山虎的茎中也分离到了 B .megaterium , 说明 B .megaterium 也是植物内
生细菌的一个种群。经过对 B.megaterium E JC - 1的生长特性研究发现 , 该菌株的最适生长温度为 33
℃, 与土壤来源的 B.megaterium 的最适生长温度一致 [ 13] , 与植物的生理温度较接近 , 这可能是
B.megaterium能成为多种植物内生菌主要种群的原因之一 。由于与植物的长期共生 , 在一些生长特性和
生化性质上已经发生了较大变化 , 如 B .m ega terium EJC - 1在 pH 13的强碱性条件下仍能生长 , 利用木
糖产碱而不是产酸 , 这与土壤 B.megaterium的性质已有明显差异。
126 南 京 农 业 大 学 学 报 第 30卷
Foerster等 [ 14 -16]发现在 B.megaterium芽孢萌发的过程中 , 氨基酸池中的谷氨酸含量迅速下降 , GA-
BA含量增加;虽然在休眠状态 , 未见芽孢具有 GAD活性 , 但对孢子采用声波和热激处理 , 发现处理后
的芽孢产生了较高的 GAD活性 , 随着芽孢的萌发 , GAD活性下降 , 表明 GAD与芽孢的萌发有关 。对
B.megaterium EJC - 1的生长周期研究表明:培养 6 h进入对数生长期 , 40 h后进入稳定期 , 50 h后进
入衰亡期。在对 GAD产生菌的筛选中 , 本研究所测定的细胞为培养 36 h的对数期细胞 , 结果表明
B.megaterium EJC - 1的营养细胞也具有很强的 GAD活性 , 说明 GAD不仅与芽孢的萌发有关 , 可能还
存在其他的生理作用 , 有待进一步研究。
虽然早在 1971年就已发现 B.megaterium中存在 GAD , 关于 B.megaterium GAD的酶学性质却尚未见
报道。不同来源的 GAD在性质和结构上 , 存在很大的差异。研究发现 B .megaterium EJC - 1 GAD的酶
反应 pH和酶活性稳定 pH均在弱酸性条件下 , 与其他来源的 GAD相似 [ 9 -10, 17 -21] , 因此在反应 pH和 pH
稳定性方面 , 不同来源的 GAD性质基本一致。
在细胞中 , 谷氨酸在 GAD的催化下发生不可逆脱羧作用 , 将使转化液的 pH升高 , 因此可以利用
pH指示剂快速检测这一变化。在研究中 , 利用 pH指示剂法对 51株微生物进行 GAD筛选 , 同时采用纸
层析法进行验证 , 两种方法获得的结果完全吻合 (结果另文发表 ), 而 pH指示剂法更简单 、快捷 。因
此 pH指示剂法可以满足大量筛选 GAD产生菌的需要。
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责任编辑:沈 波
127 第 2期 杨胜远等:爬山虎内生菌的鉴定及其谷氨酸脱羧酶酶学特性